SPE-UHPLC-MS/MS法在豬肉氯苯胺靈殘留檢測中的應用

摘 要：本研究采用固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Solid Phase Extraction-Ultra High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，SPE-UHPLC-MS/MS）對豬肉中氯苯胺靈的殘留進行檢測。通過優(yōu)化氣相色譜-質(zhì)譜條件，建立了氯苯胺靈的標準曲線，結果表明，氯苯胺靈在0.50～100.00 μg·L-1線性關系良好，相關系數(shù)為0.996 4。平均加標回收率為85.25%～92.75%，相對標準偏差為1.83%～3.07%。該方法回收率好、精密度高，適用于豬肉中氯苯胺靈的快速、準確檢測。

關鍵詞：固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；豬肉；氯苯胺靈

Application of SPE-UHPLC-MS/MS in the Determination of Chlorpheniramine Residues in Pork

WANG Dan

（Qin’an County Food and Drug Inspection and Testing Centre， Qin’an 741600， China）

Abstract： This study used solid phase extraction ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry （SPE-UPLC-MS/MS） to detect residues of chlorpheniramine in pork. By optimizing the gas chromatography-mass spectrometry conditions， a standard curve for chlorpheniramine was established. The results showed that chlorpheniramine had a good linear relationship between 0.50 μg·L-1 and 100.00 μg·L-1， with a correlation coefficient of 0.996 4. The average recovery rate of spiked samples is 85.25% to 92.75%， and the relative standard deviation is 1.83%～3.07%. This method has good recovery rate and high precision， and is suitable for rapid and accurate detection of chlorpheniramine in pork.

Keywords： solid phase extraction-ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry; pork; chlorpheniramine

氯苯胺靈是一種廣泛應用于獸醫(yī)領域的抗組胺藥物，主要用于治療動物的過敏性疾病。然而，由于其在動物體內(nèi)的殘留對人體健康構成潛在風險，特別是在食品安全日益受到重視的背景下，監(jiān)測食品中藥物殘留成為重要的研究課題。豬肉作為人們?nèi)粘ｏ嬍持谐Ｒ姷娜忸愂称罚浒踩灾苯佑绊懙较M者的健康[1-2]。在國際上，為了檢測氯苯胺靈及其他獸藥殘留，已經(jīng)開發(fā)并應用了多種分析方法。傳統(tǒng)的檢測技術，如氣相色譜和液相色譜，雖然具有一定靈敏度和選擇性，但在處理復雜樣品基質(zhì)時往往面臨干擾問題。近年來，隨著質(zhì)譜技術的發(fā)展，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用和超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用逐漸成為獸藥殘留檢測分析的主流技術。這些技術不僅提高了檢測的靈敏度，還有效減少了基質(zhì)效應[3-4]。在國內(nèi)，針對氯苯胺靈的研究相對較少，但隨著食品安全法規(guī)的不斷完善和消費者對食品安全意識的提高，相關研究正在逐漸增加。研究人員開始關注使用固相萃取與高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術（Ultra High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，UHPLC-MS/MS）相結合的方法，優(yōu)化樣品前處理和分析條件，以提高氯苯胺靈的檢測效率和準確性。因此，開發(fā)出高效、靈敏的檢測方法，確保豬肉中氯苯胺靈的殘留水平符合食品安全標準，具有重要的實際意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

豬肉，購自超市；氯苯胺靈標準溶液（1 000 mg·L-1），上海績祥生物科技有限公司；無水氯化鈉（分析純），四川源盛達化工有限公司；甲酸、甲醇、乙腈、氯化鈉和正己烷（色譜純），均購自美國Merck公司；乙腈標準溶液，美國Merck公司。

1.2 儀器與設備

AB SCIEX QTRAP 5500+型超高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國Agilent公司；HES-24B真空固相萃取裝置，美國Agilent公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準溶液配制

