大黃素抑制背根神經節壓迫小鼠模型STAT3、VEGFA、p-ERK蛋白表達及其鎮痛作用研究

〔摘要〕 目的 研究大黃素（Emodin， ED）對背根節壓迫小鼠模型的鎮痛作用以及對STAT3/VEGFA/p-ERK信號通路的影響。方法 建立背根神經節慢性壓迫（chronic compression damage， CCD）小鼠疼痛模型，隨機分為空白組、模型組、普瑞巴林組及ED低、中、高劑量組。通過檢測動物機械痛敏和熱輻射痛敏閾值、醋酸扭體實驗評價鎮痛效果；ELISA檢測小鼠L4-L5節段脊髓組織中白細胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α， TNF-α）和CD18等炎癥因子含量；Western blot和免疫熒光檢測脊髓組織信號轉導子和轉錄激活子3（signal transducer and activator of transcription 3， STAT3）、血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）和磷酸化細胞外信號調節激酶（phosphorylated extracellular signal-regulated kinases 1/2， p-ERK1/2）蛋白表達。結果 與空白組比較，模型組的機械痛敏、熱輻射痛敏閾值顯著降低（P<0.05），脊髓背角炎癥因子表達顯著增高（P<0.05），脊髓中VEGFA、STAT3、p-ERK的表達顯著上調（P<0.05）。與模型組比，ED低、中、高劑量組CCD小鼠模型的機械痛敏、熱輻射痛敏閾值升高（P<0.05）；脊髓背角炎癥因子表達降低（P<0.05）；脊髓背角小膠質細胞STAT3、VEGFA、p-ERK的表達降低（P<0.05），醋酸誘導的小鼠急性疼痛中扭體次數減少（P<0.05）。結論 ED對背根節壓迫小鼠模型有良好的鎮痛作用，其機制可能與抑制脊髓背角炎癥因子表達和STAT3/VEGFA/p-ERK介導的脊髓小膠質細胞活化有關。

〔關鍵詞〕 大黃素;背根神經節慢性壓迫；神經病理性疼痛；STAT3/VEGFA/p-ERK信號通路；鎮痛；炎癥介質

〔中圖分類號〕R285.5 〔文獻標志碼〕A 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.09.005

Inhibition of emodin on STAT3， VEGFA， and p-ERK protein

expressions in mouse model of dorsal root ganglion compression

and its analgesic effect

ZENG Jinming1， FAN Chenglong1， DENG Jiao1， QU Zhanli2， LI Gang1*

1. Department of Anesthesiology， The Second Clinical Medical College of Sichuan North Medical College， Nanchong， Sichuan 637000， China; 2. Department of Neurology， The Second Clinical Medical College of Sichuan North Medical College， Nanchong， Sichuan 637000， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To study the analgesic effect of emodin （ED） on dorsal root ganglion compression mouse model and its impact on STAT3/VEGFA/p-ERK signaling pathway. Methods A chronic compression damage （CCD） pain mice model was established and the mice were randomized into blank group， model group， pregabalin group， low-， medium-， and high-dose ED groups. The mechanical and thermal radiation pain sensitivity thresholds of the animals were measured， and the analgesic effect was evaluated using the acetic acid writhing test; the levels of inflammatory factors such as Interleukin-6 （IL-6）， tumor necrosis factor-α （TNF-α）， and CD18 in the spinal cord of mice at L4-L5 levels were checked by ELISA; the protein expressions of signal transducer and activator of transcription 3 （STAT3）， vascular endothelial growth factor （VEGF）， and phosphorylated extracellular signal-regulated kinases 1/2 （p-ERK1/2） in the spinal cord were determined by Western blot and immunofluorescence. Results Compared with the blank group， the model group showed significantly decreased mechanical and thermal radiation pain sensitivity thresholds， as well as significantly increased expression of inflammatory factors in the spinal dorsal horn （P<0.05）， and the expressions of VEGFA， STAT3， and p-ERK in spinal cord were significantly up-regulated （P<0.05）. Compared with the model group， the low-， medium-， and high-dose ED groups of the CCD mouse model exhibited increased mechanical and thermal radiation pain sensitivity thresholds （P<0.05）， decreased expression of inflammatory factors in spinal dorsal horn （P<0.05）， reduced expressions of STAT3， VEGFA， and p-ERK in spinal dorsal horn microglia （P<0.05）， and a decreased number of writhing in acute pain induced by acetic acid in mice （P<0.05）. Conclusion ED has a good analgesic effect on dorsal root ganglion compression mouse model， and its mechanism may be related to the inhibition of inflammatory factor expression in the spinal dorsal horn and the activation of spinal microglia mediated by STAT3/VEGFA/p-ERK.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 emodin; chronic compression of dorsal root ganglion; neuropathic pain; STAT3/VEGFA/p-ERK signaling pathway; analgesia; inflammatory mediator

