柿砧木優系L938離體快繁技術建立

摘" " 要：【目的】L938是從君遷子中選育出的適宜中國北方地區應用的甜柿優良砧木，但因缺乏再生體系，使其規模化生產受到影響。高效穩定再生體系的建立有利于資源保存，同時也是開展組培快繁和遺傳轉化研究的基礎，因此建立柿砧木優系L938的高效離體快繁體系，可為品種推廣及組培苗規模化繁育提供技術支持和參考依據。【方法】以柿砧木L938為試材，重點探討了不同外植體材料、消毒時間、植物生長調節劑濃度配比組合對其再生過程的影響。【結果】（1）新梢（4月份）相較于休眠芽、新梢（5月份）為最適宜君遷子優系L938啟動培養的外植體，消毒入瓶后成活率最高，可達71.33%。（2）啟動培養階段隨著HgCl2消毒時間的延長，新梢外植體污染率整體呈下降趨勢，采用0.1 g·L-1 HgCl2處理40 min滅菌效果最好，成活率可達35.30%。（3）1/2MS培養基較適宜進行君遷子L938組培苗的繼代培養，新梢增殖系數達到4.4。（4）以1/2MS+1.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 IBA為生根培養基，暗處理7 d后轉至光下，生根率可達93.33%，根長為29.08 cm，根系表面積為19.53 cm2、根系體積為1.05 cm3。【結論】建立的柿砧木優系L938高效離體快繁體系，可為組培苗規模化繁育提供科學依據和參考。

關鍵詞：君遷子；組培快繁；外植體；消毒時間；生根

中圖分類號：S665.3 文獻標志碼：A 文章編號：1009-9980（2024）09-1875-10

Establishment of in vitro rapid propagation technology for an elite persimmon rootstock line， L938

TAN Suhong1， DENG Shaoning2， CHENG Mengye1， LIU Bowei1， ZHANG Chi2， LI Shuang2， ZHU Chenyu2， GENG Jingjing1， 2*， WANG Wenjiang1， 2*

（1National Engineering Research Center for Agriculture in Northern Mountainous Areas/Provincial Center of Technology Innovation for Agriculture in Mountainous Areas/Hebei Agricultural University， Baoding 071000， Hebei， China; 2College of Horticulture， Hebei Agricultural University， Baoding 071000， Hebei， China）

