tRF-1:30對高糖誘導的腎小管上皮細胞炎性因子表達的影響

基金項目：江蘇省醫學會兒科醫學科研專項基金項目（SYH-32034-0073，SYH-32034-0085）；南京市衛生科技發展專項資金項目（YKK23209，YKK23288，YKK23289）

作者單位：1南京醫科大學第二附屬醫院兒科（郵編210003）；2南京醫科大學第四附屬醫院兒科

作者簡介：夏雨薇（2000），女，碩士在讀，主要從事小兒腎臟疾病診治及機制方面研究。E-mail：13218006127@163.com

△通信作者 E-mail：weihuagan@njmu.edu.cn

摘要：目的 探討tRF-1：30（tRF-1：30-Gln-CTG-4）對高糖（HG）誘導的腎小管上皮細胞（RTECs）中炎性因子表達的影響及分子機制。方法 將小鼠RTECs分為Control組、HG組、HG+tRF-1：30 mimic組、HG+tRF-1：30 NC組、HG+si-IKZF2組（IKAROS家族鋅指2，tRF-1：30抑制劑）、HG+si-NC組。實時熒光定量PCR檢測tRF-1：30、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）、單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）和IKZF2 mRNA的水平。酶聯免疫吸附試驗檢測炎性因子水平，Western blot檢測IKZF2蛋白表達水平，雙螢光素酶報告實驗驗證tRF-1：30和IKZF2的關系。結果 在HG誘導的RTECs中炎性因子的表達水平顯著升高，而tRF-1：30表達水平顯著降低。過表達tRF-1：30顯著降低HG誘導的RTECs中炎性因子的表達水平。IKZF2在HG誘導的RTECs中顯著高表達，進一步敲低IKZF2可抑制炎性因子的釋放，而過表達tRF-1：30后IKZF2的表達水平下調。雙螢光素酶報告實驗進一步驗證tRF-1：30與IKZF2可能存在靶向關系。結論 過表達tRF-1：30可能通過負向調控IKZF2的表達進而抑制HG誘導的RTECs炎性因子的釋放。

關鍵詞：糖尿病腎病；端粒重復序列結合蛋白質1；tRF-1：30-Gln-CTG-4；腎小管上皮細胞；炎性因子；IKAROS家族鋅指2

中圖分類號：R587.2 文獻標志碼：A DOI：10.11958/20240046

Effect of tRF-1：30 on the expression of inflammatory factors in renal tubular epithelial cells induced by high glucose

XIA Yuwei1， QIAO Yunyang1， LIU Xuewei1， SHI Huimin1， QU Gaoting1， ZHANG Aiqing2， GAN Weihua1△

1 Department of Pediatric Nephrology， the Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University， Nanjing 210003， China; 2 Department of Pediatric Nephrology， the Fourth Affiliated Hospital of Nanjing Medical University

△Corresponding Author E-mail： weihuagan@njmu.edu.cn

Abstract： Objective To investigate the effect and molecular mechanism of tRF-1：30-Gln-CTG-4 （tRF-1：30） on the expression of inflammatory factors in high glucose （HG）-induced renal tubular epithelial cells （RTECs）. Methods RTECs were divided into the control group， the HG group， the HG+tRF-1：30 mimic group， the HG+tRF-1：30 negative control （NC） group， the HG+si-IKZF2 group and the HG+si-NC group. Real-time quantitative polymerase chain reaction （RT-qPCR） was used to detect the expression levels of tRF-1：30， tumor necrosis factor-α （TNF-α）， interleukin-6 （IL-6）， monocyte chemoattractant protein-1 （MCP-1） and IKAROS family zinc finger protein 2 （IKZF2）. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to detect levels of TNF-α， IL-6 and MCP-1. Protein expression of IKZF2 was detected by Western blot assay. Dual-luciferase reporter assay was used to detect the targeting relationship between tRF-1：30 and IKZF2. Results The expression levels of inflammatory factors were elevated in HG-induced RTECs， and the expression level of tRF-1：30 was decreased （P＜0.05）. Overexpression of tRF-1：30 significantly decreased expression levels of inflammatory factors in HG-induced RTECs （P＜0.05）， and the expression level of IKZF2 was significantly increased （P＜0.05）. Further knockdown of IKZF2 can inhibit the release of inflammatory factors， and the expression level of IKZF2 was down-regulated after overexpression of tRF-1：30. Double luciferase reporting experiment further verified the possible targeting relationship between tRF-1：30 and IKZF2. Conclusion Overexpression of tRF-1：30 inhibits the expression of inflammatory factors in HG-induced RTECs by target binding and negatively regulating the expression of IKZF2.

