乙磺酸尼達(dá)尼布霧化吸入制劑的制備及評(píng)價(jià)

［摘要］目的：研究乙磺酸尼達(dá)尼布（nintedanib ethanesulfonate，NE）霧化吸入制劑的處方工藝，并對其進(jìn)行體內(nèi)外評(píng)價(jià)。方法：通過篩選抗氧劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH等確定其最優(yōu)處方；測定NE霧化吸入制劑的霧化動(dòng)態(tài)粒徑；通過液相色譜測定NE霧化吸入制劑的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)；以肺功能、羥脯氨酸（hydroxyproline，HYP）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）等為指標(biāo)評(píng)價(jià)體內(nèi)治療效果。結(jié)果：確定NE吸入溶液的最終處方為NE 10 mg，亞硫酸氫鈉4 mg，丙二醇50 mg，水2 mL，鹽酸調(diào)pH至4.0；NE霧化吸入制劑的平均粒徑約為3.3 μm；SD大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果顯示，NE吸入溶液的體內(nèi)消除半衰期為5.27 h，生物利用度顯著提高，達(dá)到63.71%；吸入制劑后肺纖維化模型小鼠肺功能各項(xiàng)參數(shù)（氣管收縮參數(shù)、50%潮氣量呼氣流量和呼吸速率等）及肺干/濕重比、HYP、TNF-α等指標(biāo)均有顯著改善。結(jié)論：NE霧化吸入制劑可有效改善肺功能參數(shù)，提高其生物利用度。

［關(guān)鍵詞］乙磺酸尼達(dá)尼布；吸入制劑；霧化吸入；藥動(dòng)學(xué)；特發(fā)性肺纖維化

［中圖分類號(hào)］R944［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A［文章編號(hào)］1671-7783（2024）06-0536-06

DOI： 10.13312/j.issn.1671-7783.y240053

［引用格式］李其德，米翠蘭，徐樂圓，等. 乙磺酸尼達(dá)尼布霧化吸入制劑的制備及評(píng)價(jià)［J］. 江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2024，34（6）： 536-541.

［基金項(xiàng)目］國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（82272662）

［作者簡介］李其德（1980—），男，碩士研究生；沈松（通訊作者），教授，博士生導(dǎo)師，E-mail： shensong@ujs.edu.cn

Preparation and evaluation of nebulized inhalation preparation of nitanib ethanesulfonate

LI Qide¹， MI Cuilan²， XU Leyuan¹， ZHU Shun¹， ZHOU Zaijun¹， SHEN Song¹

（1. School of Pharmacy， Jiangsu University， Zhenjiang Jiangsu 212013; 2. Bishuilantian Community Health Service Center of Yinchuan Hospital of Traditional Chinese Medicine， Yinchuan Ningxia 750010， China）

［Abstract］Objective：To study the optimized formulation of nidanib ethanesulfonate （NE） solution for inhalation and evaluate the formulation in vitro and in vivo. Methods：The prescription of NE solution was studied by optimizing the amount of the antioxidants， osmotic pressure regulators and pH value. The dynamic particle size of NE nebulized inhalation formulations was measured. The in vivo pharmacokinetics of NE nebulized inhalation formulations was determined by high performance liquid chromatography. Lung function， hydroxyproline （HYP）， tumor necrosis factor-α（TNF-α）， transforming growth factor-β1 （TGF-β1） were used as indicators to evaluate the therapeutic effect in vivo. Results：Optimized prescription was obtained： NE： 10 mg， sodium bisulfite： 4 mg， propylene glycol： 50 mg， water： 2 mL. The pH of the solution was adjusted to 4.0. The average particle size of NE nebulized inhalation was about 3.3 μm. The in vivo pharmacokinetic results in SD rats showed that the elimination half-life of NE inhalation preparation was 5.27 h. The bioavailability was significantly improved， reaching 63.71%. Pulmonary function parameters （tracheal contraction parameters， 50% tidal volume expiratory flow rate， respiratory rate） and lung dry/wet weight ratio， HYP， TNF-α in mice with pulmonary fibrosis model after inhalation administration had been significantly improved. Conclusion： NE inhalation can greatly improve lung function parameters and increase its bioavailability.

