基于JNK通路探討補腎活血方對大鼠骨關節炎軟骨細胞凋亡的影響

〔摘要〕 目的 探討補腎活血方（Bushen Huoxue Formula， BSHXF）通過c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase， JNK）信號通路對大鼠骨關節炎（Osteoarthritis， OA）軟骨細胞凋亡的影響。方法 采用白細胞介素-1β （interleukin-1β， IL-1β）誘導體外分離培養的大鼠軟骨細胞構建體外OA模型，并使用不同濃度的BSHXF干預處理。使用MTT法測定細胞活力；CCK-8法檢測細胞增殖能力；流式細胞術評估細胞凋亡情況；Western bolt檢測凋亡相關蛋白裂解的胱天蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、B淋巴細胞瘤-2（B-cell lymphoma 2， Bcl-2）、Bcl-2相關X蛋白（Bcl-2-associated X protein， Bax）水平和JNK、磷酸化c-Jun 氨基末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase， p-JNK）蛋白水平。試劑盒檢測細胞中活性氧（reactive oxygen species， ROS）、丙二醛（malondialdehyde， MDA）、谷胱甘肽（Glutathione， GSH）水平；ELISA法檢測細胞上清液中促炎因子腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白細胞介素-6（interleukin-6， IL-6）含量。結果 （1）與對照組相比，模型組軟骨細胞活力顯著降低，細胞凋亡率顯著升高（P<0.01）；模型組Cleaved Caspase-3、Bax、p-JNK蛋白表達水平顯著升高（P<0.01），Bcl-2蛋白表達水平顯著降低（P<0.01）。與模型組相比，BSHXF治療組軟骨細胞活力升高（P<0.05），凋亡率顯著降低（P<0.01）；BSHXF治療組Cleaved Caspase-3、Bax、p-JNK蛋白表達水平顯著降低（P<0.01），Bcl-2蛋白表達水平升高（P<0.01）。（2）與對照組相比，模型組細胞中ROS和MDA的相對含量顯著升高（P<0.01），GSH的相對含量顯著降低（P<0.01）；模型組細胞中TNF-α和IL-6的含量均顯著升高（P<0.01）。與模型組相比，BSHXF治療組細胞中ROS和MDA的相對含量顯著降低（P<0.01），GSH的相對含量顯著升高（P<0.01）；BSHXF治療組細胞中TNF-α和IL-6的含量均顯著降低（P<0.01）。（3）與溶劑對照組相比，激活劑對照組的p-JNK、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平顯著上調（P<0.05），Bcl-2蛋白表達水平顯著降低（P<0.01），細胞增殖能力下降（P<0.05），細胞凋亡率顯著增加（P<0.01）；BSHXF治療組和溶劑對照組兩組間細胞增殖、凋亡率和凋亡相關蛋白表達（Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2）情況差異均無統計學意義（P>0.05）。（4）與溶劑對照組相比，激活劑對照組的ROS和MDA水平顯著升高（P<0.01），而GSH水平顯著降低（P<0.01），TNF-α、IL-6含量升高（P<0.05）；BSHXF治療組和溶劑對照組兩組間ROS相對含量、MDA、GSH水平差異均無統計學意義（P>0.05）。結論 BSHXF通過抑制JNK信號通路激活抑制IL-1β誘導的OA軟骨細胞凋亡，改善氧化應激和炎癥反應。

〔關鍵詞〕 骨關節炎；補腎活血方；JNK信號通路；軟骨細胞凋亡；氧化應激；炎癥反應

〔中圖分類號〕R274.9 〔文獻標志碼〕A 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.09.004

Effects of Bushen Huoxue Formula on chondrocyte apoptosis in rats with osteoarthritis based on JNK pathway