Key words： diabetic nephropathies; telomeric repeat binding protein 1; tRF-1：30-Gln-CTG-4; renal tubular epithelial cells; inflammatory factors; IKAROS family zinc finger protein 2

糖尿病腎病（DKD）是慢性腎臟病的一種重要類型［1］，腎小管上皮細胞（RTECs）損傷是DKD的關鍵環節［2］。腎小管間質炎癥在DKD的進展中起重要作用，RTECs在炎癥反應中起著關鍵作用［3］。因此，研究高糖（HG）條件下RTECs炎性因子的表達改變對探索DKD損傷的機制有重大意義。轉運RNA的衍生片段（tRFs）是一類新興的非編碼RNA。有研究揭示tRF-3022b可能通過與半乳糖凝集素1和巨噬細胞遷移抑制因子結合來影響結直腸癌的腫瘤生長和M2巨噬細胞極化［4］。這些研究表明tRFs具有重要的臨床意義，可能構成調節病理過程的新型分子治療靶點［5］。然而，tRFs在各種腎臟疾病中的作用卻鮮有報道。本課題組前期采用高通量測序技術，通過HG誘導RTECs，篩選出多條差異表達的tRFs，在表達下調的tRFs中選取tRF-1：30-Gln-CTG-4（tRF-1：30）進行了表達水平驗證，同時證實其參與了RTECs損傷；并利用生物信息學分析發現IKAROS家族鋅指2（IKZF2）基因可能是tRF-1：30的作用靶點，推測tRF-1：30對RTECs損傷的影響可能與IKZF2有關［6］。本研究旨在探索tRF-1：30對HG誘導的RTECs中炎性因子表達的影響及機制是否與IKZF2有關，以便為臨床防治DKD尋求新的線索。

1 材料與方法

1.1 主要材料 本實驗所用小鼠RTECs購自北納生物。細胞培養所使用的F12培養液、胎牛血清、胰酶及磷酸鹽緩沖液均購自美國Gibco公司；tRF-1：30 mimic及相應的陰性對照（NC）、IKZF2 siRNA及相應NC、轉染試劑盒購自廣州銳博生物科技有限公司；TRIzol試劑購自美國Invitrogen；實時熒光定量PCR（RT-qPCR）相關試劑盒購自南京諾唯贊生物科技有限公司；PCR引物由南京銳真生物技術有限公司設計合成并驗證；蛋白提取及定量相關試劑盒購自南京諾唯贊生物科技有限公司；蛋白免疫印跡（Western blot）實驗相關耗材購自武漢賽維爾生物科技有限公司；兔源IKZF2一抗、鼠源GAPDH一抗、羊抗兔二抗、羊抗鼠二抗購自中國Affinity Biosciences LTD公司；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）、單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測試劑盒和雙螢光素酶報告檢測試劑盒購自武漢亞科因生物技術有限公司。CO2細胞培養箱購自美國Thermo Fisher公司；Lightcycler 480Ⅱ型熒光定量PCR儀購自美國Roche公司；ELX800型全自動吸收光酶標儀、CHDMIDOC型凝膠成像系統購自美Bio-Rad公司；CKX31型倒置顯微鏡購自日本OLYMPUS公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞培養及分組 使用含10%胎牛血清的F12培養液培養小鼠RTECs并置于37 ℃、5%CO2的細胞培養箱中，每隔1～2 d更換37 ℃預熱新鮮培養液1次。鏡下觀察細胞鋪至滿視野時進行傳代鋪板，鏡下觀察細胞生長密度達30%～50%，更換無血清培養液繼續培養12 h使細胞同步化。細胞分組及處理：Control組（正常培養的RTECs）、HG組（35 mmol/L葡萄糖干預）、HG+tRF-1：30 mimic組（轉染tRF-1：30 mimic）、HG+tRF-1：30 NC組（轉染tRF-1：30 NC）；HG+si-NC組（轉染si-NC）、HG+si-IKZF2組（轉染si-IKZF2）。

