薰衣草醇酰基轉移酶基因（AAT）的克隆和表達分析

廖燕 尹松松 龔林濤 閆博文 孫明輝 蘇秀娟 王愛凡

摘要：醇酰基轉移酶（AAT）可以催化乙酰輔酶A與萜烯醇類物質的結合，生成各類乙酸酯類化合物。為探明薰衣草AAT基因在酯類化合物合成中的調控作用，本研究以薰衣草品系雜花葉片為供試材料，利用反轉錄PCR技術克隆薰衣草AAT基因的cDNA序列，該cDNA序列長度為1 344 bp，其編碼蛋白質由447個氨基酸組成，是非跨膜親水性蛋白質，屬于PLN02481超級家族；薰衣草AAT與黃色猴面花EgAAT親緣關系最近，相似度為60.87%。AAT基因在苞葉中的表達量最低，在花瓣中的表達量最高；在花冠不同發育時期，該基因在盛開期表達量到達峰值。構建原核表達載體pET-28a-AAT，篩選了重組蛋白在大腸桿菌Transetta（DE3）中的最適誘導表達條件，誘導后獲得的重組蛋白質相對分子質量為5.026×104，重組蛋白以包涵體形式存在，具有將芳樟醇催化合成乙酸芳樟酯的生物活性。本研究結果為進一步驗證薰衣草AAT基因在酯類化合物合成過程中的功能提供了基礎。

關鍵詞：薰衣草；醇酰基轉移酶基因（AAT）；克隆；表達模式；酶活性鑒定

中圖分類號：S184文獻標識碼：A文章編號：1000-4440（2024）04-0599-08

Cloning and expression analysis of lavender alcohol acyltransferase gene （AAT）

LIAO Yan1，YIN Song-song1，GONG Lin-tao1，YAN Bo-wen1，SUN Ming-hui1，SU Xiu-juan1，2，WANG Ai-fan1，2

（1.College of Agronomy， Xinjiang Agricultural University， Urumqi 830052， China;2.Lavender Research Institute of Xinjiang Agricultural University/Xinjiang Key Laboratory of Crop Improvement & Germplasm Enhancement， Urumqi 830052， China）

Abstract：Alcohol acyltransferase （AAT） can catalyze the combination of acetyl coenzyme A and terpene alcohols to produce various types of acetate compounds.?In order to explore the regulatory role of lavender AAT gene in the synthesis of ester compounds， the cDNA sequence of lavender AAT gene was cloned by reverse transcription PCR using the leaves of lavender strain Zahua as the test material.?The length of the cDNA sequence was 1 344 bp， and the encoded protein was composed of 447 amino acids， which was a non-transmembrane hydrophilic protein and belonged to the PLN02481 superfamily.?The AAT in lavender was closely related to the EgAAT in yellow monkey-faced flower， with a similarity of 60.87%.?The expression level of AAT gene was lowest in bracts and highest in petals.?At different developmental stages of corolla， the expression of this gene reached the peak at the full-bloom stage.?Prokaryotic expression vector pET-28a-AAT was constructed.?The optimal expression conditions of the recombinant protein in Escherichia coli Transetta （DE3） were screened.?The relative molecular weight of the recombinant protein was about 5.026×104.?The recombinant protein existed in the form of inclusion bodies and had the biological activity of catalyzing the synthesis of linalyl acetate from linalool.?The results of this study provide a basis for further verifying the function of lavender AAT gene in the synthesis of ester compounds.

Key words：lavender;alcohol acyltransferase gene （AAT）;cloning;expression pattern;enzyme activity identification

薰衣草為唇形科薰衣草屬，是一種珍貴的天然香料植物 [1]，不僅具有良好的觀賞價值，其花穗中提取的精油也被廣泛用于美容、烹飪和香料工業以及醫藥保健領域[2]。薰衣草精油主要由乙酸芳樟酯、芳樟醇等萜類物質組成[3-4]，乙酸芳樟酯是一種揮發性的芳香族單萜類化合物，具有清新、芳香的香氣以及抗菌鎮靜等功效，是多種名貴植物精油的主要成分之一[5-6]。高等植物中大部分萜類物質來源于異戊烯二磷酸（Isopentenyl pyrophosphate，IPP）和二甲丙烯二磷酸（Dimethylallyl pyrophosphate，DMAPP）兩個前體物質，它們主要通過細胞質途徑（Mevalonic pathway，MVA）和質體途徑（2-C-Methylerythritol-4-phosphate pathway，MEP）合成[7]。IPP和DMAPP可以在醇酰基轉移酶（AAT）的催化作用下合成各種類型的萜類化合物。醇酰基轉移酶不僅可以催化異戊二烯和異戊烯醇的轉化以及乙酰輔酶A與萜烯醇類物質的結合，還可以催化萜類化合物中的羥基和羧基等官能團的轉化，從而生成異戊烯醇酯和各類乙酸酯類化合物，并調節萜類化合物的結構和生物活性[8-11]。

