氣相色譜法測(cè)定西葫蘆中百菌清殘留量的不確定度評(píng)定

李盼盼 史曉華 李嘉業(yè) 張慧敏

摘 要：參照NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》，通過(guò)建立 數(shù)學(xué)模型，對(duì)氣相色譜法測(cè)定西葫蘆中百菌清殘留量的不確定度進(jìn)行評(píng)定。分析量化了樣品稱(chēng)樣量、提取溶液體積、標(biāo)準(zhǔn)溶 液配置、回收率、測(cè)量重復(fù)性、氣相色譜儀6個(gè)不確定度分量，計(jì)算出合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度。結(jié)果表明，西葫蘆 中百菌清添加量為0.1 mg/kg時(shí)，其測(cè)定結(jié)果為0.1069 mg/kg，擴(kuò)展不確定度為0.0050 mg/kg。影響不確定度的主要因素是標(biāo) 準(zhǔn)溶液配置、回收率、測(cè)量重復(fù)性和氣相色譜儀。

關(guān)鍵詞：西葫蘆，百菌清，不確定度，氣相色譜法

DOI編碼：10.3969/j.issn.1002-5944.2024.06.031

0 引 言

百菌清（chlorothalonil）是一種廣譜保護(hù)性殺 菌劑，對(duì)多種作物的真菌病害具有預(yù)防作用，由于 其良好的體表黏著性，不易被水沖刷，因此藥效穩(wěn) 定，殘效期長(zhǎng)，世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)將 百菌清列為2B類(lèi)致癌物[1]。

近年來(lái)，隨著人們健康意識(shí)的逐步提高，對(duì)食 用性農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題的關(guān)注度也越來(lái)越高[2]。 食品檢驗(yàn)作為保障食品質(zhì)量安全的重要手段，對(duì)其 檢驗(yàn)檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性也提出了更高的要求[3]。但 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的諸多不確定因素，使測(cè)量值一定程度 上偏離真實(shí)值，而不確定度是表征合理地賦予被測(cè) 量的量值分散程度，與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)，因此進(jìn)行不確定度評(píng)定，對(duì)測(cè)量不確定度引起的誤判 風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行合理預(yù)估，可以定量評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確 度，反映檢測(cè)過(guò)程中各因素對(duì)結(jié)果不確定度的影響 程度，使檢測(cè)結(jié)果更具可信性和可比性[4-8]。尤其是 當(dāng)檢測(cè)值與最大殘留限量值接近時(shí)[9]，通過(guò)不確定 度評(píng)定可以更科學(xué)地對(duì)檢測(cè)值進(jìn)行判定，最大限度 地減少合規(guī)判定中可能存在的爭(zhēng)議，提升可食性農(nóng) 產(chǎn)品檢驗(yàn)質(zhì)量的管控力度和管理水平，為確保食品 安全助力[8，10-12]。

不確定度評(píng)定分為A類(lèi)評(píng)定和B類(lèi)評(píng)定[13]。A類(lèi) 評(píng)定是對(duì)在規(guī)定測(cè)量條件下測(cè)得的量值用統(tǒng)計(jì)分 析的方法進(jìn)行測(cè)量不確定度分量的評(píng)定，評(píng)定方 法有貝塞爾公式法和極差法兩種。陳凌峰[14]研究發(fā) 現(xiàn)，使用貝塞爾公式估計(jì)的總體方差總是無(wú)偏的， 不會(huì)給測(cè)量結(jié)果的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度帶來(lái)原理性 誤差；而用極差法估計(jì)的總體標(biāo)準(zhǔn)差雖是無(wú)偏的， 但估計(jì)的總體方差偏大，導(dǎo)致最終測(cè)量結(jié)果的合 成標(biāo)準(zhǔn)不確定度偏大。因此在此選擇貝塞爾公式 法進(jìn)行A類(lèi)評(píng)定。B類(lèi)評(píng)定是根據(jù)基于經(jīng)驗(yàn)或其他 信息獲得的概率密度函數(shù)對(duì)測(cè)量不確定度分量進(jìn) 行的評(píng)定[15]。