Abstract： 【Objective】 L938 is a widely compatible and cold resistant rootstock selected from Diospyros lotus L.. The cultivation practice in Shandong has proved its good grafting compatibility with non-PCNA （pollination constant non-astringent） persimmons such as Fuyu and Taishu， and can be applied as a cold resistant rootstock for non-PCNA persimmons in northern China. However， the elite line L938 of date plum is a male plant and cannot produce seeds， making its large-scale application a challenge. Therefore， in vitro rapid propagation technology of L938 for efficient reproduction of its asexual rootstock is important for large-scale nursery stock production of persimmon. 【Methods】 This study used persimmon rootstock L938 as the material and explored the effects of different explant materials， disinfection times， and plant growth regulator combinations on its regeneration process. New shoots （May）， dormant buds， and new shoots （April） of L938 were used as explants， which were rinsed with laundry detergent and placed under flowing water for 30 minutes before disinfecting treatment with 0.1% HgCl2 for 40 minutes. Effects of different types of explants on the initiation culture of L938 were studied. Stem segments during the growth period of L938 were used as the test material. The middle and upper parts of the new shoots were cut into segments before soaking in 5% laundry detergent water for 5 minutes， and then rinsed with running water for 30 minutes. After the stem segments were disinfected in 0.1 g·L-1 HgCl2 for 10， 20， 30， 40， or 50 minutes in an ultra-clean workbench， they were inoculated on 1/2MS medium and the effect of disinfection time on the plant regeneration from the explants were studied. In vitro seedlings with a plant height of about 1.5 cm growing on 1/2MS + 1.0 mg·L-1 6-BA + 0.1 mg·L-1 NAA medium were selected for subculture treatments. In an ultra-clean workbench， axillary buds of the in vitro seedlings were cut out and inoculated on 1/2MS， （1/2N） MS， or 1/4MS basic medium each containing 0.1 mg·L-1 IAA+2.0 mg·L-1 ZT. Then the effects of different basic media （1/2MS， （1/2N） MS， and 1/4MS） on the subculture of line L938 were studied. Robust in vitro shoots with a height of 2.0-3.0 cm were treated with six plant growth regulator combinations， namely， NAA （0.5 or 1.0 mg·L-1） +IBA （1.0， 2.0， or 4.0 mg·L-1）， for root induction. Then the effects of different NAA+IBA combinations on rooting rate， root length， root surface area， and root volume were studied. 【Results】 After 30 days， the pollution rate， browning rate and survival rate of new shoots （May）， dormant buds and new shoots （April） were investigated. The results showed that compared to the dormant buds and the new shoots （May）， the new shoots （April） were the most suitable explants for in vitro culture of L938 date plum. After 40 minutes of disinfection with 0.1 g·L-1 HgCl2， the survival rate of explant from the new shoots （April） was up to 71.33%. 30 days after the explants were disinfected with 0.1 g·L-1 HgCl2 for 10， 20， 30， 40， or 50 minutes， the contamination rate， browning rate， and survival rate of the explants were calculated. The results showed that prolonging the disinfection time with HgCl2 could reduce the contamination rate of the explants. The best disinfection effect was achieved by treating with 0.1 g·L-1 HgCl2 for 40 minutes， with a survival rate of 35.3%. The axillary buds of were excised from the in vitro seedlings and inoculated onto 1/2MS， （1/2N） MS， or 1/4MS basic media containing 0.1 mg·L-1 IAA+2.0 mg·L-1 ZT. After 30 days， the proliferation coefficient of new shoots and the grading of new shoots from the in vitro seedlings were recorded. The results indicated that 1/2MS medium was more suitable for subculture of date plum L938， with a new shoot proliferation coefficient of 4.4. Single buds of from the tissue culture seedlings were inoculated into medium supplemented six combinations of NAA （0.5， 1.0 mg·L-1） and IBA （1.0， 2.0， 4.0 mg·L-1） to induce rooting. After 90 days， the root length， root surface area and root volume were measured. The results showed that in the treatment of 1/2MS＋1.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 IBA medium， the rooting rate， root length， root surface area and root volume were 93.33%， 29.08 cm， 19.53 cm2 and 1.05 cm3， respectively. 【Conclusion】This study first screened the most suitable explants and disinfection time for the initiation culture of the date plum Line L938. Results showed that when new shoots （May） were used as explants， the survival rate could reach 71.33% after 40 minutes of disinfection with 0.1 g·L-1 HgCl2. Then 1/2MS medium was found to be most suitable for subculture of date plum L938 tissue cultured seedlings， with a shoot proliferation coefficient of 4.4. Finally， 1.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 IBA was the most suitable combination for inducing roots. The study established an efficient in vitro regeneration and rapid propagation technology system of persimmon rootstock superior line L938.

Key words： Diospyros lotus; Tissue culture; Explants; Disinfection time; Rooting

君遷子（Diospyros lotus L.）系柿科（Ebenaceae）柿屬（Diospyros）高大落葉喬木，又名黑棗、軟棗等[1]，是柿屬植物中經濟價值較高的種類[2]，因其實生發芽率和幼苗移栽成活率高、出苗健壯生長快，且具有較強的綜合抗逆性（抗旱性、抗寒性、耐鹽堿），常作為柿（D. kaki）優良抗性砧木在南北方地區廣泛應用[3]。

與中國主要柿資源澀柿相比，甜柿成熟后無需任何人工處理即可脆食，經濟價值更高，然而其主栽品種均源于日本。富有系甜柿品質好，但與中國常用的君遷子砧木嫁接親和性較差，難以成活，嚴重制約了優良甜柿品種的推廣和發展，因此篩選廣親和優良甜柿砧木迫在眉睫。國家柿種質資源圃的柿園中偶然發現一株以君遷子為砧木的富有成齡樹，將該砧木命名為L938。經多年研究表明其與部分優良甜柿品種，如富有、太秋等，嫁接后親和性表現良好，且耐寒性強，較適宜作為中國北方地區甜柿砧木進行推廣應用[4]。但L938為雄性植株，自身不能產生種子（采用實生繁殖其優良性狀難以保留，且后代與甜柿嫁接后表現出較差的親和性），使其規模化繁殖應用成為難題。因此，利用組培快繁技術建立君遷子優系L938再生體系，高效繁殖其無性系自根砧木，對柿專用砧木的品種形成及其規模化生產和應用具有重要意義。