1.2.2 細胞轉染 將處于對數生長期的RTECs接種至6孔板，置于條件為37 ℃、5%CO2的培養箱內，鏡下觀察細胞生長至密度達30%～50%時，按轉染試劑操作說明書配制濃度為20 nmol/L轉染復合物，依據不同實驗分組干預方式需要干預24 h后收集細胞以備后續實驗。

1.2.3 RT-qPCR檢測tRF-1：30及炎性因子mRNA表達水平 使用TRIzol試劑裂解并提取各組細胞的總RNA，分光光度計測定總RNA濃度和純度，260/280 nm光密度比值保持在1.8～2.0。根據反轉錄試劑盒說明書操作，將總RNA反轉錄為cDNA，用RT-qPCR法檢測tRF-1：30及炎性因子TNF-α、IL-6、MCP-1、IKZF2 mRNA表達水平，引物序列見表1。依據熔解曲線進行產物的特異性分析。反應條件：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性10 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸10 s，40個循環。以U6、β-actin作為內參，采用2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達量。實驗重復3次。[基因

名稱 引物序列（5′→3′） 產物

大小/bp TNF-α 上游：CCTTATCTACTCCCAGGTTCTC 109 下游：GAGGCTGACTTTCTCCTGGTATG IL-6 上游：CTGCAAGAGACTTCCATCCAG 131 下游：AGTGGTATAGACAGGTCTGTTGG MCP-1 上游：TAAAAACCTGGATCGGAACCAAA 115 下游：GCATTAGCTTCAGATTTACGGGT IKZF2 上游：AAGGGGAACACGCCAATATGG 135 下游：GCTGCCTGTCACACTCTTCA β-actin 上游：CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC 171 下游：ATGGAGCCACCGATCCACA tRF-1：30 上游：GGTTCCATGGTGTAATGGTGAGCACTCTGG 220 下游：ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC U6 上游：CTCGCTTCGGCAGCACATATACT 93 下游：ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC ][Tab.1 Sequences of RT-qPCR primers

表1 RT-qPCR引物序列]

1.2.4 Western blot檢測IKZF2蛋白表達水平 使用加入蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液裂解細胞并提取細胞總蛋白。細胞刷刮下細胞并收集懸液至1.5 mL EP管中，在4 ℃下以12 000×g 離心30 min，取上清液，使用BCA法測定蛋白濃度并制備蛋白樣本。制備好的蛋白經SDS-PAGE分離并轉膜至PVDF膜上，使用5%脫脂奶粉于室溫下封閉2 h，清洗后分別加入稀釋好的GAPDH、IKZF2一抗（1∶1 000），在4 ℃孵育過夜。次日，復溫并使用TBST充分洗膜后加入稀釋好的二抗（1∶3 000），" "室溫下置于搖床孵育1 h，再次洗膜，加入ECL顯色液并置于凝膠成像儀下曝光條帶。Image J軟件分析蛋白條帶灰度值，以GAPDH為內參計算目的蛋白的相對表達量。實驗重復3次。

1.2.5 ELISA檢測炎性因子水平 收集各組細胞，1 000×g離心20 min后收集上清液，按試劑盒說明書操作，以空白組調零，450 nm波長處依序測量各孔的吸光度。繪制標準曲線，根據標準曲線計算樣本TNF-α、IL-6、MCP-1濃度。每組細胞設置3個復孔，實驗重復3次。

1.2.6 雙螢光素酶報告實驗驗證tRF-1：30與IKZF2間的關系 通過TargetScan在線網站（https：//www.targetscan.org/）預測tRF-1：30和IKZF2有無結合位點。將tRF-1：30 NC、tRF-1：30 mimic分別與野生型（wild type，WT）IKZF2、突變型（mutant，MUT）IKZF2兩兩組合轉染至293T細胞中，設為tRF-1：30 NC+WT-IKZF2組、tRF-1：30 NC+MUT-IKZF2組、tRF-1：30 mimic＋WT-IKZF2組、tRF-1：30 mimic+MUT-IKZF2組。繼續培養48 h后，檢測并計算各組細胞螢光素酶相對活性。實驗重復3次。

