基于網絡藥理學和SPR檢測探討生脈散治療2型糖尿病合并冠心病的作用機制

摘要：目的 探討生脈散治療2型糖尿病（T2DM）合并冠心病（CHD）的作用機制。方法 應用TCMSP、BATMAN-TCM和Uniprot數據庫檢索生脈散藥效成分及對應靶點，應用Genecards、Drugbank和TTD數據庫檢索T2DM和CHD靶點基因，運用Venny2.1.0工具得到疾病交集靶點，采用Cytoscape3.9.1軟件，建立藥效物質-成分-靶點的網絡圖譜，通過STRING構建PPI網絡，并獲取排名前10的關鍵靶點基因，通過R語言ClusterProfiler包進行GO功能和KEGG通路分析，使用Discovery Studio軟件完成分子對接，最后完成SPR檢測實驗驗證。結果 獲得生脈散207個藥效成分，對應1643個相關作用靶點;T2DM疾病靶點2663個，CHD疾病靶點1206個，疾病-藥物交集靶點337個;最終獲得3個關鍵靶點：AKT1、CTNNB1、ESR1;GO和KEGG分析發現涉及的生物學通路主要有MAPK、AGE-RAGE、TNF等信號通路;將上述得到的結果進行分子對接，并選取AKT1蛋白和相關有效成分完成表面等離子共振SPR結合檢測，結果顯示均有較好活性。結論 生脈散可能從多成分、多靶點和多途徑調控糖脂代謝、改善氧化應激等方面來發揮治療T2DM合并CHD的作用。

關鍵詞：2型糖尿病;冠心病;生脈散;網絡藥理學;SPR檢測

中圖分類號：R259 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.20.001

文章編號：1006-1959（2024）20-0001-10

Mechanism of Shengmaisan in Treating Type 2 Diabetes Mellitus with Coronary Heart Disease

Based on Network Pharmacology and SPR Assay

CHEN Moliang1，WANG Xiaozhen2，XU Guanghui1，2，LI Zhijin1

（1.Xiamen Health and Medical Big Data Center/Xiamen Medicine Research Institute/Xiamen Key Laboratory of Natural Medicine Research and Development，Xiamen 361008，Fujian，China;

2.College of Pharmacy，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，Fujian，China）

Abstract：Objective To explore the mechanism of Shengmaisan on the treatment of type 2 diabetes mellitus （T2DM） with coronary heart disease （CHD）.Methods The TCMSP， BATMAN-TCM and Uniprot databases were used to retrieve the active components and corresponding targets of Shengmaisan. The Genecards， Drugbank and TTD databases were used to retrieve the target genes of T2 DM and CHD. The Venny2.1.0 tool was used to obtain the disease intersection targets. Cytoscape 3.9.1 software was used to establish a network map of active substances-components-targets. The PPI network was constructed by STRING， and the top 10 key target genes were obtained. GO function and KEGG pathway analysis were performed through the R voice ClusterProfiler package， and molecular docking was completed using Discovery Studio software. Finally， the SPR assay experiment was completed.Results There were 207 effective components in Shengmai Powder， corresponding to 1643 related targets. There were 2663 T2DM disease targets， 1206 CHD disease targets， and 337 disease-drug intersection targets. Finally， three key targets were obtained： AKT1， CTNNB1， ESR1; GO and KEGG analysis found that the biological pathways involved mainly include MAPK， AGE-RAGE， TNF and other signaling pathways; the above results were subjected to molecular docking， and AKT1 protein and related active ingredients were selected to complete the surface plasmon resonance SPR binding detection， and the binding results showed that all of them had good activity.Conclusion Shengmaisan may play a role in the treatment of T2DM complicated with CHD from the aspects of multi-component， multi-target and multi-channel regulation of glucose and lipid metabolism， improvement of oxidative stress， etc.