背根神經節（dorsal root ganglion， DRG）是脊髓神經根部的結構，包含感覺神經元胞體，負責傳導來自身體特定區域的感覺信息至中樞神經系統[1-2]。當背根神經節由直接或間接因素受到壓迫時，機械性壓力可引起局部炎癥反應，釋放炎性介質如前列腺素，增強痛覺信號傳導，引發劇烈腰疼以及下肢放射性疼痛（坐骨神經痛）；持續的壓迫可能導致背根神經纖維損傷、缺血或變性，進一步影響神經傳導，出現感覺異常、肌肉力量減弱及反射改變等神經功能受損表現；長時間的壓迫還可能誘發DRG自身及其周圍組織的繼發性病理變化，如水腫、纖維化甚至神經元死亡，加重癥狀并影響治療效果[1-2]。DRG受壓在腰椎間盤突出癥中扮演著關鍵的角色，是疾病引發疼痛及神經癥狀的核心環節之一，也是臨床治療時需重點考慮解除病因以改善患者生活質量的重要目標[2]。

信號轉導及轉錄激活因子3 （signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）/血管內皮生長因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA）/磷酸化的細胞外調節蛋白激酶（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase，p-ERK）信號通路在DRG介導腰痛的過程中具有重要的作用[3-4]。當腰椎間盤突出或腰背部組織炎癥等病理狀態發生時，這些分子信號途徑可能被激活并參與到疼痛的產生和維持中。STAT3是一種轉錄因子，在多種細胞應答過程中起到關鍵作用，包括炎癥反應和細胞增殖；在神經病理性疼痛背景下，STAT3在DRG內可能因炎癥因子刺激而活化，促進與疼痛相關的基因表達，從而加劇痛覺敏感性[5-7]。VEGFA原本是參與血管生成的重要生長因子，但研究發現它也在神經損傷和炎癥狀態下于DRG上調表達；VEGFA可增強神經元的興奮性，通過調節離子通道功能及促進神經纖維的新生和重塑，間接導致疼痛感覺的增強[8-10]。ERK屬于絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）家族成員，其磷酸化形式p-ERK代表了該信號通路的激活狀態；在神經病理性疼痛條件下，p-ERK信號通路在DRG中被激活，不僅影響神經元的生存與分化，還參與調控疼痛相關基因的轉錄，進而增加對疼痛刺激的感知和傳遞[11-13]。STAT3/VEGFA/p-ERK信號通路在DRG中協同作用，通過調控神經元功能狀態、炎癥反應和細胞內信號傳導，介導并加劇腰痛的發生和發展[3]。大黃素（Emodin，ED）具有鎮痛、抗炎作用[14-15]，但其對疼痛的治療作用及機制尚不明確。本文旨在探究大黃素對慢性縮窄損傷（chronic constriction damage，CCD）小鼠疼痛模型的鎮痛作用及可能的作用機制，為研發新的鎮痛策略提供理論依據。

1 材料

1.1 實驗動物

54只SPF級ICR雄性小鼠，體質量18～22 g，合格證號：SCXK（京）2021-0011。所使用實驗動物購自北京維通利華實驗動物技術有限公司（許可證號：SYXK（京）2019-0008），在動物實驗中心進行飼養，自由攝食、飲水，光照周期為12 h光/12 h暗，溫度控制在（23±1） ℃，濕度為55%±5%。在適應性飼養2～3 d后用于實驗。該實驗經過川北醫學院第二臨床醫學院倫理委員會批準，實驗動物倫理審批號：2022KY1145。

1.2 藥物與試劑

大黃素（美國Sigma-Aldrich公司，批號：2082588）；普瑞巴林膠囊[齊魯制藥（海南）有限公司，批號：2022.03.26]；STAT3、VEGFA、p-ERK1（沈陽萬類生物有限公司，批號分別為WLP2412、WLP001a、WLP1512）；小膠質細胞標志物（ionized calcium-binding adapter molecule 1，IBA-1）（英國Abcam公司，批號分別為ab201015、1832039、1816955）；GAPDH（美國Cell Signaling Technology公司，批號：2118s）；TNF-α試劑盒（上海翌圣生物科技股份有限公司，批號：98029ES48）；IL-6（上海碧云天生物技術公司，批號：PI326）；CD18試劑盒（上海酶聯生物科技有限公司，批號：E2023？鄄0803-31063A）；DAPI染色試劑（武碧云天生物科技有限公司，批號：C1006）。