1.3 統計學方法 采用GraphPad Prism 9.5軟件進行數據分析。計量資料以均數±標準差[（[x] ±s）

]表示，2組間比較采用t檢驗，多組間的比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用Tukey-q檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 tRF-1：30和炎性因子在HG誘導的RTECs中的表達水平 與Control組相比，HG組TNF-α、IL-6、MCP-1 mRNA和蛋白表達水平升高，tRF-1：30 mRNA表達水平降低（P＜0.05），見表2。[組別 mRNA TNF-α IL-6 MCP-1 tRF-1：30 Control組 1.01±0.09 1.00±0.14 0.99±0.08 1.02±0.08 HG組 2.47±0.29 2.68±0.35 2.01±0.28 0.27±0.06 t 8.228＊＊ 7.690＊＊ 6.126＊＊ 13.300＊＊ ][組別 蛋白/（ng/L） TNF-α IL-6 MCP-1 Control組 70.33±8.67 42.33±5.20 30.67±5.16 HG組 202.50±26.47 165.50±20.42 65.17±4.73 t 8.224＊＊ 10.120＊＊ 8.538＊＊ ][Tab.2 Expression levels of tRF-1：30 and inflammatory factors in the control group and the HG group

表2 Control組和HG組細胞tRF-1：30和

炎性因子表達水平][ ＊＊P＜0.01。][（n=3，[x] ±s）

]

2.2 過表達tRF-1：30對HG誘導的RTECs炎性因子表達的影響 與HG組、HG+tRF-1：30 NC組相比，HG+tRF-1：30 mimic組tRF-1：30 mRNA表達水平升高（P＜0.05）。HG+tRF-1：30 NC組tRF-1：30 mRNA表達水平較HG組差異無統計學意義；與HG組、HG+tRF-1：30 NC組相比，HG+tRF-1：30 mimic組TNF-α、IL-6、MCP-1 mRNA和蛋白表達水平降低（P＜0.05），見表3。

2.3 IKZF2在HG誘導的RTECs中的表達情況 與Control組相比，HG組細胞IKZF2 mRNA（1.48±0.22 vs. 1.00±0.05，t=3.593，P＜0.05）和蛋白（1.48±0.05 vs. 1.00±0.05，t=11.780，P＜0.01）表達水平均升高，見圖1。lt;C：＼Users＼Lenovo＼Desktop＼修改備用＼責編＼2024年-6期＼Image＼image2_2.pnggt;[Control組][HG組][IKZF2][56 ku][36 ku][GAPDH][Fig.1 Detection of IKZF2 expression in HG-induced RTECS by Western blot assay

圖1 Western blot檢測IKZF2在HG誘導的RTECS中的表達情況]

2.4 敲低IKZF2對HG誘導的RETCs炎性因子表達的影響 與HG組、HG+si-NC組比較，HG+si-IKZF2組IKZF2及炎性因子TNF-α、IL-6、MCP-1 mRNA和蛋白表達水平均降低，見圖2，表4、5。lt;C：＼Users＼Lenovo＼Desktop＼修改備用＼責編＼2024年-6期＼Image＼image3_2.pnggt;[A][B][C][D][IKZF2][GAPDH][56 ku][36 ku][A：Control組；B：HG組；C：HG+si-IKZF2組；D：HG+si-NC組。

Fig.2 IKZF2 protein expression level detected by Western blot assay

圖2 Western blot檢測IKZF2蛋白表達水平

][組別 IKZF2蛋白 IKZF2 mRNA Control組 1.00±0.05 1.00±0.09 HG組 1.45±0.01a 1.53±0.06a HG+si-NC組 1.41±0.02a 1.53±0.11a HG+si-IKZF2組 0.65±0.11bc 0.19±0.03bc F 376.400＊＊ 191.400＊＊ ][Tab.4 Comparison of the relative expression levels of IKZF2 protein and mRNA between the four groups