Key words：Type 2 diabetes mellitus;Coronary heart disease;Shengmaisan;Network pharmacology;SPR assay

糖尿病（diabetes mellitus， DM）已經成為繼腫瘤之后對人類生命健康造成嚴重威脅的慢性非傳染病，預計到2040年，全球將約有6.4億糖尿病患者，而在我國目前糖尿病發病率高達12%，給患者和家庭帶來巨大的醫療負擔[1-3]。DM主要是由胰島素抵擋或胰島素分泌不足引起的，而2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus， T2DM）是糖尿病的主要類型，占糖尿病患者的90%～95%，是目前全球流行的疾病之一，發病率越來越高[4]。且T2DM作為心臟、血管、眼睛、腎臟和神經系統等疾病的危險因素，不可避免地增加死亡風險和社會醫療負擔。研究表明[5， 6]，T2DM患者發生心血管疾病（cardiovascular disease， CVD）的風險是非T2DM患者的2～6倍，這表明了T2DM與心血管疾病之間存在強關聯。心血管疾病主要包括冠心病（coronary heart disease， CHD）、腦卒中、心力衰竭等，CHD是指心臟冠狀動脈血管變得狹窄或阻塞，即出現了動脈粥樣硬化病變，導致心肌缺血，從而引起心絞痛、心肌梗死等癥狀的一種心血管疾病，是我國居民死亡的主要病因之一[7]。DM患者的血糖水平與CHD密切相關，長期患DM的患者會對包括心臟在內的多個器官和系統造成傷害，引發大血管和微血管并發癥[8-11]。目前，兩種疾病均無完全根治之法，僅能控制病情。研究表明[12， 13]，患有T2DM的患者合并CHD的風險是非患有T2DM的患者的2～4倍，因此T2DM的死亡率大幅增加。現代臨床西醫主要使GiuPsLxhYKyU3/oAq31Wnw==用降血糖藥物、降壓藥、改善血脂和動脈介入等手段來治療T2DM合并CHD[14]，但這些方法普遍存在藥物依賴性強、副作用等問題，導致臨床療效不佳。近年來，中醫藥在治療T2DM、CHD等方面取得了重大進展，在這類疾病上以其整體觀、辨證論治、中藥多靶點的作用，體現其獨特的治療優勢，可達到標本兼治的效果，顯示出良好的前景。生脈散是由人參、麥冬、五味子三味中藥組成的傳統中醫方劑。現代臨床研究表明[15-17]，生脈散具有多種功能，包括擴張冠脈和增強心肌收縮力、提高心肌耐氧量等能力，可以用于治療CHD、心絞痛等心血管疾病。此外，生脈散還具有降血糖、調脂、改善血管微循環等作用，在DM、高血脂等疾病的治療中也有較好的效果[18， 19]，其臨床應用價值廣泛。但由于中藥復方各藥物之間的復雜性和多樣性，中藥及復方治療疾病的具體作用機制尚不明確。近年來，由于疾病、藥物有關的數據不斷增多，以及計算機技術、分析軟件的不斷改進，使得網絡藥理學在中醫藥研究領域的應用日益廣泛，并逐漸成為中醫藥研究熱點[20， 21]。利用網絡藥理學技術對生脈散治療疾病的具體作用機制進行的研究已經越來越多，其在T2DM、CHD等領域也已取得了一定成果[22-25]，但目前生脈散同時治療T2DM和CHD兩種緊密關聯的疾病研究較少[26， 27]。本研究基于網絡藥理學和SPR實驗檢測，探索生脈散治療T2DM合并CHD的作用機制，以期為其在臨床上的運用提供理論依據，提高其在臨床上的應用價值，現報道如下。

1材料與方法

1.1網絡藥理學方法

1.1.1篩選生脈散有效成分及靶點預測 在TCMSP數據庫（https：//old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）和BATMAN-TCM數據庫（http：//bionet.ncpsb.org.cn/batman-tcm/）篩選生脈散活性成分，其中TCMSP數據庫設置篩選參數口服利用度（oral bioavailability， OB）≥30%和生物利用度（drug-likeness， DL）≥0.18。BATMAN-TCM數據庫設置篩選參數未Score cutoff≥20及P-value cutoff<0.05。將兩個數據庫所得到的生脈散活性成分以及相關蛋白靶點合并去重。使用Uniprot數據庫將蛋白靶點名稱標準化。

1.1.2糖尿病和冠心病疾病靶點預測 根據T2DM和CHD兩類疾病，利用關鍵詞“type 2 diabetes mellitus”和“coronary heart disease”在Genecards（https：//www.genecards.org/ds）、Drugbank（https：//go.Drugbank.com/）和TTD（http：//db.idrblab.net/ttd/）數據庫中檢索，將結果合并去重獲得T2DM和CHD疾病相關靶點。其中，在Genecards數據庫中設置相關性得分≥20進行篩選。利用Venny2.1.0在線繪圖工具，將已獲得的生脈散藥物靶點與T2DM、CHD疾病靶點繪制韋恩圖，取交集獲得生脈散干預T2DM合并CHD的潛在靶點基因。