近年來，國內外對植物AAT基因展開了廣泛研究，例如已從月季[12-13]、山木瓜[14]、草莓[15]、蘋果[16]等植物中獲得了AAT基因，并對其調控功能開展了大量研究。Shalit 等[12]從月季中獲得的第一個AAT基因，可將月季中香葉醇、香茅醇等不同醇類底物催化合成對應的酯類化合物，該基因在月季花器官及盛開前期的轉錄水平達到最高峰值。李晉華[13]驗證了月季RcAAT基因主要參與了乙酸香葉酯的合成。Cristian等[14]確定了山木瓜VpAAT1基因參與了木瓜香氣的形成。董靜等[15]發現轉草莓FvAATW2基因的煙草可在發育早期合成酯類物質，轉基因草莓果實中揮發酯含量顯著提高。Li等[16]發現蘋果MdAAT2基因參與了蘋果酯類物質的合成。因此，AAT基因對植物香氣成分的合成具有一定的調控作用。

目前關于薰衣草醇酰基轉移酶基因的研究未見報道。本研究以高油薰衣草品系雜花葉片為材料，克隆并分析了薰衣草醇酰基轉移酶基因AAT的脫氧核糖核酸（Complementary deoxyribonucleic acid，cDNA）序列，分析了該基因在薰衣草花器官中不同組織以及花冠不同發育時期中的表達情況，篩選了目的基因的原核表達條件，并進行了蛋白質的體外酶活性檢測，以期為進一步研究AAT基因在薰衣草酯類物質合成中的作用奠定了基礎。

1材料與方法

1.1植物材料

以新疆農業大學農學院薰衣草試驗地的雜花品系葉片為克隆模板材料，以新疆維吾爾自治區伊犁哈薩克族自治州伊寧縣薰衣草品系雜花為表達分析材料，花香檢測用新鮮樣品，其余樣品于-80 ℃超低溫冰箱保存備用。

1.2試驗試劑

pET-28a載體由本實驗室提供，實時熒光定量PCR試劑盒，TransZol Up，pEASY-T5載體，大腸桿菌DH5α感受態細胞，農桿菌GV3101感受態細胞，膠回收試劑盒，肉湯培養基（Luria-Bertani，LB），酵母提取物牛肉提取物（Yeast extract beef extract，YEB）液體培養基，LB、YEB固體培養基，卡那霉素，利福平，乙醇，三氯甲烷，異丙醇，限制性內切酶EcoR I、Hind Ⅲ，ProteinRuler I，ProteinRuler II，SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（變性）粉末，10%SurePAGETM ，Ni-NTA蛋白純化試劑盒，T4 DNA連接酶，乙酰輔酶A和芳樟醇，磷酸緩沖鹽水（Phosphate-buffered saline，PBS）緩沖液粉末，大腸桿菌Transetta（DE3）感受態細胞，氯霉素，質粒小提試劑盒。

1.3薰衣草AAT基因的克隆

采用TransZol Up試劑盒提取薰衣草總核糖核酸（Ribonucleic acid，RNA），用反轉錄試劑盒將其合成cDNA。根據NCBI上公布的薰衣草醇酰基轉移酶核苷酸序列（登錄號：KM275343.1）設計特異性引物AAT-F和AAT-R（表1）。以cDNA為模板，擴增目的片段。反應體系：上游引物1 μl，下游引物1 μl，2.5 mmol/L dNTPs 5 μl，10×EasyPfu Buffer 5 μl，EasyPfu DNA Polymerase 1 μl，cDNA 1 μl，水 36 μl[17]。反應程序：94 ℃預變性5 min，94 ℃變性40 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，35個循環，72 ℃延伸10 min。將回收的目的DNA片段連接到pEASY-T5載體，轉化大腸桿菌DH5α，經菌液PCR鑒定后的陽性克隆進行DNA測序。

