ELISA法對梅毒螺旋體感染診斷作用分析

【摘要】目的：研析在臨床診斷時，對梅毒螺旋體感染實施ELISA的診斷效果。方法：選取2021年1月—2023年12月收治的70例疑似梅毒螺旋體感染患者，均行ELISA和TRUST檢測，比較兩種檢測方法的陽性率、特異性、靈敏度、陽性預測值以及陰性預測值，并對比梅毒螺旋體感染組和非梅毒螺旋體感染組IgM、IgG與IgA水平。結果：梅毒螺旋體感染組與非梅毒螺旋體感染組IgM、IgG與IgA水平比較均存在差異（P<0.05）；TRUST法與ELISA法陽性率、特異性、靈敏度、陽性預測值以及陰性預測值比較存在差異（P<0.05）。結論：在臨床診斷時，對梅毒螺旋體感染實施ELISA是有診斷價值的。

【關鍵詞】梅毒螺旋體感染；TRUST；ELISA；特異性；靈敏度；陽性率

Analysis of the diagnostic effect of ELISA on Treponema pallidum infection

ZHAO Rudi， ZHAO Kaiping

Pucheng County Maternal and Child Health and Family Planning Service Center， Weinan， Shaanxi 715500， China

【Abstract】Objective：To investigate the diagnostic effect of ELISA on Treponema pallidum infection in clinical diagnosis.Methods：70 suspected patients with Treponema pallidum infection admitted from January 2021 to December 2023 were selected and tested by ELISA and TRUST.The positive rate，specificity，sensitivity，positive predictive value and negative predictive value between the two detection methods were compared，and the IgM，IgG and IgA levels were compared between the Treponema pallidum infection group and the non Treponema pallidum infection group.Results：There were differences in the levels of IgM，IgG and IgA between the Treponema pallidum infection group and the non Treponema pallidum infection group （P<0.05）；There were differences in the positivz71LWUhEht5715Ztplt8mg==e rate，specificity，sensitivity， positive predictive value and negative predictive value between TRUST method and ELISA method （P<0.05）.Conclusion：ELISA is valuable in clinical diagnosis of Treponema pallidum infection.

【Key Words】Treponema pallidum infection； TRUST； ELISA； Specificity； Sensitivity； Positive rate

梅毒是一種由梅毒螺旋體引起的慢性傳染病，是我國最常見的性傳播疾病之一[1]。梅毒患者的臨床癥狀不僅多種多樣，而且由于梅毒的生物學特征呈螺旋狀，因此梅毒沒有直接的診斷方法[2]。目前，在醫學中廣泛使用的梅毒螺旋體檢測方法主要分為兩類：一種是病原體測試，另一類是血清學測試[3]。病原測試是針對病原體的直接監測，現在臨床應用較少，而通過檢測血液中的抗體來檢測感染的血清學方法現在在臨床實踐中被廣泛使用來檢測梅毒螺旋體[4]。血清檢查的實驗過程更容易，對普遍篩查更有用，有些實驗可以自動化。實驗結果更穩定、更直觀，可以作為梅毒診斷實驗使用。實驗結果具有更大的臨床意義，不僅可以作為梅毒的診斷標準，還可以用于監測療效、復發等。但是有很多血清學測試方法（TRUST、RPR、ELISA），需要找到一種更敏感、更有效的方法。本研究研析在臨床診斷時，對梅毒螺旋體感染實施ELISA的診斷效果。

1 資料與方法

1.1基本資料

選取2021年1月—2023年12月收治的70例疑似梅毒螺旋體感染患者，年齡10～75歲，平均年齡（43.26±7.55）歲，男22例，女48例，最終確診為梅毒螺旋體感染49例，非梅毒螺旋體感染21例。

1.2、研究方法

ELISA方法：采集所有人的血液，分離血清。

（1）包被抗原：抗原稀釋（抗原+包被液，稀釋比例根據實際情況），加稀釋液每孔1～10μg，200μL，在37℃溫箱進行孵育，時間為1h，然后放到4℃冰箱16～18h。