1.1.3構建藥物-成分-靶點網絡圖 使用Cytoscape 3.9.1軟件（http：//www.cytoscape.org），構建“藥物-活性成分-共有靶點基因”關系網絡。該網絡中包含藥物、成分和靶點節點，通過邊表示藥物-成分、成分-靶點之間的相互關系，并基于網節點絡度值進行篩選前10個的活性成分節點。度值表示網絡中節點連線的數量，節點度值越大，說明其參與作用越強。

1.1.4構建蛋白質互作PPI網絡 將篩選的生脈散與T2DM合并CHD的共有靶點基因導入STRING數據庫（https：//www.string-db.org/），選擇“Multiple Proteins”，且物種選定為“Homo sapiens”，設置置信度分數（highest confidence）大于0.9，并去除游離節點，其余參數均為默認值，構建蛋白質相互作用PPI網絡圖，并以此PPI網絡為基礎，根據網絡中節點度值獲得排名前10的關鍵靶點基因;另外，利用Cytoscape 3.9.1軟件插件cytohubba，根據最大集團中心度（maximal clique centrality，MCC）值篩選出前10的靶點基因節點，兩者取交集后得到潛在治療T2DM合并CHD的關鍵靶點基因。

1.1.5 GO富集分析和KEGG通路富集 利用R語言中ClusterProfiler包對生脈散與T2DM合并CHD的共有核心靶點基因進行GO和KEGG富集分析，設定P值<0.05。GO分析主要包括生物過程（biological process， BP）、細胞成分（cellular component， CC）和分子功能（molecular function， MF），以此來分析靶點主要是通過何種信號通路和生物功能調控T2DM和CHD。

1.1.6分子對接 根據上述分析結果，篩選得到核心成分及靶點基因，將藥效成分作為配體，核心靶點作為對接位點完成分子對接。分子對接主要分為3個步驟：①準備靶點蛋白結構：利用蛋白質PDB結構數據庫（https：//www.rcsb.org/）下載核心靶點蛋白PDB文件，再運用Discovery Studio軟件將蛋白去除結晶水、加氫，并對蛋白進行幾何結構優化。②準備小分子化合物：小分子化合物的二維結構從TCMSP數據庫、PubChem數據庫中獲得，TCMSP數據庫可直接獲得化合物的mol2文件，但由于部分化合物TCMSP數據庫中沒有收錄，需從PubChem數據庫中獲得化合物的sdf文件，再通過OpenBabel軟件轉換成mol2文件，最后再利用Discovery Studio軟件對核心化合物成分進行加氫、能量最低化等優化處理。③分子對接：采用Discovery Studio軟件中的Dock Ligands（LibDock）進行分子對接，以驗證上述流程得到的結論。

1.2 SPR親和力檢測實驗步驟和方法

1.2.1材料和儀器 樣品：通過分子對接結果，選擇結合效果較好的蛋白和小分子化合物進行SPR親和力檢測實驗。材料儀器：CM5芯片（廠家：Cytiva，貨號：BR100530，批號：10329008），氨基偶聯試劑盒（廠家：Cytiva，貨號：BR100050，批號：31206），10 mmol/L醋酸鈉緩沖液（pH4.0）（廠家：Cytiva，貨號：BR100349，批號：31483），自制的PBS+（10×）pH7.4，DMSO（廠家：Sigma，貨號：D4540-1L，批號：BCCG1271）。