YANG Jun， PENG Litian， MAO Tao， PENG Wen*

The Second Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410005， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To investigate the effects of Bushen Huoxue Formula （BSHXF） on chondrocyte apoptosis in rats with osteoarthritis （OA） through the c-Jun N-terminal kinase （JNK） signaling pathway. Methods An in vitro OA model was constructed using interleukin-1β （IL-1β） to induce apoptosis in rat chondrocytes cultured ex vivo. Different concentrations of BSHXF were used for intervention. Cell viability was determined using MTT assay; CCK-8 assay was used to examine cell proliferation ability; flow cytometry was employed to assess cell apoptosis; Western blot was used to check the levels of apoptosis-related proteins， including cleaved cysteine protease-3 （Cleaved Caspase-3）， B-cell lymphoma 2 （Bcl-2）， and Bcl-2 associated X protein （Bax）， as well as the levels of JNK and phosphorylated c-Jun N-terminal kinase （p-JNK） proteins. The reagent kit was used to measure the levels of reactive oxygen species （ROS）， malondialdehyde （MDA）， and glutathione （GSH） in cells; ELISA was used to check the content of pro-inflammatory factor of tumor necrosis factor-α （TNF-α） and IL-6 in the cell supernatant. Results （1） Compared with the control group， the model group showed a significant decrease in chondrocyte viability and a significant increase in cell apoptosis rate （P<0.01）; the protein expression levels of Cleaved Caspase-3， Bax， and p-JNK in the model group significantly increased （P<0.01）， while the expression of Bcl-2 significantly decreased （P<0.01）. Compared with the model group， the BSHXF treatment group showed an increase in chondrocyte viability （P<0.05） and a significant decrease in apoptosis rate （P<0.01）; the protein expression levels of Cleaved Caspase-3， Bax， and p-JNK were significantly reduced （P<0.01） and the protein expression level of Bcl-2 increased （P<0.01） in the BSHXF treatment group. （2） Compared with the control group， the relative content of ROS and MDA in the model group cells significantly increased （P<0.01）， while the relative content of GSH significantly decreased （P<0.01）; the content of TNF-α and IL-6 in the model group cells significantly increased （P<0.01）. Compared with the model group， the BSHXF treatment group showed a significant decrease in the relative content of ROS and MDA （P<0.01） and a significant increase in the relative content of GSH （P<0.01）; the content of TNF-α and IL-6 in cells treated with BSHXF was significantly reduced （P<0.01）. （3） Compared with the solvent control group， the activator control group showed a significant upregulation of p-JNK， Cleaved Caspase-3， and Bax protein levels （P<0.05）， a significant reduction in Bcl-2 protein expression （P<0.01）， a decrease in cell proliferation ability （P<0.05）， and a significant increase in cell apoptosis rate （P<0.01）; there were no significant differences in cell proliferation， apoptosis rate， and expressions of apoptosis-related proteins （Cleaved Caspase-3， Bax， and Bcl-2） between the BSHXF treatment group and the solvent control group （P>0.05）. （4） Compared with the solvent control group， the activator control group exhibited a significant increase in ROS and MDA levels （P<0.01） and a significant decrease in GSH level （P<0.01）， with increased content of TNF-α and IL-6 （P<0.05）; there were no significant differences in the relative content of ROS and the levels of MDA and GSH between the BSHXF treatment group and the solvent control group （P>0.05）. Conclusion BSHXF inhibits IL-1β-induced apoptosis in OA chondrocytes by suppressing the activation of JNK signaling pathway， thereby relieving oxidative stress and inflammatory responses.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 osteoarthritis; Bushen Huoxue Formula; JNK signaling pathway; chondrocyte apoptosis; oxidative stress; inflammatory response

骨關節炎（osteoarthritis，OA）是一種以關節軟骨細胞外基質降解、關節軟骨退行性破壞、骨贅形成和關節疼痛為主要特征的慢性關節疾病，嚴重影響患者的生活質量[1-2]。該病主要發生在膝關節、髖關節、脊柱和遠側指間關節等承受較大負重的關節，常見于中老年人群[3]。盡管對OA的治療已有一定進展，但有效延緩或逆轉其病程仍是當前臨床研究的重點[4-5]。補腎活血方（Bushen Huoxue Formula，BSHXF）是一種傳統中藥復方，由多種中草藥組成，具有補肝腎、強筋骨、活血止痛等功效，歷史上用于治療腎虛血瘀導致的病癥，包括中醫學中的“膝痛”“骨痹”[6]。然而，BSHXF對OA的具體作用機制尚待明確。已有研究表明，c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase， JNK）信號通路在細胞應答，特別是炎癥和細胞凋亡過程中扮演重要角色[7]。JNK激活導致炎癥細胞因子釋放增多，加劇關節炎癥和軟骨破壞[8]。同時，氧化應激激活JNK通路，進一步促進炎癥介質的產生，損害關節軟骨細胞[9]。此外，JNK通路的激活促進細胞凋亡信號，導致關節軟骨細胞過度凋亡，是OA進展的一個重要機制[10-11]。因此，針對這些相關信號通路的藥理學調節可能是治療OA的一個潛在策略。本研究旨在探索BSHXF對OA的治療作用及其潛在的分子機制，為OA治療提供新策略和科學依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級雄性Wistar 3天齡大鼠40只，體質量（10±3） g，均購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物資格證書編號：SCXK（京）2021-0011；室溫 24～26 ℃，濕度65%～70%，光照時間 12 h/d，提供水和營養均衡的飲食。實驗方案經湖南中醫藥大學動物實驗倫理委員會批準，倫理批準號：LL2022111702。