①氯苯胺靈標準儲備液：精確吸取1.0 mL氯苯胺靈標準溶液（1 000 mg·L-1），用甲醇稀釋后定容至25 mL容量瓶中，即得氯苯胺靈標準儲備液（40 mg·L-1）。②氯苯胺靈標準溶液：精密量取1.0 mL氯苯胺靈標準儲備液，用甲醇稀釋，配置成1.0 mg·L-1氯苯胺靈標準溶液。③氯苯胺靈標準系列溶液：分別吸取12.50 μL、25.00 μL、56.25 μL、112.50 μL、225.00 μL、1 125.00 μL和2 500.00 μL氯苯胺靈標準儲備液，用甲醇稀釋至1 L，即得0.50 μg·L-1、1.00 μg·L-1、2.25 μg·L-1、4.50 μg·L-1、9.00 μg·L-1、45.00 μg·L-1和100.00 μg·L-1標準溶液。

1.3.2 樣品前處理

樣品粉碎→試樣（3 g試樣放入50 mL離心管）+10.0 mL乙腈→超聲提取5 min→均質(zhì)15 min→2 g氯化鈉+3 g無水氯化鈉→均質(zhì)3 min，10 000 r·min-1，離心3 min→取上清液7 mL→2 mL正己烷（乙腈飽和）（均質(zhì)2 min，10 000 r·min-1，離心2 min）→取提取液5 mL→45 ℃氮吹→定容→待測。

甲醇5 mL+水5 mL→活化固相萃取柱→乙腈水溶液（5 mL，30%）→乙腈8 mL洗脫→45 ℃氮吹，濃縮至0.5 mL→乙腈-0.2%甲酸水（V/V）溶液（1∶1，V/V）→過0.22 μm PTFE濾膜→待測。

1.3.3 氣相色譜-質(zhì)譜條件

（1）色譜條件。流動相A：0.2%甲酸水溶液；流動相B：乙腈；洗脫順序：B（15%，0～1.00 min）→B（15%→ 90%，1.00～5.00 min）→B（90%，5.00～8.00 min）→B（90%→ 15%，8.00～8.01 min）→B（15%，8.01～10.00 min）；進樣量：5 μL；柱溫：40 ℃。

（2）質(zhì)譜條件。ESI模式；離子源溫度：550 ℃；掃描模式：正離子掃描模式。

1.3.4 標準曲線繪制

按照1.3.3氣相色譜-質(zhì)譜條件，將氯苯胺靈標準溶液（1 000 mg·L-1）、標準系列溶液（0.50 μg·L-1、1.00 μg·L-1、2.25 μg·L-1、4.50 μg·L-1、9.00 μg·L-1、45.00 μg·L-1、100.00 μg·L-1）依次進行上機測定，以氯苯胺靈的峰面積為縱坐標（y），質(zhì)量濃度為橫坐標（x），進行線性回歸，繪制標準曲線[5]。

1.3.5 回收率與精密度

在1.3.3氣相色譜-質(zhì)譜條件下，準備5 g（精確至0.01 g）空白樣品，向空白樣品中添加0.003 mg·kg-1、0.006 mg·kg-1、0.060 mg·kg-1標準溶液，按照1.3.2進行樣品前處理，平行測定6次，計算加標回收率和精密度。

2 結果與分析

2.1 色譜柱的選擇

將過濾后的樣品提取液注入高效液相色譜儀，記錄注入量。根據(jù)Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×2.1 mm，5 μm）、Agilent ZORBAX SB-C18（100 mm×2.1 mm，5 μm）、Agilent Eclipse Plus C18（150 mm×2.1 mm，5 μm）色譜柱的特性，選擇適當?shù)臋z測波長進行監(jiān)測。記錄保留時間、峰面積和峰形狀等關鍵參數(shù)。Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×2.1 mm，5 μm）色譜柱的保留時間和峰形效果均優(yōu)于其他兩種色譜柱。因此，被選為氯苯胺靈的分離色譜柱。

