呼吸道感染病原菌培養結果及晶芯呼吸道病原菌核酸檢測價值研究

【摘要】目的 研究呼吸道感染患者病原菌檢測結果，探討晶芯呼吸道病原菌核酸檢測的價值，為臨床提供參考。方法 回顧性分析2021年4月至2023年10月甘肅醫學院附屬醫院收治的98例呼吸道感染患者的臨床資料。以痰培養結果為金標準，觀察呼吸道感染病原菌檢測結果，分析晶芯呼吸道病原菌核酸檢測與痰培養結果的一致性，分析晶芯呼吸道病原菌核酸檢測診斷革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌和真菌感染的價值。結果 98例患者均獲得檢測標本，檢測結果顯示，98例患者共檢測出病原菌株112株，以銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌等革蘭氏陰性菌為主。一致性分析結果顯示，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測結果與痰培養結果一致性高（Kappa值=0.788）。晶芯呼吸道病原菌核酸檢測診斷革蘭氏陰性菌的靈敏度為90.54%，特異度為86.84%，準確率為89.29%；晶芯呼吸道病原菌核酸檢測診斷革蘭氏陽性菌的靈敏度為90.00%，特異度為89.02%，準確率為89.29%；晶芯呼吸道病原菌核酸檢測診斷真菌的靈敏度為75.00%，特異度為90.38%，準確率為89.29%。結論 呼吸道感染患者病原菌以革蘭氏陰性菌為主，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測用于病原菌檢測準確率高，具有較高臨床應用價值。

【關鍵詞】呼吸道感染；病原菌分布；晶芯呼吸道病原菌核酸檢測；診斷價值

【中圖分類號】R446 【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-2665.2024.15.0123.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2024.15.041

呼吸道感染是臨床常見病，多為細菌和真菌等病原菌感染呼吸道所致，可表現為與普通感冒相似癥狀，嚴重情況可導致急性病毒性咽炎、肺炎等。抗感染治療是呼吸道感染的主要治療方案，近年來，隨著臨床技術進步，呼吸道感染的治療方案不斷優化，患者的預后得到顯著改善，但部分患者的病情仍會遷延發展，導致呼吸衰竭等不良預后[1]。早期病原菌檢測對指導臨床治療至關重要，痰培養是目前呼吸道感染患者病原菌檢測的金標準，但其所需時間較長，可能會延誤治療時機[2]。因此，優化病原菌測定方案備受關注。晶芯呼吸道病原菌核酸檢測技術根據恒溫擴增微流控原理，進行實時熒光分析，可檢測痰液標本中的病原菌情況，該技術在臨床逐漸得到推廣應用[3]。基于此，本研究探討呼吸道感染患者病原菌分布情況，并分析晶芯呼吸道病原菌核酸檢測技術的臨床價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2021年4月至2023年10月甘肅醫學院附屬醫院收治的98例呼吸道感染患者的臨床資料。98例患者中男性56例，女性42例；年齡25～64歲，平均年齡（49.12±10.45）歲；BMI 17.20～27.50 kg/m2，平均BMI（21.87±2.15）kg/m2；病情程度[4]：輕度35例，中度42例，重度21例。本研究經甘肅醫學院附屬醫院醫學倫理委員會批準。納入標準：⑴符合呼吸道感染的診斷標準[5]；⑵年齡gt;18歲，且臨床資料完整。排除標準：⑴合并溶血性貧血、急性髓系白血病和小板減少性紫癜等血液系統疾病者；⑵妊娠期、哺乳期者或正在備孕者；⑶合并惡性腫瘤者；⑷合并心力衰竭、腦出血、肝硬化和肺結核等嚴重基礎疾病者；⑸合并精神分裂癥、抑郁癥、精神意識障礙、不能配合檢查者。