依據(jù)JJF 1059.1—2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與 表示》[13]，參考農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761—2008《蔬 菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲 酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》[16]，對(duì)西葫蘆中百菌清 殘留量的不確定度進(jìn)行評(píng)定，以期為西葫蘆中百菌 清農(nóng)藥殘留的檢測(cè)提供質(zhì)量控制的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

西葫蘆購(gòu)自當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液 （1000 μg/mL，壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司），乙腈 （分析純，天津市永大化學(xué)試劑有限公司）、正己烷 （色譜純、色譜純，西隴科學(xué)股份有限公司）、丙酮 （色譜純、分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）， 氯化鈉（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

7 8 9 0 B 氣 相 色 譜 儀（配 E C D 檢 測(cè) 器，美 國(guó) Agilent公司），色譜柱：HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.25 mm，美國(guó)Agilent公司），電子天平（福州 科迪電子技術(shù)有限公司），四聯(lián)自動(dòng)清洗勻漿機(jī)（美 國(guó)海斯特儀器公司），氮吹儀（美國(guó)Organomation 公司），10 mL單標(biāo)線吸量管（天津玻璃儀器廠），5 mL單標(biāo)線吸量管（天津玻璃儀器廠），50 mL容量 瓶（天津玻璃儀器廠），1000 μL可調(diào)移液器（賽默 飛世爾科技有限公司），可調(diào)瓶口分液器（德國(guó)普蘭 德有限公司），弗羅里矽固相萃取小柱（規(guī)格，美國(guó) Agilent公司），濾膜（規(guī)格0.22 μm，天津博納艾杰 爾科技有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

參考農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761—2008《蔬菜和水 果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi) 農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》[16]，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際條件適當(dāng) 調(diào)整，進(jìn)行樣品前處理。

提取：準(zhǔn)確稱(chēng)取25.00 g西葫蘆樣品于廣口瓶 中，用可調(diào)瓶口分液器加入50.0 mL乙腈，勻漿機(jī)高 速勻漿2 min后，過(guò)濾至裝有7 g氯化鈉的100 mL具 塞量筒中，蓋上塞子，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜 置30 min，使乙腈和水相分層。用A級(jí)10 mL單標(biāo)線 移液管移從100 mL具塞量筒中準(zhǔn)確吸取10.00 mL乙 腈相溶液于15 mL刻度離心管中，80 ℃氮吹至近干， 加入2.0 mL正己烷復(fù)溶，待凈化。

凈化：將弗羅里矽柱依次用5 mL丙酮+正己烷 （10+90）、5 mL正己烷預(yù)淋洗，棄去淋洗液，當(dāng)溶 劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即加入待凈化液， 收集洗脫液于15 mL刻度離心管中，用5 mL丙酮+ 正己烷（10+90）淋洗離心管后倒入弗羅里矽柱，并 重復(fù)1次。將盛有洗脫液的離心管于50 ℃氮吹至近 干，用A級(jí)5 mL單標(biāo)線移液管移加入5.00 mL正己 烷，混勻，過(guò)膜后測(cè)定。

3 結(jié) 論

（1）當(dāng)稱(chēng)樣量為25.0 0 g，k =2（置信概率為 95%），氣相色譜法測(cè)定西葫蘆中百菌清含量結(jié)果 報(bào)告為（0.1069±0.0050）mg/kg。

（2）通過(guò)各分量評(píng)定發(fā)現(xiàn)，測(cè)量不確定度主要 來(lái)源于標(biāo)準(zhǔn)溶液配置、回收率、測(cè)量重復(fù)性、氣相色 譜儀四個(gè)方面，其他方面，尤其是樣品稱(chēng)量，對(duì)測(cè)量 不確定度的影響較小。