1.2.2 實驗方法 ①試劑準備：配制PBS（10×）緩沖液母液（20 mmol/L KH2PO4，1.37 mol/L NaCl，100 mmol/L Na2HPO4，27 mmol/L KCl，pH7.4），用超純水將PBS母液稀釋10倍，pH調節至7.4，作為運行緩沖液（2 mmol/L KH2PO4，137 mmol/L NaCl，10 mmol/L Na2HPO4，2.7 mmol/L KCl，pH7.4），0.22 μmol/L濾膜過濾后使用。氨基偶聯試劑盒，包含：115 mg N-羥基丁二酰亞胺（NHS），750 mg 1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和10.5 ml 1 mol/L乙醇胺（pH 8.5）。將每管EDC和NHS分別加入10 ml去離子水，分裝保存到-18 ℃至更低溫度，并在2個月內用完。②芯片準備：將配體蛋白以10 mmol/L醋酸鈉（pH 4.0） 稀釋至11.7 μg/ml。首先，在10 μl/min的流速下，用400 mmol/L EDC和100 mmol/L NHS激活CM5芯片表面480 s。接下來，以10 μl/min的流速在實驗通道（Fc）中多次加入11.7 μg/ml的配體蛋白，固定量約1000 RU。最后，使用1 mol/L乙醇胺將芯片進行封閉，封閉時間為480 s，流速為10 μl/min。參比通道（Fc1）與實驗通道（Fc2）進行相同的操作。③親和力測定：?配制5% DMSO-PBS作為運行緩沖液2 （2 mmol/L KH2PO4，137 mmol/L NaCl，10 mmol/L Na2HPO4，2.7 mmol/L KCl，5% DMSO，pH 7.4）;?配制不同DMSO濃度的溶劑校準品，見表1;?先用DMSO將分析物溶解成10 mmol/L母液，再使用PBS（10×）及超純水將分析物配制成500 μmol/L，緩沖液組分與運行緩沖液2保持一致（2 mmol/L KH2PO4，137 mmol/L NaCl，10 mmol/L Na2HPO4，2.7 mmol/L KCl，5% DMSO，pH7.4），將稀釋后的分析物，在60 s內，以30 μl/min的流速分別注入實驗通道（Fc2）與參比通道（Fc1），并在60 s內進行解離，結合解離步驟均在運行緩沖液2中進行。

2結果

2.1生脈散潛在活性成分和靶點篩選 兩個數據庫有效成分并集后去重，其中人參122個、五味子76個、麥冬18個，最終三味藥材合并去重，得到生脈散的有效成分共207個，有效成分對應的靶點基因1643個，見表2。

2.2疾病靶點篩選 通過Genecards、Drugbank和TTD三個數據庫中篩選到的結果合并再刪除重復靶點，得到T2DM相關靶點2663個，CHD相關靶點1206個，見表3。將生脈散有效成分的1643個作用靶點與T2DM、CHD相關靶點取交集繪制韋恩圖，得到共有交集靶點基因337個，可認為是生脈散治療T2DM合并CHD的潛在靶標基因集，見圖1。

2.3構建藥物-成分-靶點網絡圖 將所獲得的生脈散有效成分、對應疾病靶點基因導入Cytoscape3.9.1軟件中，得到“藥物-活性成分-作用靶點”網絡，網絡共有546個節點（3個藥物節點、106個成分節點和337個交集基因節點）和2464條邊，其中節點平均度值為9.02。通過篩選網絡中節點度值大于平均度值的節點，最終繪制“藥物-活性成分-作用靶點”網絡圖，見圖2。根據網絡中節點度值，篩選排名前10的生脈散有效成分，分別是維生素B1（Vitamin B1）、長葉烯（Longifolene）、月桂烯（Myrcene）、牛磺酸素（Tauremisin）、五味子酚[（+）-Gomisin K3]、去氧哈林通堿（Deoxyharringtonine）、麥芽糖（Maltose）、山奈酚（Kaempferol）、20（R）-人參皂苷Rg3[20（R）-Ginsenoside Rg3]、戈米辛L2[（-）-Gomisin L2]，見表4。

2.4構建PPI網絡 將生脈散與T2DM合并CHD的337個共同靶點基因導入STRING數據庫，進行蛋白質相互作用PPI的網絡分析，可視化結果見圖3。根據PPI網絡中節點度值，篩選排名前10的關鍵靶點，另外使用Cytoscape3.9.1軟件中cytoHubba插件的MCC算法獲取前10的關鍵靶點，見表5;兩種算法結果取交集后得到3個關鍵靶點，即AKT1、CTNNB1、ESR1，這些靶點基因可能是和生脈散治療T2DM合并CHD的關鍵靶點。