1.4生物信息學分析

使用NCBI上的ORF Finder（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/orfig.cgi）工具分析基因序列的ORF，確定克隆得到的薰衣草AAT基因序列是否具有編碼蛋白質的潛力。使用SignalP（http：//www.cbs.dtu.dk/services/SignalP）對薰衣草AAT進行信號肽預測。使用COILS（http：//www.ch.embnet.org/software/COILS_form.html）預測薰衣草AAT的卷曲螺旋結構。使用TMHMM（http：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0）分析薰衣草AAT的可能跨膜區。使用MEGA5對薰衣草AAT氨基酸序列進行比對，使用DNAMAN構建薰衣草AAT蛋白的系統進化樹。

1.5表達模式分析

提取薰衣草品系雜花花器官不同發育時期以及不同組織部位總RNA，反轉錄合成cDNA，根據AAT基因序列設計實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Quantitative real time-polymerase chain reaction，qRT-PCR）引物qAAT-F和qAAT-R，內參基因使用β-actin-F和β-actin-R[17]（表1），以提取的薰衣草cDNA為模板進行熒光定量PCR。每個樣品設置3次重復，用2-△△Ct法分析熒光定量數據[18]。

1.6AAT重組蛋白的表達條件優化

載體使用本實驗室保存的pET-28a。以從薰衣草葉片中克隆的pEASY-T5-AAT重組質粒為模板選擇EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位點，設計特異性引物pAAT-F和pAAT-R引物進行擴增（表1）。對酶切產物所需片段進行膠回收，純化目的基因及線性載體，用T4連接酶連接后轉化大腸桿菌DH5α，將測序正確的菌液進行pET-28a-AAT質粒提取，轉化Transetta（DE3），菌液培養至光密度（Optical density，OD）600值為0.4～0.6，異丙基β-D-硫代半乳糖苷（Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG）誘導濃度分別為0 mmol/L、0.2 mmol/L、0.4 mmol/L、0.6 mmol/L、0.8 mmol/L、1.0 mmol/L，誘導時間分別為0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h，誘導溫度分別為25 ℃、28 ℃、37 ℃，篩選最佳誘導劑濃度、誘導時間和培養溫度[19]。

1.7AAT重組蛋白體外酶活性檢測

采用篩選獲得的最佳誘導條件誘導薰衣草AAT蛋白表達。按照Ni-NTA瓊酯糖純化樹脂說明書進行蛋白純化。蛋白體外酶活性測定參照曹香梅[20]應用的方法，在含5 mmol/L乙酰輔酶A和10 mmol/L芳樟醇的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖液[100 mmol/L Tris，pH 7.5，2 mmol/L 二硫蘇糖醇（Dithiothreitol，DTT）]中，添加重組蛋白（500 ng/μl），30 ℃水浴 1 h，使用氣相色譜-質譜聯用儀（Gas chromatography-mass spectrometry， GC-MS）檢測生成的產物。

2結果與分析

2.1薰衣草醇酰基轉移酶基因AAT的克隆和序列分析

以薰衣草品系雜花的葉片cDNA為模板，擴增獲得AAT基因（圖1）。利用NCBI的ORF Finder分析AAT基因序列，該基因堿基序列長度為1 344 bp，其編碼的蛋白質由447個氨基酸組成，相對分子質量為5.026×104，等電點為8.61。

在線程序預測發現，AAT蛋白無信號肽結構域，多肽鏈位于細胞膜外，無跨膜結構域存在，屬于PLN02481蛋白超級家族，410位甘氨酸（Glycine，Gly）分值最小，為-2.989，親水性最強；309位脯氨酸（Proline，Pro）分值最大，為2.111，親水性最弱，預測該蛋白質為親水性蛋白質。AAT蛋白的二級結構包含12個α-螺旋、16個β-折疊和29個無規則卷曲；蛋白質的三級結構中無規則卷曲較多，其結構與PLN02481-2super家族蛋白質的三級結構相似，推測該蛋白質和PLN02481-2super家族蛋白質的功能相似。

2.2薰衣草AAT蛋白氨基酸序列的多重比較和進化樹分析

薰衣草AAT蛋白與克萊門氏小柑橘、甜橙、旋蒴苣苔、黃色猴面花、山荊子、蘋果、楊梅、荷花、煙草、芝麻等10個物種AAT同源蛋白的氨基酸序列比對結果表明，這些序列均具有植物酰基轉移酶（BAHD）家族特有的高度保守結構域HXXXD（165-169氨基酸殘基）活性位點和附加的DFGWG（378-382氨基酸殘基）結構域，同時也具有BAHD家族的保守結構域LXXYYPLAGR（74-83氨基酸殘基）（圖2）。因此，薰衣草AAT基因屬于BAHD基因家族。