［Key words］nidanib ethanesulfonate; inhalation preparations; nebulized inhalation; pharmacokinetics; idiopathic pulmonary fibrosis

近年來，特發(fā)性肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）患病率呈現(xiàn)上升趨勢，已成為世界性的健康問題^［1-2］。IPF是一種病因未明的慢性進(jìn)展性纖維化型間質(zhì)性肺炎，缺乏有效的治療藥物。乙磺酸尼達(dá)尼布（nintedanib ethanesulfonate，NE）是一種小分子藥物，抑制多種受體酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinase，RTKs）和非-受體酪氨酸激酶（non-receptor tyrosine kinase，nRTKs）^［3-4］。NE可抑制以下幾種RTKs：血小板衍生生長因子受體（platelet-derived growth factor receptor，PDGFR）α和β，成纖維細(xì)胞生長因子受體（fibroblast growth factor receptor，F(xiàn)GFR）1-3，血管內(nèi)皮生長因子受體（vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR）1-3和Fms樣酪氨酸激酶3（Fms-like tyrosine kinase 3，F(xiàn)LT3），其中FGFR、PDGFR和VEGFR與IPF的發(fā)病機(jī)制相關(guān)^［5-8］。NE作為美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)上市的首個(gè)IPF靶向治療藥物，可以明顯延緩IPF疾病進(jìn)展，為患者的治療提供了可能。但由于NE軟膠囊絕對生物利用度僅4.7%，肝臟首過效應(yīng)和轉(zhuǎn)運(yùn)子效應(yīng)顯著，且肝臟胃腸道不良反應(yīng)大^［9-11］；同時(shí)考慮到IPF患者需要長期服藥，口服膠囊的諸多不良反應(yīng)限制了該藥品的適用范圍。

吸入液體制劑作為一種新型的給藥系統(tǒng)，通過霧化器產(chǎn)生連續(xù)供吸入用氣溶膠，其優(yōu)點(diǎn)是靶向給藥，可直接把藥物遞送至肺部，相對全身不良反應(yīng)比較少，且生物利用度高^［12-13］。此外，吸入液體制劑霧化時(shí)間短，患者耐受性好，順應(yīng)性高。所以該給藥系統(tǒng)在解決NE吸入溶液存在的問題上具有明顯優(yōu)勢。

本研究對NE霧化吸入溶液的處方工藝進(jìn)行研究，確定最優(yōu)的處方工藝。在體外對NE霧化吸入制劑的霧化粒徑等參數(shù)進(jìn)行研究；同時(shí)，以NE注射劑為參比，對霧化吸入制劑的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)及藥效學(xué)進(jìn)行研究，旨在為NE霧化吸入制劑的研究及開發(fā)提供相關(guān)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器

高效液相色譜儀（U3000，美國Thermo公司）；呼吸模擬機(jī)（BRS 100i，英國Copley Scientific公司）；實(shí)時(shí)高速噴霧粒度儀（Spraytec，英國Malvern公司）；霧化器（PARI LC Plus，德國Bari公司）；0.22 μm過濾器（美國Millipore公司）。

1.2 藥品和試劑

焦亞硫酸鈉（成都華邑藥用輔料制造有限公司）；甘油（湖南爾康制藥有限公司）；丙二醇（南京威爾化學(xué)有限公司）；博來霉素（碧云天生物技術(shù)有限公司）；NE、肺組織中羥脯氨酸（hydroxyproline，HYP）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）試劑盒（美國Sigma公司）；對硝基苯酚（≥99.0%）、乙腈、甲醇（國藥化學(xué)試劑有限公司）；其他試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠12只，體重（150±20）g，SPF級(jí)ICR小鼠24只，體重2～22 g，購自江蘇大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SYXK（蘇）2022-0081。大鼠自由進(jìn)食和飲水，保證12 h/12 h明暗交替的飼養(yǎng)環(huán)境，維持相對濕度為40%～70%。本研究依照江蘇大學(xué)動(dòng)物保護(hù)和使用委員會(huì)指南協(xié)議進(jìn)行。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 NE吸入溶液制備 采用除菌過濾的無菌工藝生產(chǎn)NE吸入溶液，生產(chǎn)過程包括膠塞清洗、滅菌、洗瓶、配制、除菌過濾、灌裝、軋蓋等。通過測定飽和溶解度、篩選pH、抗氧劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑，確定本品的最終處方為NE 10 mg，亞硫酸氫鈉4 mg，丙二醇50 mg，水2 mL，鹽酸調(diào)pH至4.0。