2.5 GO富集分析與KEGG通路富集分析 通過R語言中clusterProfiler包，對337個共同靶點基因進行信號通路富集分析。GO富集分析結果根據P值排序，分別篩選出BP、CC和MF中富集顯著的前10個生物學功能，其中BP包括對外界刺激的反應、創傷修復、氧氣水平調節、細菌源分子的反應、肌肉系統過程、脂多糖作用、上皮細胞增殖、氧含量降低的反應和血液循環的調節等;CC包括膜微區、膜筏、神經元細胞體、囊腔、細胞質囊泡腔、內質網膜、質膜筏、陽離子通道配合物、小窩胞膜以及肌纖維膜等;MF包括受體激活活性、受體配體活性、DNA結合轉錄因子結合、細胞因子受體結合、細胞因子活性、四吡咯結合、生長因子活性、跨膜轉運蛋白結合、血紅素結合、類固醇結合等，見圖4。KEGG通路富集得到191條結果，根據P值和基因數量選取前20的通路進行分析，發現生脈散治療T2DM合并CHD的途徑包括多種顯著富集的信號通路，如糖尿病并發癥中的AGE-RAGE、MAPK、TNF、IL-17、HIF-1信號通路和脂質與動脈粥樣硬化、流體剪切應力與動脈粥樣硬化等，表明生脈散治療T2DM合并CHD可能涉及代謝、凋亡等多方面信號通路的影響，見圖5。

2.6分子對接分析 利用Discovery Studio軟件進行蛋白質和小分子化合物的計算機模擬對接，對接結果得到絕對自由能、相對自由能、對接姿式數和LibDockScore綜合分數。將從藥物-成分-靶點網絡圖中篩選出的度值排名前10的化學成分與3個關鍵靶點進行分子對接，結果顯示20（R）-Ginsenoside Rg3、Deoxyharringtonine、Kaempferol、Maltose與AKT1、CTNNB1、ESR1均有較好活性，見表6。生脈散中的4種活性化合物[20（R）-Ginsenoside Rg3、Deoxyharringtonine、Kaempferol、Maltose]與T2DM合并CHD的3個核心靶點（AKT1、CTNNB1、ESR1）通過靜電作用、氫鍵、范德華力、π-π相互作用等分子間作用力很好地結合，形成穩定的結構，具體結果見圖6。基于分子對接結果推測該研究可能通過作用于上述幾種關鍵靶點發揮治療T2DM合并CHD的作用，同時闡明了生脈散調控T2DM合并CHD具有“多成分、多靶點、多通路”的機制特點。

2.7 SPR親和力檢測

2.7.1實驗樣品選擇 基于分子對接結果，選取AKT1蛋白進行SPR實驗驗證，由于小分子化合物Deoxyharringtonine有毒性，目前無市售，因此選擇購買Maltose、（20R）-Ginsenoside Rg3、Kaempferol這三種小分子化合物。蛋白：AKT1（廠家：義翹神州，目錄編號：10763-H08B）;小分子化合物：Maltose （廠家：上海源葉，貨號：B20834-20mg）、（20R）-Ginsenoside Rg3 （廠家：MCE，貨號：HY-N1376）、Kaempferol（廠家：上海源葉，貨號：B21126-20mg）。

2.7.2實驗結果 ①AKT1蛋白偶聯結果：配體偶聯量約為12 000 RU。②化合物單濃度篩選結果：使用分析軟件Biacore T200 Evaluation Software對不同分析物結合信號進行標準化處理，檢測得到3種化合物的結合散點圖，篩選得到結合值大于cutoff的化合物有2個，即Kaempferol和（20R）-Ginsenoside Rg3，見圖7;通過分析物與配體結合傳感圖，發現以上2個小分子化合物解離速度都較快，見圖8。從傳感圖可知，Kaempferol與AKT1蛋白結合要高于（20R）-Ginsenoside Rg3與AKT1結合，與AKT1有明顯結合信號。

3討論

中醫療法注重揚長避短，毒副作用小，辨證論治與整體觀念獨具特色，使得中醫藥在治療T2DM合并CHD上發揮了強大的作用。但中藥復方各藥物之間的藥效機制較復雜，難證實中藥復方中的活性成分通過多途徑、多環節、多靶點來治療疾病[2]。因此，本研究運用網絡藥理學對生脈散干預T2DM合并CHD的藥效物質基礎及可能作用的靶點和通路進行了深入研究，并對其可能作用機制進行初步探討，發現生脈散中的多個藥效物質不僅可以對一個靶點發揮作用，也可對多個靶點發揮作用，表現其多途徑的協同增效作用。