構建薰衣草（Lavandula x intermedia）與10個物種AAT蛋白的系統進化樹，發現薰衣草AAT與黃色猴面花、旋蒴苣苔、芝麻、甜橙、克萊門氏小柑橘、楊梅、荷花、煙草、蘋果、山荊子AAT的同源性分別為60.87%、60.05%、59.64%、59.49%、59.72%、59.77%、57.37%、57.4%、54.71%、56.01%，其中薰衣草AAT蛋白與黃色猴面花的蛋白相似性最高，為60.87%（圖3），推測兩者具有相似的分子功能。

2.3薰衣草AAT基因的表達模式分析

分析AAT基因在不同組織和花冠不同發育時期的相對表達量（圖4），該基因在花瓣中的表達量最高，其次是花萼、雄蕊、葉片、雌蕊、苞葉；該基因在花冠花蕾期和初開期的表達量較低，半開期其表達量迅速上升，盛開期其表達量達到峰值，衰敗期其表達量降低。

2.4薰衣草AAT基因原核表達載體的構建及鑒定

用EcoRⅠ和HindⅢ雙酶切pET-28a載體和AAT基因，將回收的AAT基因片段與載體DNA片段連接構建重組載體pET-28a-AAT。雙酶切電泳結果表明，酶切獲取的小片段與AAT基因大小一致，大片段與pET-28a載體大小一致（圖5），表明表達載體構建成功。

2.5薰衣草AAT重組蛋白的表達條件優化及可溶性鑒定

將重組表達載體pET-28a-AAT進行誘導表達。重組蛋白在0.2 mmol/L、0.4 mmol/L、0.6 mmol/L、0.8 mmol/L、1.0 mmol/L5個IPTG濃度下均能表達，當IPTG終濃度為0.6～0.8 mmol/L時重組蛋白表達量最高（圖6A）；在2 h、4 h、6 h、8 h、10 h的誘導時長下均能表達，并且AAT蛋白的表達量與誘導時長呈負相關（誘導時間越長，表達量越低），當誘導時間為2 h時表達量達到最高（圖6B）；在25 ℃、28 ℃、37 ℃不同溫度下均能誘導目標蛋白表達，當溫度為37 ℃，在0.6～0.8mmol/L的IPTG和2 h條件下重組蛋白表達量最高（圖6C）；因此，選擇IPTG濃度為0.6～0.8 mmol/L、誘導時間為2 h、培養溫度為37 ℃作為該重組蛋白的最佳誘導表達條件。采用以上條件誘導獲得的重組蛋白與目標蛋白相對分子質量大小一致（5.026×104，圖7），該蛋白質以包涵體形式存在。

2.6薰衣草AAT蛋白的酶活性驗證

將純化后的AAT蛋白和芳樟醇混合后進行酶活性檢測，當酶促反應進行至25.583 min時檢測到了乙酸芳樟酯（圖8），表明薰衣草AAT蛋白具有催化芳樟醇合成乙酸芳樟酯的生物活性。

3討論

揮發性酯類化合物作為貢獻薰衣草香氣的重要組分，在薰衣草發育過程中不斷積累，對于薰衣草精油的品質以及薰衣草相關產業的發展具有重要意義。本研究采用RT-PCR技術首次克隆了薰衣草AAT基因的全長cDNA。BAHD酰基轉移酶家族中特有的HXXXD基序直接參與酶活性位點的催化作用，而DFGWG基序與蛋白質的穩定性、互動能力和信號轉導過程相關[21-22]，推測薰衣草AAT蛋白也具有類似功能。AAT基因在植物中具有組織表達差異性。薰衣草AAT基因在花瓣中表達量最高，該結果與月季RhAAT1[12]、桂花OfAAT1及柿子DKAAT1的表達情況相似[23-24]。AAT基因在薰衣草花冠各個發育時期的表達量也不同。梅花PmCFAT1基因表達量隨開花進程逐漸上升，在盛花期其表達量達到最高[25]。玫瑰RrAAT基因在半開期的表達量達到最高，自盛花期逐漸下降[26]。薰衣草AAT基因在盛開期其表達量達到峰值。薰衣草AAT基因在花器官不同發育時期的表達趨勢與梅花PmCFAT1[25]的表達趨勢一致，均為在盛開期表達量達到最高，和玫瑰RrAAT[26]自盛開期后下降的趨勢一致。

