外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞及IL-6在不同分期慢性腎臟病患者中的表達及臨床意義

【摘要】 目的：探討外周血T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞（NK細胞）、B細胞及白細胞介素-6（IL-6）在不同分期慢性腎臟病（chronic kidney disease，CKD）患者中的表達及臨床意義。方法：選取鹽城市中醫院腎內科2022年10月—2023年6月收治的80例CKD 3～5期患者設為CKD組，另外選擇同期21例健康體檢者設為對照組，其中CKD組患者根據腎小球濾過率水平分為CKD 3期組、CKD 4期組、CKD 5期組。用流式細胞術檢測外周血T淋巴細胞亞群（CD4+ T細胞、CD8+ T細胞）、NK細胞、B細胞，用酶聯免疫吸附試驗檢測IL-6水平。比較以上指標在不同分期CKD患者中的表達，并采用Spearman相關性分析以上指標與CKD嚴重程度的相關性。結果：CKD 3期組、CKD 4期組、CKD 5期組CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、NK細胞、B細胞均明顯低于對照組，且CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、NK細胞、B細胞隨CKD嚴重程度加重逐漸降低，差異均有統計學意義（Plt;0.05）；CKD 3期組、CKD 4期組、CKD 5期組IL-6水平明顯高于對照組，且IL-6水平隨CKD嚴重程度加重逐漸升高，差異均有統計學意義（Plt;0.05）；IL-6水平與CKD分期呈負相關，CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、NK細胞、B細胞與CKD分期呈正相關（Plt;0.05）。結論：隨著CKD進展，患者的免疫功能受到顯著影響，外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞及IL-6在評估CKD患者疾病進展中有重要臨床意義。

【關鍵詞】 慢性腎臟病 T淋巴細胞亞群 白細胞介素-6

Expression and Clinical Significance of T Lymphocyte Subsets， NK Cell， B Cell and IL-6 in Peripheral Blood in Patients with Different Stages of Chronic Kidney Disease/SHI Hongjuan， MENG Xianjie， QIN Songlin. //Medical Innovation of China， 2024， 21（16）： 099-102

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of T lymphocyte subsets， natural killer cell （NK cell）， B cell and interleukin-6 （IL-6） in peripheral blood in patients with different stages of chronic kidney disease （CKD）. Method： A total of 80 patients with CKD stage 3-5 admitted to the Department of Nephrology， Yancheng Traditional Chinese Medicine Hospital from October 2022 to June 2023 were selected as the CKD group， and 21 healthy subjects in the same period were selected as the control group. Patients in the CKD group were divided into CKD stage 3 group， CKD stage 4 group and CKD stage 5 group according to the glomerular filtration rate level. T lymphocyte subsets （CD4+ T cell， CD8+ T cell）， NK cell and B cell in peripheral blood were detected by flow cytometry， and IL-6 levels were detected by enzyme linked immunosorbent assay. The expression of the above indexes in patients with different stages of CKD were compared， and Spearman correlation was used to analyze the correlation between the above indexes and the severity of CKD. Result： CD4+ T cell， CD8+ T cell， NK cell and B cell in CKD stage 3 group， CKD stage 4 group， CKD stage 5 group were significantly lower than those in control group， and CD4+ T cell， CD8+ T cell， NK cell and B cell gradually decreased with the severity of CKD， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. The levels of IL-6 in CKD stage 3 group， CKD stage 4 group， CKD stage 5 group were significantly higher than that in control group， and the levels of IL-6 increased gradually with the severity of CKD， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. IL-6 level was negatively correlated with CKD stage， and CD4+ T cell， CD8+ T cell， NK cell and B cell were positively correlated with CKD stage （Plt;0.05）. Conclusion： With the progression of CKD， the immune function of patients is significantly affected， and peripheral blood T lymphocyte subsets， NK cell， B cell and IL-6 have important clinical significance in evaluating the disease progression of patients with CKD.