本研究篩選了生脈散106個復方成分，藥物疾病共同作用靶點337個，通過分析得到可能起治療作用的核心化合物有維生素B1（Vitamin B1）、長葉烯（Longifolene）、月桂烯（Myrcene）、牛磺酸素（Tauremisin）、五味子酚[（+）-Gomisin K3]、去氧哈林通堿（Deoxyharringtonine）、麥芽糖（Maltose）、山奈酚（Kaempferol）、20（R）-人參皂苷Rg3[20（R）-Ginsenoside Rg3]、戈米辛L2[（-）-Gomisin L2]，通過作用于RAC-ɑ絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（AKT1）、兒茶素β-1（CTNNB1）、雌激素受體（ESR1）等關鍵靶點，根據調控MAPK信號通路、糖尿病并發癥中的AGE-RAGE信號通路、TNF信號通路、IL-17信號通路、HIF-1信號通路、脂質與動脈粥樣硬化等多個途徑，來調節血糖血脂水平，改善氧化應激等，從而對T2DM合并CHD進行干預。網絡藥理學與我國中醫藥學中的系統整體觀和辨證論治理念不謀而合，將其運用到中醫藥研究可為疾病的控制和用藥提供更多選擇和可能性，也為中藥復方新藥的研發及醫學現代化發展提供技術支持[23]。

基于網絡藥理學的分析結果，本研究采用了分子對接技術，選取生脈散中的4種活性化合物[20（R）-Ginsenoside Rg3、Deoxyharringtonine、Kaempferol、Maltose]與T2DM合并CHD的3個核心靶點（AKT1、CTNNB1、ESR1）完成分子對接，根據絕對自由能、相對自由能、對接姿式數和LibDockScore綜合分數這幾個參數來評估成分與蛋白質靶標的親和程度，結果均顯示對接成功。基于分子對接的結果，本研究另通過SPR親和力檢測實驗，使用Biacore T200檢測AKT1蛋白與分析物Maltose、（20R）-Ginsenoside Rg3、Kaempferol的結合情況，根據分析物與配體結合信號散點圖所示，在運行緩沖液2稀釋分析物時，Maltose和（20R）-Ginsenoside Rg3在200 μmol/L時可溶，Maltose與AKT1無明顯結合信號，（20R）-Ginsenoside Rg3與AKT1結合信號較弱;Kaempferol在25 μmol/L時可溶，與AKT1有明顯結合信號。分析物與配體結合傳感圖得知，Kaempferol和（20R）-Ginsenoside Rg3的解離速度都較快，通過比較響應值可知，Kaempferol與AKT1蛋白結合要高于（20R）-Ginsenoside Rg3與AKT1結合。

綜上所述，本研究初步探討了生脈散治療T2DM合并CHD的作用機制，為闡述中藥方劑生脈散治療T2DM合并CHD的作用機制提供了重要數據，即通過生脈散中的多種活性成分介導T2DM及CHD相關的多靶點、多通路來發揮作用，實現“靶標-受體-配體-復合物-靶標-受體”的相互作用和作用機制的可視化，對網絡藥理學方法得出結果的精確性進行驗證，從而揭示生脈散治療T2DM合并CHD的藥效基礎，為后續的細胞及動物實驗研究提供思路和參考依據，為臨床提供理論依據。

參考文獻：

[1]楊靜，任星，付國靜，等.中醫藥治療糖尿病足的臨床研究證據圖分析[J].中國中藥雜志，2022，47（14）：3943-3949.

[2]胡遠樟，肖麗，余澤蕓，等.基于數據挖掘的“真實世界”中醫糖尿病癥藥關系研究[J].成都中醫藥大學學報，2020，43（1）：62-65.

[3]張美珍，郝曉暉，卜祥偉，等.調樞法在糖尿病中的應用[J].中國中醫基礎醫學雜志，2023，29（5）：833-835.

[4]DeForest N，Majithia AR.Genetics of Type 2 Diabetes：Implications from Large-Scale Studies[J].Curr Diab Rep，2022，22（5）：227-235.

[5]Shu L，Chan KHK，Zhang G，et al.Shared genetic regulatory networks for cardiovascular disease and type 2 diabetes in multiple populations of diverse ethnicities in the United States[J].PLoS Genet，2017，13（9）：e1007040.

[6]Berbudi A，Rahmadika N，Tjahjadi AI，et al.Type 2 Diabetes and its Impact on the Immune System[J].Curr Diabetes Rev，2020，16（5）：442-449.