通過體外酶活性試驗鑒定目標蛋白的生物學功能，是確定相關基因是否參與調控酯類化合物合成的有效途徑，而建立高效誘導表達體系則是該途徑的前提條件。曹穎等[27]采用優化后的表達條件在大腸桿菌中高效表達了番茄SlAAT1，體外酶活性試驗結果表明該蛋白質具有醇酰基轉移酶活性。在細胞裂解過程中蛋白質很容易降解，但采用本身缺少蛋白質水解酶的Transetta（DE3）感受態細胞作為表達受體，則可保證重組蛋白不會被降解[28]。本研究采用優化后的表達條件在Transetta（DE3）細胞中誘導表達了以包涵體形式存在目的蛋白，出現表達的目的蛋白以包涵體形式存在的原因可能是大腸桿菌作為一種原核生物缺乏真核生物所具有的許多復雜的折疊和翻譯后的加工機制，這些機制包括蛋白質轉運、拆分和修復錯誤的二硫鍵等，由于缺乏這些機制，大腸桿菌中表達的目標蛋白常常會有錯配的二硫鍵產生，而這種二硫鍵可能會導致蛋白質在細胞內無法正確定位或功能失調，從而導致目的蛋白形成包涵體[29-30]。對純化后的目標蛋白進行體外酶活性檢測，發現AAT蛋白具有催化芳樟醇合成乙酸芳樟酯的生物活性。

4結論

本研究從薰衣草雜花品系葉片中克隆得到醇酰基轉移酶基因AAT，全長1 344 bp，編碼447個氨基酸；對AAT蛋白氨基酸序列進行多序列比對結果顯示，該序列屬于BAHD家族，系統進化樹分析結果表明AAT蛋白與黃色猴面花AAT親緣關系最近。AAT基因在苞葉中的表達量較低，在花瓣中的表達量相對較高，在花器官不同發育時期，AAT基因的表達呈先升高后降低的趨勢。重組蛋白表達最適誘導條件為：IPTG濃度0.6～0.8 mmol/L、誘導時間2 h、培養溫度37 ℃，對包涵體蛋白進行純化復性發現其具有催化芳樟醇合成乙酸芳樟酯的生物活性。本試驗結果為進一步驗證AAT基因在薰衣草酯類物質合成中的作用奠定了基礎，為今后利用基因工程手段培育精油產量高、品質優的薰衣草新品種提供了候選基因。

參考文獻：

[1]張群，扎靈麗. 薰衣草的研究和應用[J]. 時珍國醫國藥，2008（6）：1312-1314.

[2]王玉芹，孫亞軍，施獻兒. 薰衣草精油的化學成分與藥理活性[J]. 國外醫藥（植物藥分冊），2004（1）：5-8.

[3]張健，蔡寶國，章蘇寧，等. 薰衣草精油化學成分的GC-MS分析比較[J]. 食品工業，2007（5）：52-54.

[4]徐潔華，文首文. 薰衣草揮發性有機物及其藥理功效研究進展[J]. 時珍國醫國藥，2010，21（4）：979-980，983.

[5]PICHERSKY E， RAGUSO R A. Why do plants produce so many terpenoid compounds？[J]. The New Phytologist，2018，220（3）：692-702.

[6]DEHSHEIKH A B， SOURESTANI M M， DEHSHEIKH P B， et al. Monoterpenes：essential oil components with valuable features[J]. Mini Reviews in Medicinal Chemistry，2020，20（20）：958-974.

[7]VRANOV E， COMAN D， GRUISSEM W. Network analysis of the MVA and MEP pathways for isoprenoid synthesis[J]. Annual Review of Plant Biology，2013，64：665-700.

[8]岳躍沖，范燕萍. 植物萜類合成酶及其代謝調控的研究進展[J]. 園藝學報，2011，38（2）：379-388.

[9]LAURA K H， GUTENSOHN M， SUZANNE T T， et al. Orthologs of the archaeal isopentenyl phosphate kinase regulate terpenoid production in plants[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2015，112（32）：10050-10055.

[10]劉琬菁，呂海舟，李瀅，等. 植物萜類合酶研究新進展[J]. 植物生理學報，2017，53（7）：1139-1149.