與其他木本樹種相比，柿屬植物在組培過程中易出現外植體褐變、再生誘導率低[5]、生根誘導難等現象，污染、褐變和玻璃化是影響其離體快繁技術建立的三大因素，相較于污染和玻璃化，褐化現象更難控制[6]。雖然目前已有部分柿屬植物再生體系的研究，但仍存在實驗操作繁瑣、培養周期過長、遺傳穩定性差且再生效率低等問題[7]。

筆者在本研究中以柿砧木L938為試材，重點探討了不同外植體材料、消毒時間、植物生長調節劑濃度配比組合對其再生過程的影響，旨在建立柿廣親和砧木L938離體快繁體系，為其規模化應用奠定基礎。

1 材料和方法

1.1 材料

試驗在河北農業大學進行，試材為研究基地定植的柿砧木優系L938君遷子（國家柿種質資源圃）；外植體采自生長旺盛、無病蟲害的L938的新梢和休眠芽；繼代培養材料為株高1.5 cm左右的組培苗；生根材料為長勢健壯的2～3 cm幼嫩組培苗。

1.2 方法

1.2.1 啟動培養 （1）不同外植體對君遷子優系L938啟動培養的影響。12月下旬剪取1年生枝條，放入冷庫（0 ℃）儲藏，翌年3月底將枝條剪成長15～20 cm、含3～4個芽的莖段，將莖段插入含有細蛭石的育苗穴盤中，置于薄膜小拱棚保濕培養，不定期噴水，保持基質濕潤，當新梢休眠芽萌動時，用手術刀剝除芽外側2～3個鱗片，切下休眠芽作為外植體使用。4月中旬，當新梢長至1～2 cm時切下新梢莖段作為外植體使用。5月中旬剪取L938新梢，作為外植體使用。

以上3種外植體經洗衣粉漂洗后，置于自來水下沖洗30 min，在超凈工作臺中，用0.1% HgCl2消毒40 min，消毒期間數次搖晃使外植體與HgCl2溶液充分接觸，之后用滅菌水將外植體沖洗4～5次，用濾紙將表面的水輕輕擦干，接種至1/2MS（1.0 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 IAA+30 g·L-1蔗糖+7.5～8.0 g·L-1瓊脂）培養基上進行培養。每瓶放置1個外植體材料，每個處理接種50瓶，3次重復，30 d后統計外植體的污染率、褐化率和成活率。

（2）不同消毒時間對君遷子優系L938新梢啟動培養的影響。以生長期中的L938莖段為試材，剪取新梢的中上部，每節切成一個枝段，置于洗衣粉水（含量為5%）中浸泡5 min后流水下沖洗30 min，用濾紙擦干表面水分后在超凈工作臺中用0.1 g·L-1 HgCl2進行消毒，設5個時間處理（10、20、30、40、50 min），處理期間數次搖晃，使試材與HgCl2溶液充分接觸，之后用無菌水將表面殘留的HgCl2沖洗干凈，接種至1/2MS培養基上進行啟動培養，每瓶放置1個外植體材料，每個處理接種20瓶，3次重復，30 d后統計外植體的污染率、褐化率、成活率。

1.2.2 繼代培養 為探究不同基本培養基對君遷子優系L938繼代培養的影響，選取生長在1/2MS+1.0 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA培養基中、株高1.5 cm左右的君遷子組培苗，進行繼代培養。在超凈工作臺中將君遷子組培苗腋芽切下接種到分別含有0.1 mg·L-1 IAA+2.0 mg·L-1 ZT的1/2MS、（1/2N）MS、1/4MS基本培養基中。每個處理60瓶，設3次重復，30 d后統計組培苗的新梢增殖系數和新梢分級。以下是增殖新梢高度分級標準：

