大薊與小薊飲片的鑒別研究

宋曉光 劉曉靜 康帥 劉學杰 王軍棟 張惠惠 孫福東 許紅

【摘 要】 ??目的： 對大薊和小薊飲片進行鑒別研究，為其質量標準的完善和提升提供思路參考。 方法： 應用體式顯微鏡和光學顯微鏡等設備及數碼成像技術，從葉片、莖、苞片、冠毛等細節特征，以及橫切面、粉末的顯微特征，對大薊與小薊飲片進行鑒別研究；采用硅膠GF254薄層板，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）為展開劑，在紫外燈254nm下檢視，建立薄層鑒別方法。 結果： 通過研究發現，大薊和小薊的葉片、莖、苞片、冠毛存在明顯差別，顯微特征差異性較小，粉末特征只在下表皮細胞上存在一定差異，薄層鑒別方法靈敏度高、重現性好，專屬性強。 結論： 通過研究歸納了大薊和小薊飲片的鑒別特征，可為二者的鑒別提供一定的實驗基礎支持，并為其質量標準的完善提供有益思路。

【關鍵詞】 ?大薊；小薊；鑒別；薄層鑒別

【中圖分類號】R282.5 ??【文獻標志碼】 A ???【文章編號】1007-8517（2024）08-0054-07

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.08.zgmzmjyyzz202408012

Studyonthe Identification of Traditional Chinese Medicine Pieces of Cirsii Japonici Herba and Cirsii Herba

SONG Xiaoguang 1 LIU Xiaojing 1 KANG Shuai ?2* ?LIU Xuejie 1 WANG Jundong 1 ZHANG Huihui 1 SUN Fudong 3 XU Hong 1

1.Yantai Institutes for Food and Drug Control，Yantai 264003，China;

2.National Institutes for Food and Drug Control， Beijing 100050，China;

3.Yantai Yuhuangding Hospital， Yantai 264000，China

Abstract： ?Objective ?To study the identification of Cirsii Japonici Herba and Cirsll Herba and toprovide ideas for the improvement of their quality standards. Methods ?Stereo microscope and optical microscopeanddigital imaging technologywere used to observe and record the characters of Cirsii Japonici Herba and Cirsii Herba，including leaves， stems， bracts， crown hairs，powder，transverse section.Using silica gel Gf254 thin-layer plate， ethyl acetate-formic acid-water（8∶ 1∶ 1） as developing agent and examined under UV lamp 254 nm. Results ?There are obviously differences in leaves， stems， bracts， crown hairs between them， andlittle difference in lower epidermal cell;the TLC method has high sensitivity，good reproducibilityand more specificity. Conclusion ?Through research， the identification characteristics of Cirsii Japonici Herba and Cirsii Herba decoction pieces were summarized， it can provide some experimental support for the identification of them， and provide useful ideas for the improvement of their quality standards.

Key words： Cirsii Japonici Herba; Cirsii Herba;Identification;TLC

大薊為菊科植物薊 Cirsium japonicum ?Fisch．ex DC．的干燥地上部分，具有涼血止血、散瘀解毒消癰的功效，用于衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外傷出血、癰腫瘡毒 ?［1］ 。薊屬植物在我國分布有50余種，其中10余種可作藥用 ?［2］ 。小薊為菊科薊屬植物刺兒菜 Cirsium setosum （Willd.）MB.的干燥地上部分 ?［3］ 。大薊和小薊飲片外形相似，成分相近 ?［4］ ，但臨床應用各有側重，不可混淆使用?！缎滦薇静荨份d“大薊生山谷，根療癰腫；小薊生平澤，不能消腫也”；《本草備要》載“小薊力微，不能如大薊之消癰毒” ?［5-6］ 。筆者根據近期市場調研發現，商品藥材及飲片中存在小薊冒用大薊的情況。