[11]魏恬恬，臧姝，曾雨倩，等. 植物單萜類化合物的代謝調控[J]. 揚州大學學報（農業與生命科學版），2017，38（2）：122-126.

[12]SHALIT M， GUTERMAN I， VOLPIN H， et al. Volatile ester formation in roses.Identification of an acetyl-coenzyme A. Geraniol/citronellolacety-ltransferase in developing rose petals[J]. Plant Physiol，2003，8（1）：153-162.

[13]李晉華. 月月粉乙酰基轉移酶基因RcAAT的克隆及功能分析[D]. 昆明：云南農業大學，2017.

[14]CRISTIAN B， CARLOS G E， LIDA F， et al. VpAAT1， a gene encoding an alcohol acyltransferase， is involved in ester biosynthesis during ripening of mountain papaya fruit[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2010，58（8）：5114-5121.

[15]董靜，王桂霞，鐘傳飛，等. 森林草莓醇酰基轉移酶基因FvAATW2功能研究[J]. 園藝學報，2018，45（1）：41-50.

[16]LI D P， XU Y F， XU G G， et al. Molecular cloning and expression of a gene encoding alcohol acyltransferase （MdAAT2） from apple （cv. Golden Delicious）[J]. Phytochemistry，2006，67（7）：658-667.

[17]龔林濤，蘇秀娟，廖燕，等. 薰衣草芳樟醇合酶基因的克隆、表達及酶活性檢測[J]. 作物雜志，2021，2021（6）：78-87.

[18]尹松松，蘇秀娟，龔林濤，等. 薰衣草1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構酶基因LaDXR的克隆及表達分析[J]. 分子植物育種，2021，19（7）：2193-2199.

[19]龔林濤，蘇秀娟，尹松松，等. 薰衣草DXS基因的克隆、表達分析及原核表達[J]. 新疆農業科學，2020，57（7）：1233-1242.

[20]曹香梅. 桃果實酯類芳香物質的代謝與調控研究[D]. 杭州：浙江大學，2019.

[21]王夢姣. 植物BAHD酰基轉移酶家族研究進展[J]. 江西農業學報，2010，22（12）：124-126.

[22]劉雨雨，莫婷，王曉暉，等. 植物來源BAHD酰基轉移酶家族研究進展[J]. 中國中藥雜志，2016，41（12）：2175-2182.

[23]劉偲，曾祥玲，鄭日如，等. 桂花花瓣醇酰基轉移酶基因的克隆與表達[J]. 華中農業大學學報，2016，35（1）：36-42.

[24]ELHADI M A M. 柿果實品質特性、香氣成分分析及醇酰基轉移酶基因（DkAAT1）的表達研究[D]. 揚州：揚州大學，2017.

[25]霍婷婷. 梅花花香相關基因PmCFATs的克隆和表達分析[D]. 北京：北京林業大學，2017.

[26]陳陳. 玫瑰花香成分生物合成相關基因的克隆與表達分析[D]. 揚州：揚州大學，2012.

[27]曹穎，胡尚連，張慧瑩，等. 番茄醇酰基轉移酶基因SlAAT1克隆、序列分析和原核表達[J]. 植物研究，2012，32（6）：731-736.

[28]劉博文，王雪慶，孫濤，等. 白蠟蟲蠟酯合酶基因cDNA全長克隆及原核表達[J]. 林業科學研究，2016，29（4）：610-614.

[29]BAESHEN N A， BAESHENM N， SHEIKH A， et al. Cell factories for insulin production [J]. Microbial Cell Factories，2014，13（1）：141-149.

[30]FERRER-MIRALLES N， VILLAVERDE A. Bacterial cell factories for recombinant protein production; expanding the catalogue [J]. Microbial Cell Factories，2013，12（1）：113.

（責任編輯：蔣永忠）

收稿日期：2023-04-27

基金項目：新疆維吾爾自治區重大科技專項（2022B02036-1）；國家自然科學基金地區科學基金項目（31760429）；新疆維吾爾自治區科學技術廳“天山青年計劃”優秀青年科技人才培養項目（2020Q016）；國家級大學生創新訓練計劃項目（201810758003）；作物學重點學科發展基金項目（XNCDKY2021015）

作者簡介：廖燕（2000-），女，重慶人，碩士研究生，主要從事薰衣草遺傳育種研究。（E-mail）1642101080@qq.com

通訊作者：蘇秀娟，（E-mail）smm1980@yeah.net;王愛凡，（E-mail）wangaifantop@163.com