1.3 儀器設備

37370型足底紅外熱刺激儀（法國BIOSEB公司）；VonFrey型機械刺痛測試包（上海軟隆科技發展有限公司）；Varioskan LUX型多功能酶標儀[賽默飛世爾科技（上海）有限公司]；CM1950型冰凍切片機[徠卡生物系統（努斯洛赫）有限公司]；WSF400LED型倒置熒光顯微鏡（廣州微域光學儀器有限公司）；冷熱板測痛儀（上海玉研科學儀器有限公司）；光熱尾痛測試儀（北京亞歐德鵬科技有限公司）；ELITE系列電泳儀（蘇州賽恩斯儀器有限公司）。

2 實驗方法

2.1 疼痛模型的建立與藥物、試劑配制

使用“L”型不銹鋼絲插入椎間孔建立CCD小鼠模型，模擬壓迫神經節或神經根的經典動物模型，持續的壓迫可導致疼痛、感覺缺失等神經元的異常反應[16]。動物造模后，能夠保持肢體的感覺和運動功能，動物自主活動減少；造模后的動物表現出顯著的對機械性和熱痛敏感，動物手術后對側的肢體亦表現出顯著的對機械性和熱痛敏感。CCD小鼠有上述表現或行為學異常，提示造模成功。本文構建的CCD小鼠模型參照DECOSTERD等的方法[17]，具體步驟如下：首先小鼠使用1%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）進行麻醉。剃毛，消毒后然后沿著L4～L5脊椎左側約0.5 cm處手術刀縱向切口，使用鈍器分離器充分暴露腰4至腰5橫突及乳狀突等解剖結構，直至術野完全暴露左側第4腰椎間孔。采用直徑為0.6 mm不銹鋼絲（長約5 mm）小心緩慢緊貼椎間孔上緣插入左側腰4椎間孔，進針方向為鋼絲向頭背方向與與脊柱側面水平線成10°且與背部正中線成30°。觀察到同側后肢肌肉輕微顫動表示鋼絲插入成功。生理鹽水沖洗傷口，縫合，放回鼠籠等待其蘇醒。預防傷口感染。對于空白組的動物，暴露椎間孔后即縫合術口。動物造模次日口服灌胃給予相應受試物。

藥物配制：稱取所需量受試物（ED和普瑞巴林）置于定容過的燒杯中，緩慢加入少量生理鹽水，使受試物表面潤濕后再緩慢加入生理鹽水，定容至所需體積。使用生理鹽水稀釋0.6%醋酸溶液至所需體積。

2.2 動物分組與給藥

將54只實驗小鼠隨機分為6組，即空白組、模型組、普瑞巴林組（60 mg/kg）及 ED 低、中、高劑量組（7.5、15、30 mg/kg）。空白組只暴露椎間孔后即縫合術口；模型組CCD小鼠模型是使用“L”型不銹鋼絲插入椎間孔，具體操作見上述造模方法；普瑞巴林組在模型組基礎上給予普瑞巴林（60 mg/kg）灌胃；ED低、中、高劑量組在模型組基礎上給予ED低、中、高劑量（7.5、15、30 mg/kg）灌胃。第二天上午9點起開始給藥，空白組和模型組動物灌胃給予等體積的生理鹽水。每日1次，連續16 d。

受試物劑量設置理由：根據人與小鼠的體表面積折算等效劑量。普瑞巴林臨床推薦最大日用劑量為5 mg/kg，折算成小鼠的給藥劑量為60 mg/kg。根據文獻報道[16]，50 mg/kg ED對結腸癌小鼠模型的腫瘤具有明顯抑制作用。因此，本研究將30 mg/kg設為最大給藥劑量，并以2倍為梯度，設置低劑量組與中劑量組。

2.3 取材

末次給藥后1.5 h，使用1%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）麻醉。打開椎骨游離脊髓取出L4～L5脊髓節段，借助顯微鏡游離L4～L5脊髓背角，擦除血跡，保存樣品備測，用于免疫熒光實驗、ELISA和Western blot檢測評價ED鎮痛藥效。