1.4.2 NE含量測定方法 采用Thermo U3000高效液相色譜儀進(jìn)行檢測，檢測器：VWD/DAD檢測器；色譜柱：Nucleodur C18 Gravity（4.0 mm×50 mm，5 μm）；流動(dòng)相A：磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二銨1.0 g，加超純水1 000 mL溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.4）；流動(dòng)相B：乙腈。線性梯度洗脫，流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣器溫度：5 ℃；檢測波長：235 nm。將樣品溶于溶劑（甲醇∶超純水=50∶50）后進(jìn)樣。

1.4.3 NE液體制劑霧化動(dòng)態(tài)粒徑測定 開啟真空泵，將流量計(jì)連接至L型連接管處，調(diào)節(jié)流量控制閥使通過系統(tǒng)的穩(wěn)定流量達(dá)到15 L/min。取下流量計(jì)，取供試品1支，移取2 mL藥液至未使用的霧化器中，將吸嘴連接至L型連接管（使用吸嘴適配器來保證連接的氣密性）。開啟Spraytec實(shí)時(shí)高速噴霧粒度儀，背景出發(fā)時(shí)間為10 s。開啟霧化裝置，進(jìn)行測定。

1.4.4 大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究 將12只SD大鼠隨機(jī)分成2組，每組6只，禁食過夜。分別通過靜脈注射和霧化吸入給藥，給藥劑量為2.5 mg/kg。分別于0.03、0.08、0.25、0.5、1、2、4、8、24 h取血，置于肝素鈉管中，5 000 r/min高速離心10 min，移取血漿于離心管中，-20 ℃冷凍保存?zhèn)溆茫R用前室溫融化。將80 μL血漿與80 μL內(nèi)標(biāo)對硝基苯酚乙腈溶液混合，然后渦旋混合30 s。混合后，將制劑在4 ℃以10 000×g離心5 min。將上清液通過0.22 μm過濾器，并將濾液注入HPLC系統(tǒng)，進(jìn)樣分析，記錄峰面積，并代入血漿樣品線性方程中，計(jì)算血漿樣品中NE吸入溶液在不同時(shí)間點(diǎn)的濃度。采用藥動(dòng)學(xué)軟件BAPP 2.0計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。

1.4.5 肺纖維化小鼠模型的建立及治療 按照Phillips等^［14］以及Zhao等^［15］的報(bào)道，吸入博來霉素溶液建立小鼠肺纖維化模型。24只小鼠平均分為對照組、模型組、靜脈注射組和吸入制劑組，每組6只，對照組給予生理鹽水（0.25 mL），其他組通過使用氣管內(nèi)氣霧劑給予博來霉素溶液（5 mg/mL，5 mg/kg）。造模后第2天開始給藥，每天給藥1次，模型組、靜脈注射組和吸入制劑組分別給予生理鹽水（0.25 mL）、NE注射液（2.5 mg/kg）和NE吸入溶液（2.5 mg/kg）。

1.4.6 肺功能檢測 于第21天采用非束縛小動(dòng)物肺功能測量儀（美國Buxco公司）檢測小鼠的吸氣、呼氣氣道阻力，呼吸頻率、潮氣量、每分鐘通氣量、50%潮氣量呼氣流量等數(shù)據(jù)。

