鴨梨花粉的采集貯藏及活力檢測(cè)方法

張國(guó)棟 李貴美 趙永飛

（山東省聊城市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，聊城 252000）

梨作為典型的配子體型自交不親和果樹(shù)，絕大部分的品種自花授粉不結(jié)實(shí)或者結(jié)實(shí)率很低，生產(chǎn)中果農(nóng)通常采用配置授粉樹(shù)或者人工輔助授粉的方式來(lái)提高果實(shí)品質(zhì)和產(chǎn)量[1]。鴨梨花粉管較長(zhǎng)，花粉萌發(fā)能力較強(qiáng)，適合作為授粉品種樹(shù)[2]，且冠縣地區(qū)鴨梨花期在3月下旬，早于其他梨品種花期3～4 d，使人工采粉授粉在時(shí)間上做到了無(wú)縫銜接。當(dāng)?shù)毓r(nóng)通過(guò)自采或者合采的方式，自制花粉用作人工授粉，而鴨梨花粉采集作為一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對(duì)梨果生產(chǎn)的最終經(jīng)濟(jì)效益有著較大影響。

1 梨花粉的采集制備

1.1 梨花的采摘

梨花采摘應(yīng)在開(kāi)花前1～2 d至初花期，過(guò)早采摘，花粉的發(fā)育不成熟，萌發(fā)率低；過(guò)晚采摘，花朵已開(kāi)放開(kāi)始散粉。采摘時(shí)選擇大鈴鐺花和初展花，使用編織袋或布袋進(jìn)行盛裝，避免使用透氣性差的塑料袋，花朵自樹(shù)上采摘后最好在24 h內(nèi)完成花藥采集，堆放過(guò)程中不宜太厚，避免因堆積產(chǎn)熱影響花粉活力。

1.2 花藥的采集

采摘量大時(shí)，可采用破碎機(jī)進(jìn)行破碎；采摘量小時(shí)，可以用手各持一花進(jìn)行對(duì)搓，使花藥脫落。花朵破碎后過(guò)粗篩，使花瓣、花托、花梗與花藥分離。為使花藥盡量干凈，可選用10～16目篩子，通過(guò)多次過(guò)篩，分離出破碎的花絲，放在牛皮紙板或銅版紙上進(jìn)行散粉，保持室溫20～25 ℃，濕度70%～80%[3]。

1.3 花粉的篩取

在花藥陰晾過(guò)程中，顏色會(huì)逐步由紫色變?yōu)榈S色，并散出花粉，形狀為顆粒狀，且可以聞到明顯的魚(yú)腥味。散粉時(shí)間大概在兩天左右，最后選用60～100目的篩子進(jìn)行篩取。

1.4 花粉的貯藏

花粉活力受溫度和濕度影響較大，在室溫條件下貯藏的花粉發(fā)芽率會(huì)迅速下降，2個(gè)月內(nèi)就會(huì)全部失去活力[4]。制取的花粉宜即采即用，在花粉干燥后，使用白紙或硫酸紙制作的紙袋進(jìn)行分包，或裝入棕色廣口瓶?jī)?nèi)放在低溫、干燥和避光的地方暫時(shí)存放[5]。

2 花粉活力檢測(cè)方法

花粉作為雄性高等植物的配子體，在植物的遺傳、育種、進(jìn)化和生殖等過(guò)程中扮演著不可或缺的角色[6]，花粉萌發(fā)能力的強(qiáng)弱直接決定著梨生產(chǎn)效益或雜交育種工作的成敗[7]。花粉使用前，需對(duì)花粉的生活力進(jìn)行檢測(cè)，以確保正常的生產(chǎn)、育種需要。因此掌握花粉生活力的檢測(cè)方法不論對(duì)梨果生產(chǎn)還是對(duì)雜交培育新品種都有著重要意義，常見(jiàn)的方法為染色法和離體培養(yǎng)法。