本文應用體式顯微鏡、光學顯微鏡對大薊和小薊進行了性狀和顯微鑒別研究，通過體式顯微鏡及其數字化成像系統對大薊和小薊的葉片、莖、苞片、 冠毛進行鑒別研究；通過光學顯微鏡及其數字化成像系統對二者的葉片、莖的橫切面及其粉末進行鑒別研究。在此基礎上，以兩者差異成分柳穿魚葉苷為對照物質，建立薄層色譜鑒別方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 尼康D780型數碼相機（尼康公司）；Olympus BX51 型透射光顯微鏡及DP74 型CCD 成像系統（OLYMPUS 公司）； Olympus SZX7型體式顯微鏡（OLYMPUS 公司）；CM1950型冷凍切片機（徠卡公司）；METTLER TOLEDO XPE205D電子天平（梅特勒-托利多國際貿易（上海）有限公司）；KQ-500B型超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；CAMAG TLC Visualizer 2 薄層色譜數碼成像系統（瑞士卡瑪公司）；CAMAG ATS 4全自動點樣儀（瑞士卡瑪公司）。

1.2 試劑 水合氯醛（中國醫藥集團上?；瘜W工業公司），丙三醇（國藥集團化學有限公司），乙醇等試劑為分析純試劑（北京化工廠）；薄層層析硅膠GF254板（煙臺市化學工業研究所），聚酰胺薄膜（浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠）。乙醇、三氯化鋁、硫酸、甲苯、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酰丙酮、丁酮，以上均購于國藥集團化學試劑有限公司；甲酸（天津市標準科技有限公司），以上均為分析純。甲醇（國藥集團化學試劑有限公司），為色譜純。

蒙花苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：111528-201911）；大薊對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：121411-201903）；柳穿魚葉苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：111728-201703）；小薊對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：121436-201803）。

1.3 樣品 5批大薊樣品均來自中心內合格檢品。5批小薊樣品為自采及市場收集，由煙臺市食品藥品檢驗檢測中心王軍棟副主任中藥師分別鑒定為菊科植物薊 Cirsium japonicum ?Fisch. ex DC.、菊科植物刺兒菜 Cirsium setosum （Willd.）MB.的干燥地上部分。

2 方法

2.1 性狀特征

2.1.1 整體性狀觀察 將樣品放在白色背景臺面上，用數碼相機進行拍攝。

2.1.2 特征性狀觀察 挑選樣品中葉片、苞片，放入水中浸軟后，用擦鏡紙吸去表面水分，壓平后蓋上載玻片，在Olympus SZX7型體式顯微鏡下觀察并拍攝記錄特征；將冠毛壓平后蓋上載玻片，在Olympus SZX7型體式顯微鏡下觀察并拍攝記錄特征。將莖在Olympus SZX7型體式顯微鏡下，分別對表面和斷面進行觀察并拍攝特征。

2.2 顯微特征

2.2.1 橫切面 挑選樣品中葉片、莖，放入水中浸泡4 h后，用擦鏡紙吸去表面水分，切制成大小適宜的塊片，在冷凍切片機冷臺底部滴加少量包埋劑，放入冷凍機中，待溫度降至-20 ℃包埋劑基本固化后，將樣品置于包埋劑中，包埋劑逐層包埋至樣品被完全包埋為止。將樣品預凍后，置于-40 ℃樣平臺上冷凍10 min后，將冷凍好的樣品固定好，在-20 ℃下進行切制，選取平整薄片置于載玻片上，加水合氯醛2滴，加熱，透化，蓋上蓋玻片，放冷后置顯微鏡下觀察并拍攝特征。

2.2.2 粉末特征 將各樣品粉末過5號篩，挑取少許置載玻片上，滴加水合氯醛試液1～2滴，蓋上蓋玻片，置于 OLYMPUS BX51-DP74透射光顯微鏡及CCD數碼成像系統下觀察并拍攝特征。

2.3 薄層鑒別

2.3.1 對照品溶液的制備 取柳穿魚葉苷對照品、蒙花苷對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1 mL含1 mg的對照品溶液，即得。

2.3.2 對照藥材溶液的制備 稱取大薊對照藥材、小薊對照藥材各1 g，加甲醇10 mL，超聲處理 ?30 min ，濾過，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 ?［8］ ?采用中國藥典大薊薄層色譜方法進行試驗，柳穿魚葉苷斑點清晰，所以繼續沿用甲醇為溶劑，超聲提取的方法，即“取本品粉末1 g，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液作為供試品溶液”。