[7]國家心血管中心.中國心血管健康與疾病報告2019[M].北京：科學出版社，2020.

[8]熊偉，孫麗妹，宋珊珊.冠心病合并糖尿病患者腸道菌群特點及與冠脈粥樣硬化的相關性[J].臨床和實驗醫學雜志，2023，22（1）：98-102.

[9]Chawla A，Chawla R，Jaggi S.Microvasular and macrovascular complications in diabetes mellitus： Distinct or continuum？[J].Indian J Endocrinol Metab，2016，20（4）：546-551.

[10]闞春婷，曹長春.糖尿病、冠心病患者Metrnl水平與糖脂代謝指標和部分炎性標志物水平的關系[J].國際檢驗醫學雜志，2021，42（17）：2113-2117.

[11]丁林，呂肖鋒，武晉曉，等.2型糖尿病合并冠心病患者血糖波動與冠狀動脈病變的相關性研究[J].重慶醫學，2015，44（17）：2344-2346，2350.

[12]付永波，朱冬梅，胡紹波，等.冠脈CTA與血管超聲評估T2DM合并CHD患者頸動脈與冠脈粥樣硬化的關系[J].中國CT和MRI雜志，2020，18（1）：48-50，68.

[13]于凱，王媛.冠心病合并糖尿病患者冠狀動脈造影特點及冠狀動脈支架置入術治療的臨床療效觀察[J].貴州醫藥，2020，44（5）：708-709.

[14]薛強，苑媛，孫靜，等.中西醫結合治療對T2DM合并CHD患者血糖、血脂及血管內皮功能的影響[J].現代生物醫學進展，2017，17（32）：6299-6303.

[15]李晶.復方生脈散治療冠心病PCI術后再發穩定型心絞痛（氣陰兩虛，心脈瘀阻證）的臨床觀察[D].昆明：云南中醫藥大學，2020.

[16]冉俊寧，陳朝陽，馮君，等.基于網絡藥理學探討生脈散治療快速性心律失常氣陰兩虛證作用機制[J].陜西中醫，2021，42（3）：383-388，397.

[17]李艷秋，崔文旺.玉泉丸合生脈散對氣陰兩虛證2型糖尿病臨床療效及心血管主要危險因素的影響[J].吉林中醫藥，2023，43（3）：304-307.

[18]陳稚，劉昆，劉薇，等.生脈散對糖尿病腎病大鼠腎臟保護作用機制的研究[J].廣東醫學院學報，2022，40（3）：259-262.

[19]沈亞云，盛蘭蘭.生脈散合丹參飲加減治療糖尿病性心肌病療效及對心肌纖維化程度的影響[J].新中醫，2022，54（5）：62-66.

[20]Hopkins AL.Network pharmacology[J].Nature Biotechnology，2007，25（10）：1110-1111.

[21]韋明君.基于網絡藥理學和分子對接方法研究真武湯治療糖尿病腎病的作用機制[D].廣州：華南理工大學，2020.

[22]呂佳譽，崔向寧，蘇文革.基于網絡藥理學探討生脈散治療心律失常作用機制[J].中醫學報，2021，36（1）：153-159.

[23]歐陽效強，饒煉，雷敏，等.基于網絡藥理學探討生脈散治療動脈粥樣硬化的作用機制[J].中成藥，2021，43（1）：241-246.

[24]郝秀華，張莉，趙麗穎，等.基于網絡藥理學和分子對接技術探討生脈散治療糖尿病的作用機制[J].特產研究，2023，45（6）：70-79.

[25]黃聰，孫明杰，崔海峰，等.基于網絡藥理學探討生脈散降低鈣泄漏保護糖尿病大鼠心肌收縮功能的機制研究[J].藥學學報，2022，57（10）：3115-3123.

[26]趙燁敏.生脈散湯劑治療2型糖尿病氣陰兩虛證合并冠心病心絞痛患者的效果及安全性觀察[J].貴州醫藥，2021，45（3）：410-411.

[27]湯曉.生脈散治療糖尿病合并冠心病心絞痛臨床觀察[J].光明中醫，2022，37（3）：373-374.

編輯/杜帆

基金項目：廈門市醫療衛生指導性項目（編號：3502Z20214ZD1304）

作者簡介：陳沫良（1988.8-），男，湖南武岡人，博士，助理研究員，主要從事計算生物、中醫藥數據挖掘研究