[Key words] Chronic kidney disease T lymphocyte subsets Interleukin-6

First-author's address： Department of Nephrology， Yancheng Traditional Chinese Medicine Hospital， Yancheng 224001， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2024.16.021

慢性腎臟病（CKD）是一種長期且逐漸進展的疾病，它對全球的健康和經濟體系都帶來了沉重的負擔，該疾病與高血壓、糖尿病、心血管疾病及遺傳因素關系密切[1-2]，其診斷和分期多通過腎小球濾過率（GFR）等判斷[3]。根據世界衛生組織的數據，全球約有10%的人口受到CKD的困擾[4]，CKD對患者的生活質量和生活預期造成了嚴重的負面影響。在早期階段CKD不會引起明顯的癥狀，CKD根據eGFR的范圍分為5期，第5期也稱為終末期腎病（ESKD），此時患者的腎臟功能幾乎完全喪失，需要透析或腎移植來維持生命[5]。近年來，研究表明CKD的發病機制與免疫因素有密切的關系。T淋巴細胞、B細胞和自然殺傷細胞（NK細胞）是免疫系統中的重要細胞，它們在維護機體免疫功能和抵御感染中發揮關鍵作用[6-7]。白細胞介素-6（IL-6）是一種重要的細胞因子，IL-6的表達增加與炎癥、免疫功能下降和心血管疾病風險增加有關[8]。然而外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞及IL-6在CKD病程中的表達及其與不同分期的關系尚未明確。本研究旨在探討外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞及IL-6在不同分期CKD患者中的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取鹽城市中醫院腎內科2022年10月—2023年6月收治的80例CKD 3～5期患者設為CKD組。納入標準：（1）確診為CKD 3～5期；（2）未接受任何激素或免疫抑制劑治療。排除標準：（1）過敏體質；（2）近期存在急性感染、外傷或其他急性疾病；（3）合并心、肝、肺、腦等臟器功能障礙。同期另選擇21例健康體檢者設為對照組，納入標準：體檢結果顯示所有主要健康指標（如血壓、膽固醇、血糖等）均在正常范圍。排除標準：（1）有精神健康問題；（2）有重度飲酒或藥物濫用史。CKD組根據文獻[9]《KDIGO慢性腎臟病評價及管理臨床實踐指南》進行分期：患者GFR 30～59 mL/（min·1.73 m2）納入CKD 3期組（n=27），患者GFR 15～29 mL/（min·1.73 m2）納入CKD 4期組（n=29），患者GFRlt;15 mL/（min·1.73 m2）納入CKD 5期組（n=24）。本研究經本院醫學倫理委員會審核批準。患者及健康體檢者明確表示愿意參與研究，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞通過流式細胞術（flow cytometry）進行檢測 （1）樣本準備：采取2～4 mL外周血，離心。（2）細胞染色：將特定的熒光標記的抗體與血樣中的細胞孵育，這些抗體能特異性結合到細胞表面的抗原上。例如，CD4抗體用于標記輔助性T細胞（CD4+ T細胞），CD8抗體用于標記細胞毒性T細胞（CD8+ T細胞），CD56抗體用于標記NK細胞，CD19抗體用于標記B細胞。（3）流式細胞檢測：經過染色的樣本單個細胞通過激光進行照射，這些細胞上的熒光標記抗體被光激活，從而發射出特定波長的熒光，流式細胞儀隨后捕獲這些熒光信號，并將信息傳遞給計算機系統進行數據分析和解讀。（4）數據分析：通過專用軟件，根據熒光強度來鑒定和計數T淋巴細胞亞群、NK細胞和B細胞。