2.1 染色法

2.1.1 藍(lán)黑墨水染色法姜雪婷等[8]通過(guò)比較4種花粉生活力的檢測(cè)方法認(rèn)為藍(lán)墨水染色法測(cè)定值可以用來(lái)快速測(cè)定梨花粉生活力。具體操作為：首先在載玻片上滴一滴蒸餾水或超純水，再滴一滴藍(lán)黑墨水，用鑷子或細(xì)玻璃棒攪拌均勻，用頭發(fā)絲或毛筆尖蘸取少量花粉均勻撒在藍(lán)黑墨水中，蓋上蓋玻片靜置5 min左右，在顯微鏡10X視野下進(jìn)行觀察。若花粉粒為無(wú)色，則表明該花粉粒具有生活力；若花粉粒被染為藍(lán)黑色，則視該花粉粒為無(wú)生活力或發(fā)育不良。觀察3個(gè)不同區(qū)域的視野，每個(gè)視野要求花粉粒總數(shù)在70粒以上，通過(guò)計(jì)算平均值，來(lái)統(tǒng)計(jì)花粉的生活力[6]。

2.2.2 TTC染色法氯化三苯基四氮唑作為一種氧化還原染料，其基本原理是花粉在萌發(fā)過(guò)程中，其中的脫氫酶能夠引起氧化還原反應(yīng)，有生活力的花粉會(huì)因還原作用變成紅色，無(wú)生活力的花粉不變色[9]。具體操作為：用頭發(fā)或毛筆尖絲蘸取少量花粉置于載玻片凹槽內(nèi)，加1～2滴TTC溶液，蓋上蓋玻片，置于35 ℃恒溫箱內(nèi)15 min，在低倍顯微鏡下觀察。被染料染成紅色的花粉，生活力較強(qiáng)，淡紅色次之，無(wú)色的即為不具有活力或者發(fā)育不良。觀察5個(gè)不同區(qū)域的視野，統(tǒng)計(jì)100粒，然后計(jì)算花粉生活力，重復(fù)3次[10]。

2.3 離體萌發(fā)測(cè)定法

離體萌發(fā)測(cè)定法是將花粉分離后，在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，然后通過(guò)顯微鏡觀察花粉管萌發(fā)生長(zhǎng)的狀況來(lái)判斷其生活力的大小，可分為液體培養(yǎng)法和固體培養(yǎng)法兩種，檢測(cè)效果與其他方法相比較準(zhǔn)確[11]。

2.3.1 液體培養(yǎng)基法按照10%蔗糖+0.01%硼酸的比例配置液體培養(yǎng)基，將液體培養(yǎng)基用吸管滴入載玻片的凹槽內(nèi)，然后用頭發(fā)絲或者毛筆等工具，蘸取少量花粉均勻撒在培養(yǎng)基上，之后將其放置于墊有濕紗布的培養(yǎng)皿中，加蓋置于23～25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4 h。在100X的普通光學(xué)顯微鏡下觀察3個(gè)視野的花粉萌發(fā)率，每個(gè)處理觀察200粒。以花粉管的生長(zhǎng)長(zhǎng)度超過(guò)花粉粒的直徑視為萌發(fā)，否則為不萌發(fā)。記錄數(shù)據(jù)計(jì)算平均值，用梨花粉的萌發(fā)率確定其生活力[7，11，12]。

2.3.2 固體培養(yǎng)基法固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基的配方中添加1%的瓊脂，其他成份均相同。配置過(guò)程中，需進(jìn)行加熱使瓊脂全部溶化，其他操作均與液體培養(yǎng)基法相同[9]。

通過(guò)鴨梨花粉的自采自制，在一定程度上可以降低果農(nóng)生產(chǎn)成本，也可以避免因花粉需求量大帶來(lái)的供不應(yīng)求的問(wèn)題，鴨梨花期與其他品種花期的間隔也為梨花粉的制作提供了充足的時(shí)間。另外，在冠縣走訪梨種植戶的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)有部分梨農(nóng)在花藥散粉后不再進(jìn)行過(guò)篩，而是直接使用毛絨球或者雞毛撣進(jìn)行抖動(dòng)和滾動(dòng)授粉，也起到了較好的授粉效果。