1.2 主要試劑及儀器

二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide， DMSO）（批號：ST038）、CCK-8試劑盒（批號：C0037）、細胞凋亡試劑盒（批號：C1052）、放射免疫沉淀法裂解緩沖液（radio immunoprecipitation assay lysis buffer， RIPA）裂解液（批號：P0013B）、脫脂奶粉（批號：P0216）、二喹啉甲酸（bicinchoninic acid， BCA）蛋白定量試劑盒（批號：P0010）、GSH檢測試劑盒（批號：S0053）、活性氧（reactive oxygen species， ROS）檢測試劑盒（批號：S0033S）、丙二醛（malondialdehyde， MDA）檢測試劑盒（批號：S0131S）、TNF-α ELISA試劑盒（批號：PT516）、IL-6 ELISA試劑盒（批號：PI328）均購自北京碧云天生物技術有限公司；Ⅱ型膠原酶（批號：C8150）購自北京索萊寶科技有限公司；凋亡相關蛋白裂解的胱天蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）（批號：ab214430）、B淋巴細胞瘤-2（B-cell lymphoma 2， Bcl-2）（批號：ab196495）、Bcl-2相關X蛋白質（Bcl-2-associated X protein，Bax）（批號：ab182733）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase， GAPDH）（批號：ab181602）、Goat Anti-Rabbit IgG H&L（HRP）（批號：ab6721）、MTT（批號：ab211091）、重組大鼠白細胞介素-1β蛋白因子（批號：ab281807）、茴香霉素（批號：ab120495）均購自英國Abcam公司；c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase， JNK）和磷酸化JNK（phosphorylation-JNK， p-JNK）抗體（批號：#9252）購自美國Cell Signaling Technology公司；TRIzol試劑盒（批號：A33254）、逆轉錄試劑盒（批號：4366597）、熒光定量試劑盒（批號：4349180）均購自美國Thermo Fisher Scientific公司。

LSM710型激光共聚焦顯微鏡（美國卡爾蔡司光學儀器有限公司）；Bio-Rad 680型酶標儀（美國Bio-Rad公司）；MoFloAstrios EQ型流式細胞儀（美國Beckman Coulter公司）。

1.3 細胞培養

使用新生鼠（3日齡），以戊巴比妥鈉（1%溶液，40 mg·kg-1）進行腹腔麻醉，經頸椎脫臼處死后，浸入75%乙醇消毒5 min。取胸廓組織，切碎后在0.2%Ⅱ型膠原酶溶液中37 ℃消化1.5 h。離心（1 000 r/min，10 min，37 ℃）后，再加入0.05%Ⅱ型膠原酶于37 ℃消化3 h。再次離心（1 000 r/min，10 min，37 ℃），用PBS洗滌大鼠軟骨細胞沉淀，并在含10%胎牛血清的DMEM培養基中培養[12]。

1.4 實驗分組與處理

取傳至第2代的大鼠軟骨細胞，以每孔2×105個的密度接種在24孔板中，每孔1 mL。培養24 h后隨機分為對照組：細胞在10%胎牛血清DMEM中正常培養；模型組（OA組）：使用10 ng·mL-1的IL-1β處理正常軟骨細胞24 h，建立OA模型；治療組（OA+BSHXF組）：使用10 ng·mL-1的IL-1β處理細胞24 h后，加入不同劑量（50、100、150、200、250 μg·mL-1）的BSHXF處理24 h；溶劑對照組（OA+BSHXF+DMSO組）；OA+BSHXF+Anisomycin組（激活劑對照組）：使用10 ng·mL-1的IL-1β處理細胞24 h后，加入200 μg·mL-1的BSHXF和5 μmol·L-1的JNK信號通路激活劑Anisomycin處理24 h[13]。每組細胞均在37 ℃、5% CO2的培養箱中培養48 h。