2.4 機械痛覺和熱輻射痛覺閾值的檢測疼痛情況

將動物放置安靜的環境適應1～2 h。使用Von Frey細絲（2～26） g隨機測試小鼠左后足足底的機械痛覺閾值變化，采用序貫法檢測小鼠縮足反應并通過軟件計算50%縮足閾值。紅外線熱刺激儀依照時間順序聚焦熱源，于小鼠左后足底中央，觀察熱刺激縮足反應的潛伏期。每只動物每隔5 min重復測試，共測試3次。最大反應時間預設定為20 s，基礎閾值預設范圍：18～22 s。

2.5 醋酸扭體實驗檢測疼痛情況

普瑞巴林組于實驗前0.5 h灌胃給予60 mg/kg普瑞巴林，ED低、中、高劑量組（7.5、15、30 mg/kg）于實驗前1 h灌胃給予相應濃度ED，空白組和模型組給予等體積生理鹽水。動物均按照10 mL/kg腹腔注射0.6%醋酸溶液，記錄小鼠20 min內的扭體次數。

2.6 ELISA檢測TNF-α、IL-6和CD18的含量

嚴格按照ELISA試劑盒說明書操作，檢測各組小鼠L4-L5節段脊髓組織中TNF-α、IL-6和CD18的含量。使用FULL-自動酶標儀檢測各組樣本的吸光度值，計算TNF-α、IL-6和CD18的相對含量，進行統計學分析。

2.7 Western blot檢測STAT3、VEGFA、ERK1/2蛋白表達水平

提取各組小鼠L4～L5脊髓組織，考馬斯亮藍法測定蛋白質濃度。進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉膜，封閉，孵育一抗（STAT3，1∶800；VEGFA，1∶300；p-ERK1/2，1∶500；ERK1/2，1∶500；GAPDH，1∶1 000）過夜，PBS洗滌3次，室溫孵育二抗（1∶5 000），PBS洗滌3次后顯影、凝膠成像儀成像，最后用Image J軟件分析結果。

2.8 免疫熒光法檢測STAT3、VEGF、p-ERK1/2蛋白表達水平

取出脊髓組織進行病理切片，PBS漂洗，封閉，與特異性一抗（STAT3、VEGF、p-ERK1/2、IBA-1），4 ℃孵育過夜。PBS漂洗后，室溫孵育熒光二抗2 h。熒光顯微鏡下觀察標志物在組織中的表達和定位。采用圖像分析系統計算陽性細胞率和積分吸光度值。

2.9 統計學分析

采用SPSS 18.0軟件進行統計分析。數據以“ｘ±s”表示，采用單因素方差分析（one-way ANOVA）評估不同處理組之間是否存在顯著差異，進一步使用多重比較法（Tukey's HSD test）明確各實驗組與對照組之間的統計學差異，P<0.05為差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 ED對各組機械痛敏及熱輻射痛敏閾值的影響

與空白組相比，模型組機械痛敏和熱輻射痛敏閾值明顯降低（P<0.05）；與模型組相比，ED低、中、高劑量組及普瑞巴林組機械痛敏和熱輻射痛敏閾值明顯上升（P<0.05）；與ED高劑量組比較，低、中劑量組機械痛敏和熱輻射痛敏閾值明顯降低（P<0.05）；與ED中劑量組比較，低劑量組機械痛敏和熱輻射痛敏閾值明顯降低（P<0.05），普瑞巴林組機械痛敏和熱輻射痛敏閾值明顯增加（P<0.05）。詳見表1。

3.2 ED對各組疼痛所致小鼠疼痛扭體次數的影響

與空白組相比，模型組小鼠的扭體次數顯著增加（P<0.05）。與模型組相比，ED低、中、高劑量組及普瑞巴林組扭體次數減少（P<0.05）；與ED高劑量組比較，低、中劑量組及普瑞巴林組扭體次數增加（P<0.05）；與ED中劑量組比較，低劑量組及普瑞巴林組扭體次數增加（P<0.05）；與普瑞巴林組相比，ED高劑量組扭體次數無明顯差異（P>0.05）。詳見圖1。

3.3 ED對各組脊髓背角炎癥因子表達水平的影響

與空白組相比，模型組脊髓組織中炎癥因子（TNF-α、IL-6和CD18）水平顯著增加（P<0.05）；與模型組相比，ED低、中、高劑量組及普瑞巴林組小鼠病變脊髓組織中炎癥因子（TNF-α、IL-6和CD18）水平顯著降低（P<0.05）；與普瑞巴林組相比，ED低、中劑量組炎癥因子水平明顯上升（P<0.05）；與ED高劑量組比較，ED低、中劑量組炎癥因子水平明顯上升（P<0.05）；與ED中劑量組比較，ED高劑量組炎癥因子水平明顯降低（P<0.05）。詳見表2。