（3）本測(cè)量條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液配置對(duì)測(cè)量不確定 度影響最大。與沈瑋氣相色譜法測(cè)定黃瓜中腐霉利含 量的不確定度評(píng)定[15]、金雅慧氣相色譜法測(cè)定黃精中 甲胺磷殘留量的不確定度評(píng)定結(jié)果一致[22]。本方法采 用了單點(diǎn)校正法，與標(biāo)準(zhǔn)曲線法相比，減少了標(biāo)準(zhǔn)溶 液稀釋過(guò)程產(chǎn)生的不確定分量和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合過(guò)程 產(chǎn)生的不確定度分量。但單點(diǎn)校正法作為外標(biāo)法的一 種，實(shí)際是利用原點(diǎn)作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的另一個(gè)點(diǎn)，且標(biāo) 準(zhǔn)溶液的濃度與被測(cè)樣品的濃度必須相近，才能保證 定量結(jié)果的準(zhǔn)確度[23-25]。因此，單點(diǎn)校正法雖簡(jiǎn)便快 捷，但其測(cè)定范圍較窄，應(yīng)用時(shí)要注意其適用條件。

（4）回收率對(duì)測(cè)量不確定度的影響次之。加 標(biāo)回收是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量監(jiān)督和內(nèi)部質(zhì)量控制的方 法之一，加標(biāo)回收率應(yīng)符 合檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)或者GB/ T 27404—2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢 測(cè)》的要求[26]。標(biāo)準(zhǔn)化方法下，過(guò)程重復(fù)性強(qiáng)，加標(biāo) 回收率體現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)人員前處理過(guò)程的規(guī)范化水平。 目前回收率不確定度的評(píng)定普遍是對(duì)平均回收率 的不確定度評(píng)定，但研究發(fā)現(xiàn)，回收率不確定度是依據(jù)過(guò)程和模型的計(jì)算結(jié)果，包含了與回收率具有 復(fù)函數(shù)關(guān)系的所有因素，平均回收率的不確定度只 是回收率不確定度的一個(gè)分量，只有當(dāng)這個(gè)分量占 絕對(duì)優(yōu)勢(shì)才可代表回收率總不確定度[27]。因此，關(guān) 于回收率不確定度評(píng)定還需進(jìn)一步優(yōu)化。

（5）測(cè)量重復(fù)性和氣相色譜儀對(duì)測(cè)量不確定 度的影響也較大。說(shuō)明在整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中，要注意 好樣品、溶液的均勻性，實(shí)驗(yàn)人員要規(guī)范操作，減少 人為誤差，氣相色譜儀要做好定期的維護(hù)保養(yǎng)，確 保儀器狀態(tài)穩(wěn)定。

參考文獻(xiàn)

張麗霞，謝駿謙，梁志生，等.氣相色譜法測(cè)定植物源性食品 中百菌清農(nóng)藥殘留的不確定度評(píng)估[J].分析儀器，2018，（4）： 144-148.

呂玉霞.食用植物性農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究[J].湖北農(nóng)機(jī)化， 2019，（22）：19.

韓利杰.食品檢驗(yàn)在保障食品安全中的重要性及其局限 性[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊，2019，29（5）：131-132.

莊件兵，袁艷麗.氣相色譜法測(cè)定番茄中腐霉利殘留量的不 確定度評(píng)定[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2018，9（6）： 1455-1459.

陳科.氣相色譜法測(cè)定大豆油中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的不確定 度評(píng)定[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)， 2017，8（6）： 2251-2256.

宋家玉，焦燕妮，劉文杰，等.氣相色譜法測(cè)定茶葉中γ-666殘 留量的不確定度評(píng)定[J].化學(xué)分析計(jì)量，2021，30（6）：85 -88.

劉納，高琴，鐘攀.氣相色譜法測(cè)定黃瓜中聯(lián)苯菊酯的不確 定度評(píng)定[J].四川農(nóng)業(yè)科技， 2019（1）：47-49.