1.2.2 IL-6通過酶聯免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）進行檢測 （1）樣本準備：采集患者靜脈血，經離心后取上清血漿。（2）抗體包被：將特異性抗IL-6抗體加入ELISA試劑盤的孔內，孵育后洗滌去除未結合的抗體。（3）樣本孵育：將血漿樣本加入包被抗體的孔中，孵育后洗滌去除未結合的成分。（4）酶標抗體孵育：加入與IL-6特異性結合的熒光標記的酶標抗體，孵育后洗滌去除未結合的抗體。（5）底物加入：加入底物，與酶標抗體發生反應產生顏色。（6）光度檢測：使用酶標儀測量每個孔的吸光度，根據標準曲線計算IL-6的濃度。

1.3 觀察指標

（1）比較不同分期CKD患者外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞、IL-6的表達變化。（2）評估外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞、IL-6與CKD分期的相關性。

1.4 統計學處理

采用SPSS 21.0軟件進行試驗數據的統計分析。計量資料用（x±s）表示，組間比較行F檢驗；計數資料以率（%）表示，組間采用字2檢驗。兩個變量之間關系使用雙變量相關分析，數據符合正態分布，用Spearman相關系數描述。Plt;0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基線資料

四組基線資料比較，差異均無統計學意義（Pgt;0.05），具有可比性，見表1。

2.2 外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞及IL-6表達情況

CKD 3期組、CKD 4期組、CKD 5期組CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、NK細胞、B細胞均明顯低于對照組，且CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、NK細胞、B細胞隨CKD嚴重程度加重逐漸降低，差異均有統計學意義（Plt;0.05）；CKD 3期組、CKD 4期組、CKD 5期組IL-6水平明顯高于對照組，且IL-6水平隨CKD嚴重程度加重逐漸升高，差異均有統計學意義（Plt;0.05）。見表2。

2.3 外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞及IL-6與CKD分期的相關性

Spearman相關性分析顯示，IL-6水平與CKD分期呈正相關，CD4+ T、CD8+ T細胞、NK細胞、B細胞與CKD分期呈負相關（Plt;0.05），見表3。

3 討論

CKD臨床表現多樣，包括蛋白尿、水腫、疲勞、肌肉痙攣等，對患者的生活質量產生重要影響，同時也會增加患者的心血管病風險[10-11]。在CKD患者中，免疫系統紊亂是一個常見的現象。T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞是免疫系統中的重要組成部分，它們在免疫應答、感染防御和炎癥調控中起著關鍵作用，CD4+ T細胞和B細胞主要參與免疫應答的啟動和調控；CD8+ T細胞和NK細胞則主要負責直接攻擊病原體和腫瘤細胞[12-15]。IL-6是一種參與炎癥和免疫反應的細胞因子。

在本研究中，隨著CKD的進展，CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、NK細胞、B細胞在外周血中的表達明顯降低，結果表明隨著CKD的加重，患者可能出現免疫功能低下或免疫抑制，導致輔助性T細胞和B細胞的數目降低。由于這幾種細胞在啟動和調節免疫應答中起著關鍵作用，其數量的減少可能導致體內對外來病原體的免疫應答減弱，彭琪彥[16]和王漢敏等[17]的研究也證實了這一點。在王麗瓊等[18]和龔云等[19]的研究中，IL-6的表達隨著CKD的加重而增加，這與細胞毒性和炎癥反應有關。外周血T淋巴細胞亞群的減少影響患者的抗感染能力，加劇感染性并發癥的風險，NK細胞和B細胞的減少同樣指示了CKD患者特有的免疫抑制狀態，這是由于慢性炎癥環境對這些免疫細胞的直接影響。

綜上所述，深入研究外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞、B細胞及IL-6的表達，能夠更好地了解CKD在不同分期的病理機制，為制訂更精確的治療策略和預測疾病的進展提供重要的依據。

參考文獻

[1]程慶礫.肺動脈高壓在加速老年慢性腎臟病進展中的作用[J].腎臟病與透析腎移植雜志，2023，32（2）：146.

[2]余蓓蕾，姜玲，李喆，等.腎小球濾過率對急慢性腎臟病患者溶質及電解質腎臟排泄分數的影響[J].腎臟病與透析腎移植雜志，2023，32（1）：1-7.