一級新梢：新梢高度0～1.0 cm；

二級新梢：新梢高度＞1.0～2.0 cm；

三級新梢：新梢高度＞2.0 cm。

1.2.3 生根培養 為探究不同生長調節劑種類及質量濃度組合對君遷子優系L938生根的影響，以1/2MS為基本培養基，采用NAA（0.5、1.0 mg·L-1）和IBA（1.0、2.0、4.0 mg·L-1）不同組合，共6種培養基處理（表1）。

選取株高為2.0～3.0 cm、長勢健壯的君遷子優系L938組培苗單芽，分別接種到6種不同培養基中進行生根誘導培養，每個組培瓶中放置4株外植體，每個處理接種5瓶，設3次重復，暗培養7 d后置于正常光照下培養。接種45 d后開始每隔5 d統計一次生根率并觀察記錄其生根狀態，直至90 d后測定其生根根系的長度、表面積和體積（采用Epson Scan根系掃描儀）。

1.2.4 培養條件 研究中所使用的培養基中均含有30 g·L-1蔗糖和7.5～8.0 g·L-1瓊脂，pH為5.8～6.0；植物培養室溫度26 ℃，光照度2000～3000 lx，相對濕度70%，每天光照培養時間為16 h，黑暗培養時間為8 h。

1.2.5 數據處理 試驗中的數據匯總及其整理使用Microsoft Excel 2010軟件，方差分析使用SPSS 26.0統計分析軟件，多重比較（顯著水平為0.05）使用鄧肯復極差法。采用隸屬函數法對不同處理中的各項生根評判指標進行綜合評價，加和計算不同處理的各項指標的隸屬函數值，從而得出排名。隸屬函數值的計算公式為R（Xi）＝（Xi-Xmin）/（Xmax-Xmin），i＝1，2，3，…，n（Xi為同一指標在不同處理中的測定值，Xmax和Xmin為該指標在不同處理中的最大值和最小值）[8]。

增殖系數＝分化的新梢數/接種數；

污染率/%=污染的外植體數/接種的總外植體數×100；

褐化率/%=褐化的外植體數/接種的總外植體數×100；

成活率/%=成活的外植體數/接種的總外植體數×100；

生根率/%=生根的外植體數/接種的總外植體數×100。

2 結果與分析

2.1 不同外植體對君遷子優系L938啟動培養的影響

在君遷子L938啟動培養中，選取外植體既是首要環節也是進行育苗的核心步驟。由圖1的試驗結果可知，取材時期的不同，致使外植體的污染率、褐化率、成活率存在顯著差異，其中休眠芽的污染率和褐化率最高，均顯著高于新梢（5月份）、新梢（4月份），分別為32.67%、41.33%，成活率最低，僅為22%。新梢（4月份）的污染率（18.67%）和褐化率（10.00%）均最低，且成活率顯著高于新梢（5月份）和休眠芽，可達71.33%。綜合污染率、褐化率、成活率3項指標分析，新梢（4月份）是最適宜君遷子L938啟動培養的外植體材料。

2.2 不同消毒時間對君遷子優系L938啟動培養的影響

外植體消毒效果對后續無菌苗的獲得起決定性作用，因此，適宜的消毒時間對君遷子優系L938啟動培養至關重要。由表2可知，隨著HgCl2滅菌時間的延長，新梢外植體的污染率整體呈下降趨勢，采用0.1 g·L-1 HgCl2滅菌10 min，污染率高達50.0%，將消毒時間延長到50 min時，污染率降至16.7%，但隨著HgCl2消毒時間的延長，外植體褐化率整體呈上升趨勢，植物組織損傷情況逐漸嚴重，說明延長HgCl2滅菌時間在降低污染率的同時，對外植體也產生了不可逆傷害。就成活率而言，各處理間呈現先上升后下降的趨勢，HgCl2滅菌10 min時成活率最低，僅為11.7%，顯著低于其他處理。隨著滅菌時間的延長，成活率開始逐漸上升，當HgCl2處理為40 min時，外植體成活率達到最高（35.3%），顯著高于其他處理組，而當將滅菌時間進一步延長至50 min時，成活率下降至20.0%。因此，綜合污染率、褐化率、成活率3項指標，最適宜君遷子優系L938新梢（4月份）的滅菌時間為0.1 g·L-1 HgCl2滅菌40 min。