1.4.7 肺干/濕重比 各組分別于給藥21 d隨機(jī)選取3只小鼠，安樂死后摘取左肺，無菌生理鹽水漂洗，吸除表面水分，稱濕重，然后在60 ℃干燥箱中干燥后稱重3次，直至重量不再改變?yōu)橹梗Q干重，按下式計(jì)算可得到干/濕重比：肺干/濕重比（%）=肺干重（g）/肺濕重（g）×100%。

1.4.8 肺組織中HYP分析 樣品經(jīng)酸水解產(chǎn)生游離的HYP，進(jìn)一步被對甲苯磺酰氯胺鈉氧化，氧化產(chǎn)物與對二甲氨基苯甲醛反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，在560 nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560 nm的光密度值，可計(jì)算HYP含量。各組分別于給藥14、21 d隨機(jī)選取3只小鼠，安樂死后摘取左肺，將約60 mg左肺置于2 mL的水解液中，使用勻漿器對肺組織進(jìn)行精細(xì)切碎和勻漿，然后置于110 ℃烘箱水解6 h。用提取液定容至2 mL，12 000 r/min離心20 min，取上清液于560 nm測定光密度，計(jì)算含量。

1.4.9 肺組織中TNF-α和TGF-β1的測定 肺纖維化小鼠在治療14、21 d后，分離獲取各組小鼠肺組織，取少量稱重后，按照1∶9加入預(yù)冷PBS（pH 7.4）。剪碎后，將肺組織樣本充分勻漿，3 000 r/min離心20 min，取上清液按照ELISA試劑盒說明書，測定TNF-α及TGF-β1含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布和方差齊性的數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組樣本間均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NE含量測定方法專屬性

NE的專屬性色譜圖如圖1所示，空白溶劑、空白輔料和各已知雜質(zhì)均不干擾主峰測定且主峰純度符合要求。

2.2 三種霧化器霧化動(dòng)態(tài)粒徑

采用Spraytec實(shí)時(shí)高速噴霧粒度儀測定不同霧化裝置PARI LC Plus、PARI LC Sprint及eFlow rapid的動(dòng)態(tài)霧化粒徑，PARI LC Sprint相對于其他兩種霧化器的DV（10）、DV（50）和DV（90）更小，DV（10）、DV（50）和DV（90）均值為2.22 μm、3.30 μm及5.49 μm。

2.3 大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究

NE在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)曲線見圖2。SD大鼠以2.5 mg/kg劑量單次靜注NE吸入溶液后，血漿AUC_0-t為291 ng·（h·mL）^-1，體內(nèi)消除半衰期為4.30 h；SD大鼠以2.5 mg/kg劑量單次肺部噴霧給予NE吸入溶液后，血漿AUC_0-t為186 ng·（h·mL）^-1，體內(nèi)消除半衰期為5.27 h，計(jì)算絕對生物利用度為63.71%（表1）。

2.4 體內(nèi)藥效學(xué)研究

2.4.1 小鼠體重在治療過程中的變化 各組小鼠分別在0、3、7、10、14、21 d稱重，觀察體重變化。對照組小鼠各方面正常，體重隨時(shí)間增加穩(wěn)定增長；模型組小鼠從第3天開始精神萎靡，食欲不振，體重隨時(shí)間增加明顯下降（圖3）；靜脈注射組和吸入制劑組小鼠第7天，相較對照組體重均明顯下降，吸入制劑組小鼠體重高于靜脈注射組；在21 d給藥結(jié)束后，靜脈注射組和吸入制劑組小鼠體重接近對照組。

2.4.2 吸入制劑對肺功能的影響 小鼠肺纖維化一般表現(xiàn)為呼吸頻率加快、潮氣量降低等，由圖4可見，與對照組相比，模型組的支氣管收縮參數(shù)、50%潮氣量呼氣流量和呼吸頻率均顯著升高（P均lt;0.01），潮氣量顯著降低（Plt;0.01），其中50%潮氣量呼氣流量和呼吸頻率模型組達(dá)到了對照組的2倍左右。與模型組相比，靜脈注射組和吸入制劑組均能明顯降低支氣管收縮參數(shù)、50%潮氣量呼氣流量和呼吸頻率（P均lt;0.05）。21 d后模型組的潮氣量降低到對照組的一半左右，靜脈注射組和吸入制劑組較模型組潮氣量明顯提高，表明肺纖維化小鼠在給藥后肺功能得到改善。