1.2 研究方法 采用吸痰器（東莞東冠電子制品有限公司，粵械注準20192141060，型號：SU-DC01）吸取兩組患者痰液3 mL。采用微流控蝶式芯片進行反應，以熒光染料滲入法進行熒光分析，形成“S”形擴增曲線，完成擴增檢測，記錄檢測結果。另以相同方法吸取痰液3 mL送檢，將痰液標本接種至巧克力瓊脂平面，在37 ℃下培養24 h，挑選優勢菌落，采用手工涂片、染色，鑒定呼吸道感染病原菌的形態和種類[采用全自動微生物鑒定及藥敏分析系統（生物梅里埃美國股份有限公司，國械注進20162222277，型號：VITEK 2 Compact）和革蘭氏陽性細菌藥敏卡片（生物梅里埃美國股份有限公司，國械注進20172401374，規格：20測試/盒）進行鑒定]。

1.3 觀察指標 ⑴分析呼吸道感染病原菌檢測結果。⑵分析晶芯呼吸道病原菌核酸檢測與痰培養結果的一致性。⑶分析晶芯呼吸道病原菌核酸檢測診斷革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌和真菌的價值。記錄晶芯呼吸道病原菌核酸檢測技術診斷病原菌種類的靈敏度、特異度與準確率。靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%；特異度=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%；準確率=（真陽性例數+真陰性例數）/總例數×100%。

1.4 統計學分析 采用SPSS 18.0統計學軟件分析數據。計數資料以例或百分率（%）表示；一致性分析采用Kappa檢驗，以Kappa值gt;0.75為一致性好。以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 呼吸道感染病原菌檢測結果 98例患者均獲得檢測標本，檢測結果顯示，98例患者共檢測出病原菌株112株，含銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、屎腸球菌、曲霉菌及白假絲酵母菌共9類菌株，其中以銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌等革蘭氏陰性菌為主，見表1。

2.2 晶芯呼吸道病原菌核酸檢測與痰培養結果的一致性分析 一致性分析結果顯示，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測結果與痰培養結果一致性高（Kappa值=0.788），見表2。

2.3 晶芯呼吸道病原菌核酸檢測診斷革蘭氏陰性菌的價值分析 晶芯呼吸道病原菌核酸檢測診斷革蘭氏陰性菌的靈敏度為90.54%，特異度為86.84%，準確率為89.29%；晶芯呼吸道病原菌核酸檢測診斷革蘭氏陽性菌的靈敏度為90.00%，特異度為89.02%，準確率為89.29%；晶芯呼吸道病原菌核酸檢測診斷真菌的靈敏度為75.00%，特異度為90.38%，準確率為89.29%，見表3、表4、表5。

3 討論

呼吸道感染是臨床常見感染性疾病，發病后不僅會出現咳嗽、咽痛和畏寒發熱等臨床癥狀，還可降低機體免疫防御能力和肺功能[6]，甚至影響患者遠期預后。及時有效的抗感染治療能避免病情惡化，而在疾病早期進行準確的病原菌檢測對指導抗生素的應用至關重要。因此，長期以來如何快速準確地對呼吸道感染進行診斷，并檢出病原菌一直是臨床關注焦點。目前，臨床多以痰培養結果為金標準，但痰培養檢測操作步驟繁瑣，耗時略長，可能錯過最佳治療時機，且部分患者可能發生假陰性結果，影響臨床診療方案的制訂。晶芯呼吸道病原菌核酸檢測利用等溫擴增技術進行實時熒光反應，對病原菌進行定性檢測，具有快速、準確和低廉的特點，在呼吸道感染病原菌檢測中具有顯著優勢[7]。與痰培養檢測比較，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測時間更短，可在2 h內得到檢測報告，縮短檢驗周期[8]。

本研究結果顯示，98例患者均獲得檢測標本，檢測結果顯示，98例患者共檢測出病原菌株112株，以銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌等革蘭氏陰性菌為主，這與宋昱晨等[9]結果一致，提示革蘭氏陰性菌是呼吸道感染主要病原菌。在臨床干預中，可早期進行經驗性抗生素干預，在獲得病原菌檢測結果后針對性地調整用藥，以提高抗菌效果，改善預后。本研究一致性分析結果顯示，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測結果與痰培養結果一致性高，提示晶芯呼吸道病原菌核酸檢測具有較高的準確性。晶芯呼吸道病原菌核酸檢測應用環介導恒溫擴增技術，該技術操作簡單，在65 ℃狀態下使DNA聚合酶復制擴增后檢測出痰液中的病原菌[10]。趙溜[11]的研究結果也顯示，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測技術穩定性強、特異度和敏感度均較高，能早期識別病原菌種類，且該技術檢測成本和檢測設備要求均較低，適宜在基層醫院應用。因此，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測對呼吸道感染病原菌篩查和臨床治療中具有重要指導和實用價值。