3.4 ED對各組脊髓背角組織STAT3表達水平的影響

與空白組比較，模型組小鼠脊髓背角組織中的STAT3表達量及IBA-1與STAT3共同標定的陽性細胞數顯著增加（P<0.05）。與模型組比，ED中、高劑量組以及普瑞巴林組STAT3表達量及IBA-1與STAT3共同標定的陽性細胞數顯著降低（P<0.05）；與普瑞巴林組比，ED低、中劑量組STAT3表達量及IBA-1與STAT3共同標定的陽性細胞數顯著增加（P<0.05）；與ED高劑量組比，ED低、中劑量組STAT3表達量及IBA-1與STAT3共同標定的陽性細胞數顯著增加（P<0.05）。詳見圖2。

3.5 ED對各組脊髓背角組織VEGFA表達水平的影響

與空白組比較，模型組小鼠脊髓背角組織中的VEGFA表達量及IBA-1與VEGFA共同標定的陽性細胞數顯著增加（P<0.05）。與模型組比，ED中、高劑量組以及普瑞巴林組VEGFA表達量及IBA-1與VEGFA共同標定的陽性細胞數顯著降低（P<0.05）；與普瑞巴林組比，ED低、中劑量組VEGFA表達量及IBA-1與VEGFA共同標定的陽性細胞數顯著增加（P<0.05）；與ED高劑量組比，ED低、中劑量組VEGFA表達量及IBA-1與VEGFA共同標定的陽性細胞數顯著增加（P<0.05）。詳見圖3。

3.6 ED對各組脊髓背角組織p-ERK表達水平的影響

各組間ERK蛋白表達水平無顯著性差異（P>0.05）。與空白組比較，模型組小鼠脊髓背角組織中的p-ERK表達量及IBA-1與p-ERK共同標定的陽性細胞數顯著增加（P<0.05）。與模型組比，ED中、高劑量組以及普瑞巴林組p-ERK表達量及IBA-1與p-ERK共同標定的陽性細胞數顯著降低（P<0.05）；與普瑞巴林組比，ED低、中劑量組p-ERK表達量及IBA-1與p-ERK共同標定的陽性細胞數顯著增加（P<0.05）；與ED高劑量組比，ED低、中劑量組p-ERK表達量及IBA-1與p-ERK共同標定的陽性細胞數顯著增加（P<0.05）。詳見圖4。

4 討論

慢性神經性疼痛，常由DRG壓迫引發，是臨床上最常見且治療難度較高的癥狀之一。盡管科學家和臨床醫生已經探索了眾多治療靶點和方法，但臨床治療效果仍有限。據研究報道，約11.9%的人口遭受著難以控制的神經性疼痛[18]。這種慢性疼痛不僅嚴重影響患者的生活質量，還導致了醫療保健成本的增加和生產力的損失[19]。在保守治療失敗后，藥物治療成為選擇，但往往受限，尤其是阿片類藥物的使用，其成癮性成為一個嚴重問題[20]。CCD小鼠模型是研究慢性疼痛的重要動物模型，可以模擬人類慢性疼痛的病理生理過程[3]。CCD模型不僅有助于揭示疼痛信號在神經系統中的傳遞、處理和調控機制，還可以探究神經可塑性、神經炎癥和神經再生等與慢性疼痛密切相關的領域[4]。此外，CCD模型在藥物研發領域具有極高的應用價值，它可以用來評估不同藥物對慢性疼痛的治療效果，探討藥物的作用機制，并研究藥物的毒副作用、耐受性及聯合用藥等問題。CCD模型還能用于研究慢性疼痛對動物行為的影響，通過觀察小鼠在慢性疼痛狀態下的行為變化，可以更好地理解慢性疼痛對患者情緒、認知功能和社交行為的影響，從而為患者提供有效的心理干預。通過對CCD小鼠模型進行基因編輯，可以揭示特定基因在疼痛感知和傳遞中的作用，為慢性疼痛的遺傳基礎研究和基因治療提供理論基礎[4]。總之，CCD小鼠疼痛模型在慢性疼痛研究領域具有廣泛的應用價值，通過對該模型的研究可以深入了解慢性疼痛的神經生物學機制，為藥物研發提供實驗依據，并為臨床治療提供新的思路。