1.5 MTT法檢測各組細胞活力

使用MTT法測定各組細胞的活力[14]。將細胞以每孔3×103個的密度接種在96孔板中，每孔添加100 μL培養基。細胞培養24 h后，按照“1.3”分組處理細胞。處理24 h后，每孔加入10 μL的MTT溶液（5 mg·mL-1），并在37 ℃、5% CO2的條件下繼續孵育4 h。然后棄去上清液，并加入DMSO溶解結晶物。使用酶標儀在490 nm波長下測定吸光度，以反映細胞活力。實驗重復3次。根據MTT實驗結果，選擇表現出最高細胞活力的BSHXF濃度用于后續實驗。

1.6 CCK-8法檢測各組大鼠軟骨細胞增殖情況

取傳至第2代的大鼠軟骨細胞，將細胞以1×103個/孔的密度接種在96孔板中，每孔100 μL。細胞貼壁生長24 h后，按照“1.3”中方法分組處理48 h，每孔加入CCK-8溶液10 μL，37 ℃孵育2 h，使用酶標儀在490 nm波長下測定吸光度，計算細胞活力。

1.7 試劑盒檢測各組氧化應激指標水平

采用試劑盒檢測細胞活性氧（reactive oxygen species， ROS）、丙二醛（malondialdehyde， MDA）、谷胱甘肽（glutathione， GSH）的表達水平。實驗獨立重復3次，所有操作及各試劑的配制均嚴格按照說明書進行。

1.8 流式細胞儀檢測各組細胞凋亡情況

取傳至第2代的大鼠軟骨細胞，以每孔2×105個的密度接種在24孔板中，每孔1 mL。培養24 h后，按照“1.3項”中方法分組處理48 h，收集各組細胞沉淀，以PBS洗滌后計數；每組取2×105個細胞，采用ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒進行ANNEXIN V-FITC/PI雙染，然后采用流式細胞分析儀檢測各組細胞凋亡率[12]。

1.9 ELISA試劑盒檢測各組炎癥因子水平

收集各組干預后的細胞培養液，離心（3 000 r/min，20 min，4 ℃）后收集上清液，按照ELISA試劑盒說明檢測細胞上清中炎癥因子TNF-α、IL-6的表達水平，酶標儀檢測450 nm時的吸光值，進行后續統計分析[16]。

1.10 Western blot檢測各組細胞蛋白表達水平

取出“1.6項”中存于-80 ℃的大鼠軟骨細胞樣品液，于冰水浴中解凍。隨后將樣品進行煮沸變性處理。每組取30 μg總蛋白的樣品，進行SDS-PAGE電泳。電泳完成后，樣品通過濕轉移法轉移到膜上。使用5%脫脂奶粉對膜進行1.5 h的封閉處理。加入一抗，包括Cleaved Caspase-3（稀釋比1∶5 000）、Bcl-2（1∶1 000）、Bax（1∶1 000）、JNK和p-JNK（1∶1 000），并在4 ℃下過夜孵育。次日，使用TBST洗滌膜以去除未結合的一抗。加入二抗：Goat Anti-Rabbit IgG H&L（HRP）（1∶2 000），在室溫下孵育1.5 h。再次洗滌膜后，使用ECL顯色劑進行顯色，并在化學發光成像系統下進行蛋白條帶檢測。整個實驗過程重復3次[12]。

1.11 統計學分析

所有數據均采用GraphPad Prism 8.0軟件進行統計分析。數據以“ｘ±s”表示。多個樣本均采用單因素方差分析，組間數據比較用t檢驗方法，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 BSHXF對各組OA軟骨細胞凋亡的影響