2.4.3 肺干/濕重比結(jié)果分析 肺干/濕重比是反映肺水腫的直接指標(biāo)，也是反映肺損傷嚴(yán)重程度的敏感指標(biāo)。建模后，大量液體滲出至肺泡和肺間質(zhì)，導(dǎo)致肺的重量增加，而肺的干重則不受影響。21 d后模型組肺干/濕重比較對照組明顯降低（Plt;0.01），說明模型組小鼠出現(xiàn)了肺水腫。吸入制劑組和靜脈注射組肺干/濕重比較模型組明顯上升（Plt;0.05），表明NE可有效抑制小鼠肺部水腫（圖5）。

2.4.4 肺組織中HYP、TNF-α、TGF-β1含量分析 小鼠肺組織HYP治療14、21 d的結(jié)果顯示（圖6A、6B），模型組14、21 d的HYP含量為1.1和1.3 μg/mg，與對照組（0.8 μg/mg）比較明顯增加（Plt;0.05）；與模型組相比，吸入制劑組治療14、21 d的HYP水平均明顯降低（Plt;0.05），而靜脈注射組治療21 d時(shí)HYP水平明顯降低（Plt;0.05）。

TNF-α測定結(jié)果見圖6C、6D，對照組14、21 d的TNF-α水平均為0.5 μg/L，模型組TNF-α在14、21 d持續(xù)升高（Plt;0.05）；與模型組相比，吸入制劑組治療21 d時(shí)TNF-α水平明顯降低（Plt;0.05）。

TGF-β1測定結(jié)果見圖6E、6F，模型組14、21 d TGF-β1水平較對照組明顯升高（Plt;0.01或Plt;0.05）。與模型組相比，吸入制劑組和靜脈注射組均能降低肺組織TGF-β1水平，且吸入制劑組的TGF-β1水平略低于靜脈注射組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。

3 討論

吸入制劑能夠直接到達(dá)患者的肺部，使藥物在肺部的局部濃度更高，從而提高療效、降低不良反應(yīng)，同時(shí)吸入制劑較口服制劑等起效快、生物利用度高。本文對NE吸入溶液處方工藝進(jìn)行研究，結(jié)果表明，NE霧化吸入制劑的平均粒徑約為3.3 μm；其體內(nèi)消除半衰期為5.27 h，平均滯留時(shí)間為2.58 h，較注射劑（1.3 h）顯著提高；其絕對生物利用度達(dá)到63.71%。目前，F(xiàn)DA批準(zhǔn)上市的NE劑型為膠囊制劑，說明書中提到該藥品的絕對生物利用度僅為4.70%，肝臟首過效應(yīng)和轉(zhuǎn)運(yùn)子效應(yīng)顯著，且胃腸道和肝臟不良反應(yīng)發(fā)生率較高，吸入制劑顯著提高了本品的生物利用度。

HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白在皮膚、肌腱、軟骨和血管中廣泛存在，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。NE吸入制劑組能夠顯著降低肺組織的膠原含量，且對肺纖維化的治療效果優(yōu)于靜脈注射組。TNF-α是一類重要的炎癥因子，能夠反映肺纖維化進(jìn)程中炎癥反應(yīng)程度，NE吸入制劑組經(jīng)過21 d治療的炎癥反應(yīng)明顯小于模型組，說明吸入制劑緩解了肺纖維化進(jìn)程中的肺損傷程度。TGF-β1是一種多效性的細(xì)胞因子，是目前肺纖維化的研究熱點(diǎn)和重要的藥物作用靶點(diǎn)，NE吸入制劑組對肺組織TGF-β1的效果與靜脈注射組相當(dāng)。以上藥效學(xué)結(jié)果顯示，NE吸入制劑可顯著改善肺功能各項(xiàng)參數(shù)（支氣管收縮參數(shù)、50%潮氣量呼氣流量和呼吸頻率等），肺干/濕重比以及HYP、TNF-α等指標(biāo)。