表4 各組IKZF2蛋白和mRNA相對

表達量比較][ ＊＊P＜0.01；a與Control組比較，b與HG組比較，c與HG+si-NC組比較，P＜0.05。][（n=3，[x] ±s）

][組別 mRNA TNF-α IL-6 MCP-1 Control組 1.00±0.05 1.02±0.12 1.05±0.10 HG組 1.93±0.15a 1.68±0.14a 1.53±0.06a HG+si-NC組 1.90±0.10a 1.70±0.10a 1.56±0.14a HG+si-IKZF2組 0.46±0.06bc 0.63±0.10bc 0.47±0.21bc F 157.000＊＊ 60.760＊＊ 41.500＊＊ ][組別 蛋白/（ng/L） TNF-α IL-6 MCP-1 Control組 70.33±4.04 42.53±6.15 32.30±4.30 HG組 203.70±23.16a 153.90±15.12a 58.86±6.40a HG+si-NC組 197.80±30.48a 148.10±18.40a 66.70±5.59a HG+si-IKZF2組 109.47±26.39bc 70.27±7.76bc 46.33±5.47bc F 24.000＊＊ 57.360＊＊ 12.190＊＊ ][Tab.5 Comparison of mRNA and protein expression levels of inflammatory factors after knockdown of IKZF2 expression between the four groups

表5 敲低IKZF2表達后各組細胞炎性因子mRNA及蛋白表達水平比較][ ＊＊P＜0.01；a與Control組比較，b與HG組比較，c與HG+si-NC組比較，P＜0.05。][（n=3，[x] ±s）

]

2.5 tRF-1：30影響IKZF2并調控其表達 與HG組、HG+tRF-1：30 NC組相比，HG+tRF-1：30 mimic組IKZF2的mRNA和蛋白表達水平降低（P＜0.05），見圖3、表6。生物信息學預測顯示，tRF-1：30與IKZF2存在結合位點，見圖4。在兩個結合處進行了雙螢光素酶報告實驗，結果顯示，tRF-1：30與IKZF2-WT載體共轉染至RTECs后雙螢光素酶活性降低，而與MUT載體共轉染RTECs后雙螢光素酶活性比較差異無統計學意義，見圖5。lt;C：＼Users＼Lenovo＼Desktop＼修改備用＼責編＼2024年-6期＼Image＼image4_2.pnggt;[IKZF2][GAPDH][56 ku][36 ku][A][B][C][D][ A：Control組；B：HG組；C：HG+tRF-1：30 mimic組；D：HG+tRF-1：30 NC組。

Fig.3 IKZF2 protein expression level after addition of tRF-1：30 detected by Western blot assay

圖3 Western blot檢測加入tRF-1：30后IKZF2蛋白表達水平

][組別 IKZF2 mRNA IKZF2蛋白 Control組 1.02±0.02 0.99±0.04 HG組 2.23±0.29a 1.34±0.12a HG+tRF-1：30 NC組 2.06±0.31 1.53±0.07 HG+tRF-1：30 mimic組 1.54±0.11bc 0.73±0.04bc F 18.910＊＊ 66.600＊＊ ][Tab.6 Effect of tRF-1：30 overexpression on IKZF2 expression induced by high glucose

表6 過表達tRF-1：30對高糖誘導后IKZF2

表達的影響][ ＊＊P＜0.01；a與Control組比較，b與HG組比較，c與HG+ tRF-1：30 NC組比較，P＜0.05。][（n=3，[x] ±s）

]lt;C：＼Users＼Lenovo＼Desktop＼修改備用＼責編＼2024年-6期＼Image＼image6_1.pnggt;[tRF-1：30 NC組

tRF-1：30 mimic組][t=3.672

P＜0.05][t=2.283

P＞0.05][1.0][1.5][0.5][0.0][相對螢光素酶活性][IKZF2-WT][IKZF2-MUT][A]lt;C：＼Users＼Lenovo＼Desktop＼修改備用＼責編＼2024年-6期＼Image＼image7_1.pnggt;[t=5.032

P＜0.05][t=1.153

P＞0.05][tRF-1：30 NC組

tRF-1：30 mimic組][1.0][1.5][0.5][0.0][相對螢光素酶活性][IKZF2-WT][IKZF2-MUT][B][ A：結合位點1相對螢光素酶活性檢測；B：結合位點2相對螢光素酶活性檢測。

Fig.5 Results of luciferase reporter gene assay

圖5 螢光素酶報告基因實驗結果]lt;C：＼Users＼Lenovo＼Desktop＼修改備用＼責編＼2024年-6期＼Image＼image5_1.pnggt;[Fig.4 The nucleic acid base binding sites of IKZF2 and tRF-1：30