王宏濤，王漢斌，陳曉懷，等.測(cè)量不確定度引起的批量產(chǎn) 品檢驗(yàn)誤判風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[J].計(jì)量學(xué)報(bào)， 2017，38（5）：559-562.

逄瑜，于新蘭， 李海芳，等. 農(nóng)藥殘留測(cè)定結(jié)果不確定度評(píng) 定方法指南介紹[J]. 中國(guó)新藥雜志， 2018，27（1）：17-21.

張麗芳，張亮，杜瑞煥，等.氣相色譜法測(cè)定蔬菜中農(nóng)藥殘留 量的測(cè)量不確定度評(píng)定[J].計(jì)量學(xué)報(bào)，2022，43（7）：965-972.

唐桂新.測(cè)量不確定度在食品檢驗(yàn)檢測(cè)中的應(yīng)用探究[J]. 中國(guó)新技術(shù)新產(chǎn)品，2020，（3）：50-51.

翟洪穩(wěn)，范素芳，王娟，等.測(cè)量不確定度在食品檢驗(yàn)中的應(yīng) 用及進(jìn)展[J]. 食品科學(xué)，2021，42（5）：314-320.

測(cè)量不確定度評(píng)定與表示：JJF 1059.1—2012[S].

陳凌峰. 標(biāo)準(zhǔn)不確定度A類(lèi)評(píng)定中極差法的深入討論[J]. 計(jì)量學(xué)報(bào)， 2019，40（2）：347-352.

沈瑋，錢(qián)夢(mèng)逸，黃昕潤(rùn)，等.氣相色譜法測(cè)定黃瓜中腐霉利含 量的不確定度評(píng)定[J].分析儀器， 2021，（5）：90-94.

蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸 酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定：NY/T 761—2008[S].

電子天平檢定規(guī)程：JJG 1036—2022[S].

常用玻璃量具檢定規(guī)程：JJG 196—2006[S].

移液器檢定規(guī)程：JJG 646—2006[S].

朱毅忠，羅龍，古麗努爾·沙馬力，等.氣相色譜法測(cè)定果蔬 汁中甲氰菊酯和林丹殘留量的不確定度評(píng)定[J].食品安 全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2021，12（5）：1805-1811.

賀玲，段書(shū)源，戴崔云，等.氣相色譜法測(cè)定普通白菜中毒 死蜱含量的不確定度評(píng)定[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)， 2019，10（10）：3085-3090.

金雅慧，俞華芬，李羅飛，等.氣相色譜法測(cè)定黃精中甲胺磷 殘留量的不確定度評(píng)定[J].現(xiàn)代農(nóng)藥， 2022，21（2）：56-61.

李寧，郭健，王倩，等.單點(diǎn)與多點(diǎn)校正法的對(duì)比及其不確定 度來(lái)源評(píng)估[J].低溫與特氣， 2008，26（6）：37-40.

田振英.單點(diǎn)校正法在氣相色譜分析中的應(yīng)用[J].山西化 工， 2006，26（5）：65-66.

劉紹仁，葉紀(jì)明，張百臻.淺談單點(diǎn)校正法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法及其 在農(nóng)藥分析中的應(yīng)用[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理， 1999，20（2）：12-15.

志新.食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)部質(zhì)量控制方式分析[J].食品 安全導(dǎo)刊， 2021，（31）：31-33.

占永革，龔劍，黃湘燕.關(guān)于化學(xué)分析回收率不確定度 評(píng) 估公 式的思考 [ J ] .廣州大學(xué) 學(xué)報(bào)（自然 科學(xué)版）， 2014，13（3）：40-46.

作者簡(jiǎn)介

李盼盼，通信作者，碩士研究生，工程師，主要從事農(nóng)產(chǎn)品檢 測(cè)檢測(cè)工作。

（責(zé)任編輯：袁文靜）