綜上所述，本研究制備了NE吸入溶液，通過優(yōu)化其處方及制備工藝，可顯著提高NE的生物利用度，改善其在肺部疾病的治療中給藥不便、不良反應(yīng)大等臨床問題。

［參考文獻(xiàn)］

［1］Moss BJ， Ryter SW， Rosas IO. Pathogenic mechanisms underlying idiopathic pulmonary fibrosis［J］. Annu Rev Pathol， 2022， 17： 515-546.

［2］吳佳敏， 張煒， 張興， 等. 不同來源的外泌體對特發(fā)性肺纖維化的免疫調(diào)節(jié)作用［J］. 新醫(yī)學(xué)， 2022， 53（5）： 336-339.

［3］Jamadar A， Suma SM， Mathew S， et al. The tyrosine-kinase inhibitor nintedanib ameliorates autosomal-dominant polycystic kidney disease［J］. Cell Death Dis， 2021， 12（10）： 947.

［4］Hashemian SM， Farhadi T， Varahram M， et al. Nintedanib： a review of the properties， function， and usefulness to minimize COVID-19-induced lung injury［J］. Expert Rev Anti Infect Ther， 2023， 21（1）： 7-14.

［5］Di Martino E， Provenzani A， Vitulo P， et al. Systematic review and meta-analysis of pirfenidone， nintedanib， and pamrevlumab for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis［J］. Ann Pharmacother， 2021， 55（6）： 723-731.

［6］Lancaster L， Goldin J， Trampisch M， et al. Effects of nintedanib on quantitative lung fibrosis score in idiopathic pulmonary fibrosis［J］. Open Respir Med J， 2020， 14： 22-31.

［7］Ghazipura M， Mammen MJ， Herman DD， et al. Nintedanib in progressive pulmonary fibrosis： a systematic review and meta-analysis［J］. Ann Am Thorac Soc， 2022， 19（6）： 1040-1049.

［8］Glaspole I， Bonella F， Bargagli E， et al. Efficacy and safety of nintedanib in patients with idiopathic pulmonary fibrosis who are elderly or have comorbidities［J］. Respir Res， 2021， 22（1）： 125.

［9］Wang J， Zhang S， Tan C， et al. Simultaneously inhibiting P-gp efflux and drug recrystallization enhanced the oral bioavailability of nintedanib［J］. Curr Pharm Biotechnol， 2023， 24（15）： 1972-1982.

［10］Velagacherla V， Suresh A， Mehta CH， et al. Advances and challenges in nintedanib drug delivery［J］. Expert Opin Drug Deliv， 2021， 18（11）： 1687-1706.

［11］Patel P， Patel M. Enhanced oral bioavailability of nintedanib esylate with nanostructured lipid carriers by lymphatic targeting： in vitro， cell line and in vivo evaluation［J］. Eur J Pharm Sci， 2021， 159： 105715.

［12］Barjaktarevic IZ， Milstone AP. Nebulized therapies in COPD： past， present， and the future［J］. Int J Chron Obstruct Pulmon Dis， 2020， 15： 1665-1677.

［13］Mayor A， Thibert B， Huille S， et al. Inhaled antibodies： formulations require specific development to overcome instability due to nebulization［J］. Drug Deliv Transl Res， 2021， 11（4）： 1625-1633.

［14］Phillips JE， Peng R， Burns L， et al. Bleomycin induced lung fibrosis increases work of breathing in the mouse［J］. Pulm Pharmacol Ther， 2012， 25（4）： 281-285.

［15］Zhao H， Chan-Li Y， Collins SL， et al. Pulmonary delivery of docosahexaenoic acid mitigates bleomycin-induced pulmonary fibrosis［J］. BMC Pulm Med， 2014， 14： 64.

［收稿日期］2024-04-07［編輯］郭 欣