本研究結果還顯示，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌和真菌的診斷均具有較高的靈敏度、特異度和準確率，這可能是因該技術可在痰液標本中準確提取病原菌DNA，進而為鑒別病原菌種類提供依據[12]。另外，晶芯呼吸道感染病原菌采用等溫擴增技術，通過促進病原菌DNA增殖復制，從而提高病原菌的檢出率[13]。但在臨床應用的過程中，其檢測結果可能受痰液標本保存條件、操作流程、擴增條件等因素影響[14]。因此，今后應注意痰液標本的保護，堅持無菌操作原則，按步驟進行檢測操作，以避免結果誤差，進一步提高檢測結果的準確性。另外，本研究的樣本量較小，且為回顧性分析，今后將開展更大樣本量的前瞻性對照研究進一步驗證研究結論。

綜上所述，呼吸道感染患者病原菌以革蘭氏陰性菌為主，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測技術用于病原菌檢測的準確性高，具有較高臨床應用價值。

參考文獻

徐莉娜，霍鳳玲，李宏輝.呼吸道感染患者的免疫功能、病原菌分布及耐藥情況對臨床預后的影響[J].中國實驗診斷學， 2020， 24（6）： 965-968.

張曼，徐艷，楊懷，等.醫院感染病原學診斷水平現狀分析與展望[J].中華醫院感染學雜志， 2017， 27（8）： 1725-1728.

吳曉睛，汪東，薛文靜，等.晶芯呼吸道病原菌核酸檢測技術與痰培養在臨床中的應用[J].檢驗醫學與臨床， 2019， 16（1）： 107-109.

中華醫學會，中華醫學會臨床藥學分會，中華醫學會雜志社，等.急性上呼吸道感染基層合理用藥指南[J].中華全科醫師雜志， 2020， 19（8）： 689-697.

中華醫學會呼吸病學分會. 中國成人社區獲得性肺炎診斷和治療指南（2016年版）[J]. 中華結核和呼吸雜志， 2016， 39（4）： 253-279.

馬井國，查琳.原發免疫性血小板減少患者確診后半年內呼吸道感染的臨床危險因素分析[J].臨床肺科雜志， 2019， 24（11）： 1978-1981.

陶文學，陳來秀，李正國，等.探討晶芯呼吸道病原菌核酸檢測恒溫擴增技術對檢測成人呼吸道感染病原菌的準確性[J].中國社區醫師， 2021， 37（26）： 124-125.

何祥鵬，鄒秉杰，齊謝敏，等.基于核酸等溫擴增的病原微生物微流控檢測技術[J].遺傳， 2019， 41（7）： 611-624.

宋昱晨，趙美芳，王月花.呼吸內科下呼吸道感染患者常見病原菌分布與相關危險因素分析[J].中華醫院感染學雜志， 2015， 25（9）： 1965-1967.

陳艷玲.環介導等溫擴增技術在快速病原菌檢測中的價值[J].實用檢驗醫師雜志， 2019， 11（3）： 131-133.

趙溜.晶芯呼吸道病原菌核酸檢測技術與痰培養在臨床中的應用[J].實用檢驗醫師雜志， 2019， 11（3）： 162-164.

陶文學，陳來秀，李正國，等.晶芯呼吸道病原菌核酸檢測在臨床中的應用價值探究[J].當代醫學， 2021， 27（22）： 107-109.

中華檢驗醫學培訓工程專家委員會，中華醫學會呼吸病學分會.成人呼吸道感染病原診斷核酸檢測技術臨床應用專家共識（2023）[J].協和醫學雜志， 2023， 14（5）： 959-971.

LEE S H， KIM S Y， KIM H H， et al. Evaluation of peptide nucleic acid probe-based fluorescence in situ hybridization for the detection of mycobacterium tuberculosis complex and nontuberculous mycobacteria in clinical respiratory specimens[J]. Ann Clin Microbiology， 2015， 18（2）： 37-43.