2.3.4 展開與檢視照 《中國藥典2020年版》四部中薄層色譜法 （通則0502）試驗，吸取上述對照品溶液、供試品溶液各5μL，分別點于同一硅膠GF254板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）為展開劑，飽和20 min，展開，取出，晾干，置紫外燈（254 nm）下檢視。

3 結果

3.1 性狀特征 大薊：呈不規則的段。莖短圓柱形，表面綠褐色，有數條縱棱，被絲狀毛；切面灰白色，髓部疏松或中空。葉皺縮，多破碎，邊緣具不等長的針刺；兩面均具灰白色絲狀毛。頭狀花序多破碎。氣微，味淡。葉片葉脈突出，葉刺是從葉脈延伸出來，長的葉刺比較粗硬；冠毛主干毛比較直，分支出更細的枝干毛；苞片邊緣具三角狀的緣毛；莖的斷面具較大的裂隙，木部具針眼狀孔洞，相連成環狀。如圖1、圖2所示。

小薊：呈不規則的段。莖呈圓柱形，表面灰綠色或帶紫色，具縱棱，極少數被白色柔毛。切面中空。葉片多皺縮或破碎，葉齒尖具針刺；兩面均具白色柔毛。頭狀花序，總苞鐘狀；花紫紅色。氣微，味苦。葉片葉脈不突出，葉刺不從葉脈延伸出來，葉刺比較細小；冠毛主干毛波狀彎曲，分支出更細的枝干毛；苞片邊緣無緣毛；莖的斷面呈淡黃色，木部具針眼狀孔洞，相連成環狀。如圖1、圖2所示。

3.2 顯微特征

3.2.1 橫切面特征

3.2.1.1 大薊 莖橫切面：莖表皮細胞1列，大多皺縮，有時可見非腺毛。在棱脊處的厚角組織明顯。皮層薄壁細胞徑向延長。維管束外韌型，排列較為緊密。韌皮纖維和木纖維均微木化。韌皮部由數列薄壁細胞組成。髓部常中空。如圖3所示。

葉橫切面：葉片細胞通常皺縮。上下表皮均為1列細胞，多斷裂，非腺毛易于脫離。上下表皮內側均有下皮厚角組織，突起處尤為明顯。葉下部波浪狀彎曲，靠近中脈下表皮處凸起尤其明顯。維管束外韌型，散在。韌皮纖維和木纖維均微木化。如圖4所示。

3.2.1.2 小薊 莖橫切面：莖表皮細胞1列。棱脊處略有下皮厚角組織。皮層由多列細胞組成，徑向延長。維管束外韌型，排列十分緊密，微木化。韌皮部由數列小方形薄壁細胞組成。髓部常中空。如圖3所示。

葉橫切面：上下表皮均為1列細胞，非腺毛易于脫離。上下表皮內側均有下皮厚角組織，突起處尤為明顯。葉肉細胞主要由海綿細胞組成。維管束外韌型，連接較為緊密。韌皮纖維和木纖維均微木化。如圖4所示。

3.2.2 粉末特征

3.2.2.1 大薊 粉末特征：粉末黃棕色。多細胞非腺毛多斷裂，頂端甚細長，彎曲或扭曲。單細胞非腺毛長短不一，先端較尖或稍鈍圓。葉上表皮細胞類多角形，垂周壁稍增厚或者略成連珠狀；下表皮細胞類長方形，壁波狀彎曲，上下表皮都有細微的角質紋理。上下表皮均有氣孔，保衛細胞3～5個。葉肉細胞中含有草酸鈣結晶，偏光下顯天藍色?；ǚ哿ｎ悎A形，表面有刺。苞片下表皮細胞表面觀條形，垂周壁連珠狀增厚。莖纖維細長。導管為螺紋、網紋和具緣紋孔導管。如圖5所示。

3.2.2.2 小薊 粉末特征：粉末黃棕色或棕綠色。與大薊粉末特征基本一致，只在葉下表皮細胞特征上略有差別，小薊下表皮細胞類方形或類長方形，壁稍波狀彎曲，角質紋理不明顯。如圖6所示。