ED作為一種天然的苯醌類化合物，存在于多種中草藥中，為中藥大黃和虎杖的主要成分。研究表明[14-15]，ED表現出多方面的藥理活性，ED可能通過影響神經遞質釋放或其他疼痛信號傳導途徑發揮一定的鎮痛效果；在神經病理性疼痛的研究中，ED可通過調節VEGF/ERK信號通路影響痛覺傳遞，這表明它可能對疼痛有一定的調控作用。此外，ED對多種炎癥反應有抑制作用，能夠通過調節相關炎癥因子的表達來減輕炎癥及疼痛癥狀[21-22]。

在探討ED的鎮痛作用中，STAT3、VEGFA和p-ERK三個蛋白在信號傳導通路中的相互作用至關重要，它們參與調控神經生長、炎癥反應以及組織修復過程，與疼痛的發生和發展密切相關[3-4]。STAT3作為上游的轉錄因子，在多種病理條件下被激活，其激活可以促進包括VEGFA在內的多種基因的表達，促進傷害感受神經元的功能改變，從而加劇疼痛感[5-6]。VEGFA的上調不僅促進血管生成，還可能通過其受體作用于神經元，增強神經興奮性，從而在神經病理性疼痛中起到作用[8-10]。而p-ERK作為MAPK信號通路的關鍵成員，其激活狀態影響著細胞的多種生物學功能，包括痛覺信號的傳導；同時，ERK也與VEGFA和STAT3信號傳導互作，共同介導炎癥反應和疼痛感知的持續和放大[3，11-13]。STAT3的激活可以導致VEGFA的表達增加，VEGFA通過其受體影響神經元功能，可能進一步激活或增強p-ERK的信號傳導。p-ERK的激活又可以反饋調節STAT3的活性，形成一個復雜的調控網絡[3，11-13]。在這個網絡中，ED可能通過抑制STAT3的磷酸化和活化，減少VEGFA的表達，進而阻斷p-ERK的激活，從而在多個層面上減輕疼痛信號的傳導和放大，實現其鎮痛效果。因此，深入研究這3個蛋白之間的相互作用及其在疼痛信號通路中的具體作用機制，對于闡明ED的鎮痛作用具有重要意義。

本研究結果表明，ED對CCD小鼠模型的機械痛敏、熱輻射痛敏在最佳藥效點閾值較模型組顯著降低；通過小鼠醋酸扭體實驗也進一步證實ED對CCD小鼠的鎮痛作用，且與普瑞巴林（陽性對照藥物）的效果相當，證實了ED作為一種潛在的鎮痛劑的可行性。CD18是黏附分子成員β2整合素中的一種，主要分布于單核-巨噬細胞、自然殺傷細胞等，在白細胞與血管內皮細胞黏附中起重要作用，參與炎癥的發生[23]。IL-6和TNF-α是參與炎癥反應的炎性介質，在疼痛的發生、發展過程中起到重要作用[24]。本研究表明，ED可降低CCD小鼠模型中脊髓背角組織IL-6、TNF-α和CD18的含量，提示ED發揮鎮痛作用可能與抑制細胞釋放炎癥因子有關。CCD小鼠疼痛模型誘導疼痛的產生與主要誘導脊髓小膠質細胞活化、STAT3激活、炎癥因子表達等相關[3-4]。脊髓小膠質細胞在神經炎癥誘導的疼痛發生中起關鍵作用，本研究通過標記IBA-1對脊髓小膠質細胞進行了研究。在分子層面，我們觀察到CCD模型中STAT3、VEGFA和p-ERK的表達水平顯著上調，這與文獻[3，4]中關于這些分子在神經病理性疼痛中的作用相一致。本研究證實ED可抑制STAT3、VEGFA、p-ERK在小膠質細胞中的表達、同時抑制脊髓炎癥因子水平，提示ED抑制神經炎癥誘導的疼痛可能與小膠質細胞STAT3、VEGFA、p-ERK等信號調控有關。

綜上，本研究表明，ED具有良好的鎮痛作用，可降低CCD小鼠模型中脊髓背角組織中與疼痛發生、發展相關的炎癥因子IL-6、TNF-α和CD18表達，其鎮痛機制與抑制STAT3、VEGFA、p-ERK介導的脊髓小膠質細胞活化相關。

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〔收稿日期〕2024-02-07

〔基金項目〕四川省自然科學基金項目（2022NSFSC0756）。

〔通信作者〕*李 剛，男，碩士，碩士研究生導師，主任醫師，E-mail：ligang39074@126.com。