50、100、150、200、250 μg·mL-1的BSHXF對正常軟骨細胞活力無影響（P>0.05，圖1A），各濃度的BSHXF均可提高IL-1β誘導的OA軟骨細胞活力，且呈劑量依賴性（均P<0.05，圖1A）。200 μg·mL-1組細胞活力最高，250 μg·mL-1組細胞活力有所下降（P>0.05，圖1A）。可能是由于過高濃度的BSHXF產生了輕微的細胞毒性。因而選擇200 μg·mL-1的BSHXF進行后續實驗。CCK-8和流式細胞術結果顯示，與空白組相比，模型組軟骨細胞活力顯著降低、細胞凋亡率顯著升高（均P<0.01，圖1B—C）。與模型組相比，治療組軟骨細胞活力升高、凋亡率顯著降低（均P<0.01，圖1B—C）。與空白組相比，OA組Cleaved

Caspase-3、Bax的表達顯著升高，Bcl-2的表達顯著降低（均P<0.01，圖1D）；與模型組相比，治療組處理顯著降低了Cleaved Caspase-3、Bax的表達，并增加了Bcl-2的表達（均P<0.01，圖1D）。這表明BSHXF抑制IL-1β誘導的OA軟骨細胞凋亡。

2.2 BSHXF對各組OA軟骨細胞氧化應激指標及炎癥因子水平的影響

與空白組相比，模型組細胞中ROS和MDA的相對含量顯著升高（P<0.01），GSH的相對含量顯著降低（P<0.01，圖2A）；相較于模型組，治療組細胞中ROS和MDA的相對含量顯著降低（P<0.01），GSH的相對含量顯著升高（P<0.01，圖2A）。ELISA結果顯示，與空白組相比，模型組細胞中TNF-α和IL-6的含量均顯著升高（均P<0.01，圖2B）；相較于模型組，治療組細胞中TNF-α和IL-6的含量均顯著降低（均P<0.01，圖2B）。這表明，BSHXF能改善IL-1β誘導的OA軟骨細胞氧化應激和炎癥反應。

2.3 BSHXF對各組OA軟骨細胞JNK、p-JNK蛋白表達水平的影響

Western blot結果顯示，3組細胞間JNK蛋白水平差異無統計學意義（P>0.05）；而與空白組相比，模型組細胞中p-JNK蛋白表達顯著上調（P<0.01）；相較于模型組，治療組細胞中p-JNK蛋白表達顯著下調（P<0.01）。這表明BSHXF抑制JNK信號通路激活。詳見圖3。

2.4 JNK信號通路激活后BSHXF對各組 OA軟骨細胞凋亡蛋白的影響

在IL-1β誘導細胞中同時加入BSHXF和JNK信號通路激活劑Anisomycin處理24 h。Western bolt結果顯示，與溶劑對照組相比，激活劑對照組的p-JNK蛋白水平顯著上調（P<0.05，圖4A），這表明成功激活了JNK信號通路。隨后，通過CCK-8、流式細胞術和Western bolt檢測細胞增殖、凋亡率和凋亡相關蛋白表達情況。結果顯示，OA+BSHXF和OA+BSHXF+DMSO兩組間細胞增殖、凋亡率和凋亡相關蛋白表達（Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2）情況差異均無統計學意義（P>0.05，圖4B-D）。而與溶劑對照組相比，激活劑對照組細胞增殖能力顯著下降（均P<0.05，圖4B），細胞凋亡率顯著增加（P<0.01，圖4C），Cleaved Caspase-3、Bax水平顯著升高，Bcl-2水平顯著降低（均P<0.01，圖4D）。這表明激活JNK信號通路部分逆轉BSHXF對IL-1β誘導的OA軟骨細胞凋亡的抑制作用。

2.5 激活JNK信號通路后BSHXF對各組OA軟骨細胞氧化應激和炎癥反應的影響

OA+BSHXF和OA+BSHXF+DMSO兩組間ROS相對含量、MDA、GSH水平差異均無統計學意義（均P>0.05，圖5A-B）。而與溶劑對照組相比，激活劑對照組的ROS和MDA水平顯著升高，而GSH水平顯著降低，TNF-α、IL-6含量顯著升高（均P<0.05，圖5A—B）。這表明激活JNK信號通路部分逆轉BSHXF對IL-1β誘導的OA軟骨細胞氧化應激和炎癥反應的改善作用。