（2）洗滌：將盡板孔中的液體倒出，盡量倒干凈，然后每孔都加滿洗滌buffer，室溫凈值3min，重復3次，3次后將反應板倒置在吸水紙上，流盡孔中的洗滌液。每孔加入200μL封閉液，在37℃溫箱進行孵育，時間為1h。洗滌同（2）。加被檢血清：稀釋被檢血清，可以進行梯度稀釋，每孔200μL。同時作陰性對照。在37℃溫箱進行孵育，時間為2h。洗滌同（2）。每孔加200μL的辣根過氧化物酶羊抗兔IgG，在37℃溫箱進行孵育，時間為1h。洗滌同（2）。加底物：每孔加200mL鄰苯二胺溶液，室溫反應10～15min。每孔加50μL終止液。

觀察結果：使用酶免疫檢測器記錄490nm的讀數。

結果：反應孔顏色越深，陽性程度越強。陰性反應是無色或很淡的。根據顏色的深淺，用“+”和“-”表示。OD值也可以在450nm（ABTS為410nm）下測量。空白對照孔置零后，測量每個孔的OD值。如果樣品孔的OD值比陰性對照孔的OD值大2.1倍，則為陽性。

TRUST方法：采集靜脈血3mL，立即分離血清。甲苯胺應與抗原混合，觀察快速血清素反應后產生的凝集塊。

1.3觀察指標

比較兩種檢測方法的陽性率、特異性、靈敏度、陽性預測值以及陰性預測值，并對比梅毒螺旋體感染患者和非梅毒螺旋體感染患者IgM、IgG與IgA水平。

1.4統計學分析

采用SPSS 24.0統計學軟件進行數據分析。計數資料采用（%）表示，進行x2檢驗，計量資料采用（x±s）表示，進行t檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢測方法陽性率比較

由表1計算的數據可知，與TRUST比較，ELISA檢出陽性率更高（P<0.05）。

2.2兩種檢測方法特異性、靈敏度、陽性預測值及陰性預測值比較。

由表2計算的數據可知，與TRUST比較，ELISA特異性、靈敏度、陽性預測值及陰性預測值更高（P<0.05）。

2.3兩組IgM、IgG與IgA對比

由表3計算的數據可知，相較于非梅毒螺旋體感染組，梅毒螺旋體感染組IgM、IgG、與IgA更高（P<0.05）。

3 討論

梅毒是一種由梅毒螺旋體感染引起的疾病，主要通過性傳播、血液傳播、母嬰和其他密切接觸傳播[5]。梅毒螺旋體是梅毒的致病因素，梅毒是一種性傳播疾病（STD），其特征是血管周圍炎癥細胞浸潤、血管滲漏、內皮細胞（EC）腫脹和增殖[6]。血管和淋巴管內壁的內皮是將體液與宿主組織分開的關鍵屏障，也是梅毒螺旋體的主要目標[7]。梅毒可對幾乎所有人體組織和器官造成損傷和衰竭，引起許多癥狀和體征[8]；另一方面，梅毒可潛伏多年而無臨床表現，只能在血清學檢測中檢測出來。無臨床表現的隱性梅毒具有易被自身和醫生忽視的隱性特點。潛伏性傳播梅毒和胎兒傳播先天性梅毒是近十年來梅毒發病率快速上升的重要原因。實驗室梅毒篩查對梅毒的診斷至關重要，作為產前健康檢查方案的一部分，實驗室梅毒檢查在預防先天性梅毒方面發揮著重要作用。