圖4 IKZF2和tRF-1：30核酸堿基結合位點]

3 討論

DKD的發病機制非常復雜，尚不完全清楚。近年有研究表明，炎癥在DKD的發生和發展中起著重要作用，多種促炎細胞因子參與DKD的發生［7］。腎小管損傷在DKD中起著重要作用，高血糖可以使RTECs釋放多種炎性細胞因子，從而導致炎癥的發生，同時介導了DKD的發生和發展［8-11］。因此，抑制RTECs炎癥的發生對治療腎臟相關疾病具有重要意義。

tRFs以不同方式在癌癥、神經退行性疾病、病毒感染等疾病中發揮重要作用，顯示了它們在多種疾病中都有應用的潛力［12］。tRF-36可以通過調節鐵死亡來促進胰腺炎的進展［13］；tRF5-AlaCGC可通過激活p65導致亞砷酸鹽反應中IL-8分泌增多［14］，表明tRFs可能與細胞的炎癥反應相關。有關tRFs在腎臟疾病方面的研究較少。本課題組前期研究發現，tRF-003634可以通過降低Toll樣受體家族成員4的mRNA穩定性來減輕足細胞損傷［15］，也可能作為MAPK通路的下游效應分子改善足細胞凋亡［16］，表明了tRFs在腎臟疾病中有發揮作用的潛能。然而，tRFs對RTECs損傷的影響尚不清楚。結合課題組前期研究成果，本文選擇了tRF-1：30進行深入研究，結果顯示，HG誘導的RTECs中炎性因子TNF-α、IL-6、MCP-1釋放增多，tRF-1：30表達水平降低，說明tRF-1：30可能與腎小管炎性因子的表達有關。將tRF-1：30過表達后，HG誘導的RTECs中炎性因子TNF-α、IL-6、MCP-1的表達水平降低；TNF-α是一種Ⅱ型跨膜蛋白，與TNF受體1和受體2結合參與復雜的免疫反應和炎癥反應；IL-6是促炎細胞因子，其高表達可導致RTECs發生炎癥反應；MCP-1是趨化因子家族成員，主要參與單核細胞和巨噬細胞的活化、浸潤及遷移，促進炎癥反應［17］。本研究結果表明tRF-1：30可以抑制HG誘導的RTECs炎癥反應。

為進一步研究tRF-1：30影響RTECs炎癥損傷的分子機制，本實驗通過在線數據庫預測發現tRF-1：30與IKZF2存在結合位點。有研究表明過表達IKZF2可能使細胞產生抗炎細胞因子IL-10來促進腫瘤免疫逃逸［18］。另有研究發現，鋅指蛋白36通過降低IKZF2的表達參與炎癥基因的調控［19］。IKZF2與狼瘡性腎炎亦相關，可能成為區分狼瘡性腎炎患者與健康人的生物標志物［20］。IKZF2還可調節輔助性T細胞的發育以介導日本鏈球菌感染的C57BL/6小鼠脾中的免疫反應［21］。因此，IKZF2可能參與免疫和炎癥反應的調控。本實驗結果顯示，HG誘導的RTECs中IKZF2高表達，提示IKZF2可能參與了RTECs的損傷過程；敲低IKZF2可以降低HG誘導的RTECs中炎性因子TNF-α、IL-6、MCP-1的釋放，表明抑制IKZF2的表達可以緩解HG誘導的RTECs炎癥反應。本研究利用生物信息學技術發現了IKZF2與tRF-1：30的相互作用靶點，雙螢光素酶報告實驗為tRF-1：30與IKZF2之間的靶向調控關系提供了證據，表明tRF-1：30可能通過調控IKZF2影響HG誘導的RTECs炎性因子的表達。

綜上所述，tRF-1：30在HG誘導的RTECs中顯著低表達，過表達tRF-1：30可能通過負向調控IKZF2表達水平，進而抑制HG誘導的RTECs釋放炎性因子。本研究尚存在不足之處，雙螢光素酶實驗驗證了tRF-1：30與IKZF2之間的結合，但還無法驗證其是否具有直接的靶向調控關系，在tRF-1：30/IKZF2軸中兩者上下游關系未來還需進一步深入研究加以驗證。

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（2024-01-08收稿 2024-02-01修回）

（本文編輯 胡小寧）