3 討論

BSHXF是一種源自傳統中醫理論的中藥復方，傳統上用于治療多種疾病。根據傳統中醫理論，它可能對OA等疾病具有治療潛力[1，5]。在OA的病理機制中，細胞凋亡起著關鍵作用[17]。Caspase-3作為細胞凋亡過程中的主要執行酶，通常以非活化的前體形式存在。細胞在接收到凋亡信號后，會將Caspase-3裂解成活化形式，進而觸發細胞死亡。Cleaved

Caspase-3的表達增加通常與OA中軟骨細胞的損傷和凋亡相關[18]。細胞凋亡的另一關鍵調節因素是Bcl-2和Bax蛋白。其中，Bcl-2通過阻止細胞色素C的釋放和Caspase的激活來防止細胞凋亡，而Bax通過促進細胞色素C釋放和Caspase酶激活推動細胞凋亡。在OA中，上調Bcl-2或下調Bax的表達可能有助于保護軟骨細胞，減少軟骨細胞的凋亡，延緩疾病的發展[19-20]。JNK在調節細胞應激反應，尤其是細胞凋亡和炎癥反應中起關鍵作用[21]。研究表明，抑制JNK信號通路的激活有助于減少軟骨細胞凋亡和炎癥，減緩OA的進展[22-23]。本研究重點關注了BSHXF對IL-1β誘導的OA軟骨細胞凋亡、氧化應激和炎癥反應的調節作用，以及這些作用是否通過JNK信號通路實現，為OA治療提供新的策略。

本研究結果表明，BSHXF對正常軟骨細胞無明顯毒害作用，且可顯著提高IL-1β誘導的OA軟骨細胞活力。特別是在200 μg·mL-1時，細胞活力達到最高。然而，250 μg·mL-1濃度的BSHXF導致細胞活力降低，這可能是由于較高濃度的BSHXF產生輕微的細胞毒性，也可能是由于中藥復方通常包含多種成分，這些成分可能在較高濃度下相互作用產生未預期的效果[24]。進一步研究結果顯示，BSHXF顯著提高了OA軟骨細胞的活力，同時降低了凋亡率和Cleaved Caspase-3、Bax的表達，增加了Bcl-2的表達。提示BSHXF通過調節凋亡相關蛋白的表達來抑制細胞凋亡，從而促進軟骨細胞的存活和增殖，這與他人研究結果相似。在氧化應激和炎癥反應方面，研究發現BSHXF顯著降低了模型組細胞中的ROS和MDA水平，同時提高了GSH水平，這與王柯等[25]的研究結果相似。此外，BSHXF還顯著降低了促炎因子TNF-α、IL-6的含量，這表明BSHXF可能通過降低氧化應激和抑制炎癥因子的釋放來改善OA癥狀，這與陳宇等[26]的研究結果相似。研究表明，BSHXF能顯著抑制p-JNK的表達。當使用Anisomycin時，部分逆轉BSHXF對細胞增殖、凋亡、氧化應激和炎癥反應的影響，從而進一步證實了JNK信號通路在BSHXF改善OA軟骨細胞凋亡、氧化應激和炎癥反應的重要作用。

盡管本研究突出了BSHXF在抑制OA軟骨細胞凋亡、氧化應激和炎癥反應中的潛在作用，但研究存在一些局限性。首先，研究基于體外實驗，其結果可能無法完全代表體內情況。此外，研究中未能完全揭示BSHXF的全部作用機制。同時，BSHXF為復方中藥，具有多靶點、多途徑等特性。未來研究需進一步探索BSHXF的分子靶點和作用機制，并通過動物模型來進一步驗證本文的研究結果。綜上所述，BSHXF通過抑制JNK信號通路的激活進而抑制IL-1β誘導的OA軟骨細胞凋亡，改善氧化應激和炎癥反應，為治療OA提供了新的理論基礎。

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本文引用： 楊 軍， 彭力田， 毛 滔， 彭 文. 基于JNK通路探討補腎活血方對大鼠骨關節炎軟骨細胞凋亡的影響[J]. 湖南中醫藥大學學報， 2024， 44（9）： 1575-1582.

〔收稿日期〕2024-01-14

〔基金項目〕湖南省中醫藥科研計劃項目（E2022114）。

〔通信作者〕*彭 文，男，副主任醫師，E-mail：1965067@qq.com。