梅毒螺旋體非特異性抗體的常見實驗室檢測包括快速血漿反應素試驗（RPR）和甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）。這些測試非常敏感，適合觀察治療效果（抗體滴度可以反映疾病進展）和確定復發或再感染的存在。梅毒螺旋體特異性抗體的常見實驗室檢測包括梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）、梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗（TPELISA）和梅毒螺旋體化學發光試驗（TP-CLIA）。這些試驗直接使用梅毒螺旋體作為抗原來檢測特異性抗體的存在，具有很強的特異性，并用于確認實驗。研究顯示，（1）與TRUST比較，ELISA檢出陽性率更高（P<0.05）。（2）與TRUST比較，ELISA特異性、靈敏度、陽性預測值與陰性預測值更高（P<0.05）。（3）與非梅毒螺旋體感染組比較，梅毒螺旋體感染組IgM、IgG與IgA更高（P<0.05）。TRUST使用心磷脂作為抗原檢測梅毒抗體，揭示了這種方法導致假陽性的局限性。梅毒螺旋內部有脂類抗原，螺旋內或螺旋外各組之間有交叉反應，再加上使用肉眼觀察，漏診率高，特異性與靈敏度低，但TRUST方法簡單易用，快速，價格低，適合檢測大量樣品，它被用于初級篩查檢測，梅毒治療和監測其有效性。然而，TRUST在出現硬下疳4周后才被檢測到，這導致了較低的一期梅毒檢出率，適合于二期梅毒的診斷。也容易受到假陽性的影響，用肉眼觀察，產生主觀判斷，影響檢測結果。

ELISA通過抗原和抗體的特定免疫反應將待測物與酶結合，然后與底物產生顏色反應進行定量測量，測定的對象可能是抗原或抗體。ELISA的基礎是抗原或抗體的固化和抗原或抗體的酶標志。ELISA有更高的敏感度和特異性，可以同時進行多個抗體測試。這種方法比較簡單，經常用于大規模篩查。由于酶的高催化效率，間接放大了免疫反應的結果，導致測量方法靈敏度高。ELISA在抗原或抗體在細胞或亞細胞水平的定位指示，或在微克甚至納克水平的定量測量。ELISA的特異性是由于抗體或抗原的選擇性，抗原與抗體的結合主要發生在抗原的抗原決定因子與抗體的抗原結合因子之間，由于它們互補的化學結構和空間構型抗原與抗體之間的反應具有高特異性。然而，ELISA的陽性結果無法區分先前的感染和現在的感染，因此診斷梅毒螺旋仍然需要結合臨床多種方法。對梅毒的血清檢查很重要，但并不是診斷梅毒的唯一基礎，梅毒的診斷，除了分析檢測結果，更重要的基礎是詳細了解患者的生活史和病史以及詳細的醫療檢查。在全面分析后，應作出明智的決定，以避免因梅毒檢測結果呈假陽性而導致的誤診。

綜上所述，在臨床診斷時，對梅毒螺旋體感染實施ELISA的陽性率高，有較高的靈敏度和特異性，具有臨床應用價值。

參考文獻

[1] 艾尼瓦爾·吾拉木，帕麗扎提·阿不都熱依木，劉曉萱，等.腦脊液梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗對艾滋病陰性神經梅毒的臨床診斷價值[J].中國臨床醫生雜志，2022，50（1）：86-88.

[2] 蔡成，王青，魏薇.酶聯免疫吸附法檢測與快速血漿反應素試驗在梅毒檢驗中的價值分析[J].貴州醫藥，2023，47（9）：1460-1461.

[3] 刁玉增，安仲武，李海英，等.梅毒螺旋體感染者血清Tim-3水平與機體免疫功能相關性分析[J].蚌埠醫學院學報，2021，46（3）：356-359.

[4] 李宇，婁金麗，馮霞，等.血清及腦脊液TP-ELISA、TPPA、RPR檢測在神經梅毒的診斷價值及相關性[J].北京醫學，2015，37（12）：1149-1151.

[5] 周艷飛，劉佳強，彭俊，等.梅毒螺旋體Tp097經MAPKs、NF-κB和組蛋白乙酰化途徑誘導巨噬細胞分泌IL-8及GM-CSF[J].中國免疫學雜志，2022，38（22）：2695-2699.

[6] 劉學政.酶聯免疫吸附試驗與膠體金法檢測梅毒螺旋體抗體的結果比較[J].檢驗醫學與臨床，2022，19（23）：3283-3285.

[7] 徐思琪，郭建偉，張姣麗，等.Western blot在梅毒螺旋體特異性抗體檢測結果可疑樣本復核中的應用價值[J].江蘇醫藥，2021，47（12）：1231-1234.

[8] 蒲癸宏，李美析，龔睿，等.尿素解離法糾正化學發光法檢測梅毒螺旋體抗體假陽性結果的效能評價[J].中華實用診斷與治療雜志，2022，36（7）：736-739.