2.2 固相萃取柱的選擇

不同類型的固相萃?。⊿olid Phase Extraction，SPE）柱在樣品凈化方面的效果存在差異。本研究對4種SPE柱進行了比較，包括陽離子交換SPE柱ProElut PXC（60 mg/3 mL）、陰離子交換SPE柱ProElut PXA（60 mg/3 mL）、硅酸鎂SPE柱ProElut Florisil（200 mg/3 mL）以及親水親脂平衡SPE柱ProElut PLS（200 mg/6 mL），以評估它們對氯苯胺靈的保留能力。由圖1可知，親水親脂平衡SPE柱的保留量最高，達到98.3%。這表明親水親脂平衡SPE柱在樣品凈化過程中對氯苯胺靈具有較高的親和力，能夠有效地捕獲目標化合物。這種高保留量與其特殊的填料特性有關，該填料使其在極性和非極性分子之間實現(xiàn)良好的平衡。陽離子交換SPE柱和陰離子交換SPE柱的保留量分別為88.7%和85.3%。這兩種柱雖然表現(xiàn)不及親水親脂平衡SPE柱，但仍然具有較高的保留能力，適合在一定條件下進行氯苯胺靈的凈化。這與它們的填料成分和孔隙結構有關。硅酸鎂SPE柱的保留量最低，僅為60.2%。這表明其在凈化氯苯胺靈時效果較差，是由于其對該類化合物的親和力不足。硅酸鎂SPE柱通常用于分離極性較強的化合物，因此在處理氯苯胺靈時面臨一定的挑戰(zhàn)。因此，本實驗選擇親水親脂平衡SPE柱作為固相萃取柱。

2.3 標準曲線、相關系數(shù)及檢出限

在實驗中，將氯苯胺靈質(zhì)量濃度作為橫坐標，以氯苯胺靈峰面積作為縱坐標，繪制出標準曲線。得到標準曲線的方程為Y=3 004.096 8X+517.960 8。標準曲線的相關系數(shù)r2為0.996 4，接近于1，檢出限為2.5 μg·L-1，表明質(zhì)量濃度與峰面積之間存在良好的線性關系。

2.4 回收率與精密度

在不同添加水平（0.003 mg·kg-1、0.006 mg·kg-1和0.060 mg·kg-1）下測定氯苯胺靈的加標回收率和相對標準偏差（Relative Standard Deviation，RSD）。每個添加水平進行6次平行試驗。由表1可知，氯苯胺靈的平均回收率為85.25%～92.75%，相對標準偏差為1.83%～3.07%，表明本實驗所開發(fā)的SPE-UHPLC-MS/MS法在不同濃度下均能有效檢測氯苯胺靈殘留，且具有較高的準確性和精密度。隨著添加水平的提高，回收率和精密度均有所改善，尤其是在0.060 mg·kg-1濃度水平下，表現(xiàn)出最佳的檢測性能。

2.5 實際樣品檢測

采用本文建立的方法對6個超市的60批次豬肉樣品進行全面的檢測。檢測結果顯示，所有樣品均未檢測出氯苯胺靈殘留。這一結果不僅表明了本研究方法的有效性和可靠性，也反映出這些超市銷售的豬肉產(chǎn)品在氯苯胺靈方面符合相關安全標準。通過對這些樣品的檢測，驗證了該方法實際應用在豬肉樣品檢測中的可行性。

3 結論

本研究成功開發(fā)了固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，能夠有效檢測豬肉中氯苯胺靈殘留，具有良好的分析性能。通過對氯苯胺靈標準溶液進行測定并繪制標準曲線，結果表明，氯苯胺靈的質(zhì)量濃度與峰面積之間存在良好的線性關系，相關系數(shù)r2為0.996 4，確保了定量分析的可靠性。氯苯胺靈的加標回收率為85.25%～92.75%，相對標準偏差為1.83%～3.07%，表明該方法在樣品前處理和分析過程中的準確性和精密度均較高。SPE-UHPLC-MS/MS法具有快速、靈敏和準確的特點，適用于豬肉及其他動物源性食品中氯苯胺靈的檢測，能夠為食品安全監(jiān)管提供有效的技術支持。

參考文獻

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