3.3 薄層色譜鑒別 在薄層色譜中顯示，大薊對照藥材有兩個斑點，上斑點為蒙花苷，下斑點為柳穿魚葉苷，小薊對照藥材有1個斑點，斑點為蒙花苷，斑點清晰，專屬性強，可用于兩者的薄層鑒別。如圖7所示。

4 結論

4.1 性狀特征 大薊和小薊藥材通過葉片形狀、大小等特征很容易區分，但經切制等工藝制成飲片后，葉片多皺縮破碎，不易觀察整體葉形和大小，本文通過體式顯微鏡對葉片葉脈、葉刺的長出方式進行觀察，發現大薊的葉片葉脈突出，葉片邊緣的刺是從葉脈延伸出來，長的葉刺比較粗硬，而小薊葉片葉脈不突出，葉片邊緣的刺是不從葉脈延伸出來，葉刺比較細小。通過體式顯微鏡對冠毛、苞片邊緣及莖進行觀察，發現大薊的主干毛比較直，小薊的主干毛呈波狀彎曲；大薊苞片邊緣有緣毛，而小薊沒有；大薊的莖多被白色絲狀毛，切面灰白色，而小薊大多數莖不被白色毛，切面淡黃色，針眼狀孔洞十分密集。以上區別點可作為兩者飲片鑒別的簡便方法。

4.2 顯微特征 通過研究發現，大薊莖的厚角組織較小薊明顯，小薊在棱脊處略有下皮厚角組織，小薊莖的維管束個數較少，木質部內側纖維數量也較少。大薊葉上部較為平坦，葉下部波浪狀彎曲，靠近中脈下表皮處凸起尤其明顯，小薊葉肉為海綿細胞，木纖維數量較大薊少。大薊和小薊的粉末均具備多細胞非腺毛、單細胞非腺毛、葉上表皮細胞、下表皮細胞、草酸鈣結晶、花粉粒、苞片下表皮細胞、莖纖維、導管等特征，差異性不大，在葉上下表皮細胞的形狀及特征上略微有差別，大薊的上、下表皮細胞均有明顯的波狀角質紋理，下表皮多呈類長方形，小薊的上表皮角質紋理較為明顯，下表皮多呈類方形或類長方形，壁稍波狀彎曲，角質紋理不明顯。

4.3 薄層鑒別 本試驗通過對不同顯色檢視方法、展開劑等進行了系統考察，并對展開條件進行了優化。參照文獻 ?［9-13］ 分別采用10%硫酸乙醇溶液，于105 ℃加熱顯色日光下檢視和紫外燈（254 nm）下檢視，紫外燈（254 nm）下檢視斑點更清晰，靈敏度更高，操作簡便，故采用其為檢視方法。試驗對多種展開劑進行篩選，選用甲苯-乙酸乙酯- 甲酸（9∶ 3∶ 1）、甲苯-甲酸乙酯-甲酸（ 10∶ 8∶ 1 ）、乙酸乙酯-水-甲酸-甲苯（ 17∶ 2∶ ?2∶ 0.8 ?）、乙酸乙酯-乙醇-水（5∶ 1∶ 1）、乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）進行了考察，結果表明，乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）為展開劑時，專屬性好，斑點清晰。此外，不同展開溫度及相對濕度對展開效果無明顯影響。

5 討論

《中國藥典》2020年版中對大薊飲片葉的特征描述為“葉皺縮，多破碎，邊緣具不等長的針刺。”建議標準中對葉刺的描述細化為邊緣具從葉脈延伸出來的不等長針刺。細化后大薊和的葉刺特征更明顯，也易與小薊進行區別。

《中國藥典》2020年版中大薊與小薊的薄層鑒別項下使用的提取溶劑及方法、薄層展開條件、顯色條件完全相同，且經顯色劑顯色后，薄層色譜中蒙花苷斑點變成黃色熒光斑點，柳穿魚葉苷斑點不變色，這就失去了顯色的作用，大薊的判別標準為顯相同顏色的熒光主斑點，則易忽視差異成分柳穿魚葉苷的黑色斑點，易將小薊誤判為大薊，如圖8所示。為防止以上問題發生，建議對中國藥典中大薊薄層色譜進行修訂，在標準中添加柳穿魚葉苷對照物質，并更改薄層展開及顯色條件。

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（收稿日期：2023-08-07 編輯：劉 斌）