[3]張愛華，李文.慢性腎臟病與肺動脈高壓的診斷和治療[J].腎臟病與透析腎移植雜志，2023，32（2）：149-150.

[4]葉敏媛，林威遠.慢性腎臟病患者不寧腿綜合征的診治進展[J].中外醫學研究，2021，19（3）：188-190.

[5]史德寶，呂禮應.肌酐實驗室分析變異對估算腎小球濾過率及慢性腎臟病分期的影響[J].安徽醫科大學學報，2016，51（7）：993-997.

[6]陳龍.青少年系統性紅斑狼瘡伴腎功能衰竭患者外周血T、B淋巴細胞Fas表達及凋亡的變化[J].中國醫師雜志，2019，21（2）：264-265.

[7]鄧學兵，王曉菲，蔣麗，等.活動期狼瘡腎炎外周血T、B淋巴細胞表面Fas及bcl-2表達的研究[J].中國醫科大學學報，2002，31（2）：90-92.

[8]馬寅銳，宋文彬，胡偉，等.公民逝世后器官捐獻供腎移植中巨細胞病毒感染情況及治療的分析[J/OL].實用器官移植電子雜志，2023，11（2）：134-139.http：//qikan.cqvip.com/Qikan/Article/Detail？id=7109509315.

[9]王海燕.KDIGO慢性腎臟病評價及管理臨床實踐指南[M].北京：人民衛生出版社，2014：440.

[10] 彭璇，付榮.狼瘡腎炎腎小球中細胞焦亡的生物信息學分析及驗證[J].醫學研究雜志，2023，52（5）：62-67.

[11]吳勝元，張文紅，張磊.芪地補腎方對糖尿病腎病患者腎功能及血清IL-6、TNF-α、SFRP-4的影響[J].環球中醫藥，2023，16（4）：773-776.

[12]陳楷檸，杜悅.腎小球濾過率公式在中國慢性腎臟病兒童中的應用[J].腎臟病與透析腎移植雜志，2023，32（2）：107-114.

[13]韓婧，張勉之，孫嵐云.血清RBP4、NGAL、CysC、IL-2、白蛋白球蛋白比值在老年慢性腎臟病中的變化特點及意義[J].中國老年學雜志，2023，43（7）：1606-1609.

[14]郭佳恒，張更，嚴奉奇，等.慢性腎臟病流行病學及其危險因素的研究現狀[J]. 中國醫藥導報，2023，20（13）：50-53.

[15]胡亞琪，姜敏，高磊，等.補腎益氣膏摩對晚期肺癌患者T淋巴細胞亞群影響[J].云南中醫中藥雜志，2023，44（7）：34-38.

[16]彭琪彥.慢性腎臟病患者RBP與T淋巴細胞亞群檢測的臨床意義[J]. 醫學信息，2019，32（18）：91-93.

[17]王漢敏，趙妍，韓四萍.淋巴細胞亞群分析在慢性腎臟病分期中的作用[J].國際檢驗醫學雜志，2017，38（15）：2172-2174.

[18]王麗瓊，白小崗.老年糖尿病腎臟疾病患者營養指標及巨噬細胞極化狀態變化與腎損傷程度的關系分析[J]. 臨床腎臟病雜志，2022，22（12）：1023-1029.

[19]龔云，劉曉霞，嚴瑞.慢性腎臟病3～5期患者Npt、CRP、IL-6表達水平及其相關性分析[J/OL].中國醫學前沿雜志：電子版，2018，10（3）：40-43.https：//d.wanfangdata.com.cn/periodical/zgyxqyzz201803007.

（收稿日期：2024-01-02） （本文編輯：陳韻）

*基金項目：鹽城市醫學科技發展計劃項目（YK2021040）

①鹽城市中醫院腎內科 江蘇 鹽城 224001

通信作者：秦松林