2.3 不同基本培養基對君遷子優系L938繼代培養的影響

圖2為君遷子優系L938組培苗在不同繼代培養基中的生長狀態，可以看出1/2MS（圖2-B）中組培苗的植株高度以及生長狀態明顯優于（1/2N）MS（圖2-C）和1/4MS（圖2-D）。表3結果顯示，組培苗在1/2MS和（1/2N）MS中新梢增殖系數無明顯差異，但均顯著高于1/4MS；在一級新梢數方面，1/2MS顯著高于1/4MS，（1/2N）MS和1/4MS差異不顯著；二級新梢數與一級新梢數結果相同；，3個處理間的三級新梢數無顯著差異。試驗結果表明，1/2MS培養基較適宜進行君遷子L938組培苗的繼代培養，新梢增殖系數達到了4.40。

2.4 NAA和IBA質量濃度組合處理對君遷子優系L938生根培養的影響

NAA+IBA不同質量濃度組合對君遷子優系L938生根影響顯著。由君遷子優系L938生根狀態結果（圖3）可知，T4、T5、T6的根系數量及長度顯著優于T1、T2、T3，但葉片卻出現一定程度的黃化。

由圖4可知，不同處理間生根率、根長、根表面積、根系體積均有顯著差異。其中，T4處理（1.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 IBA）相較于其余處理根系最長（29.08 cm），且生根率高達93.33%，顯著高于其他處理組。其次是T5處理（1.0 mg·L-1 NAA+2.0 mg·L-1 IBA），T5處理的根長、根系表面積、根系體積與T4無明顯差異。T4、T5、T6處理的生根率、根長、根表面積和根系體積均高于T1、T2、T3處理，說明采用1.0 mg·L-1 NAA誘導君遷子優系L938生根的效果要優于0.5 mg·L-1 NAA。在NAA質量濃度相同的情況下，隨著IBA質量濃度增加，生根率、根長、根表面積、根系體積逐漸呈下降趨勢。

不同處理生根指標的綜合隸屬函數值排序為：T4＞T5＞T6＞T1＞T2＞T3（表4），因此綜合各處理的生根狀態及綜合隸屬函數值排名，最適宜君遷子優系L938誘導生根的植物生長調節劑質量濃度組合為T4（1.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 IBA）。

3 討 論

在植物組織培養過程中，外植體的選取既是基礎環節也是培育出優質再生植株的核心步驟。根據細胞全能性學說，在適宜的生長條件下，植物所有器官、組織均具備成長為完整植株的能力，然而不同植物的不同組織、同一組織的不同部位，其再生分化的能力存在差異[9]。在木本植物中，常用的外植體有莖尖和莖段（帶腋芽/不帶腋芽）[10]、葉片、葉柄、上/下胚軸等。另外，也有部分植物通過培養花藥[11]、胚[12]、子葉[13]等方式獲得再生植株。呂中一等[8]以君遷子的萌動芽、春梢、腋芽、休眠芽作為外植體，篩選最適合的外植體材料，結果發現萌動芽的成活率顯著高于其余3種外植體，達到60%。謝啟鑫等[14]以君遷子葉片作為外植體，研究了不同葉片部位（頂部、中部、基部、葉柄、全葉）對愈傷組織形成及不定芽誘導的影響，結果表明葉片部位不同，其愈傷組織形成及不定芽誘導存在差異，葉片基部的愈傷組織發生率、不定芽誘導率以及平均不定芽的數量都顯著高于其余部位，分別為100%、19.0%和（2.0±0.5）個。外植體的不同部位及取材時期在再生過程中存在差異。筆者在本研究中對外植體選擇方面進行研究，發現4月份新梢最適宜作為君遷子優系L938的外植體，不僅成活率高，而且污染、褐化程度輕微，這與前人相關研究結果有所差異，多數柿屬植物組培通常都采用休眠芽作為外植體，因為休眠芽細胞分裂能力強且增殖速度快。但在本試驗中休眠芽在啟動培養階段褐化死亡率極高，這可能是由于L938與其他柿品種基因型不同，需要長時間升汞滅菌。

外植體消毒徹底與否直接影響組織培養的結果：消毒時間過短，病菌存在導致外植體污染現象嚴重不利于無菌材料的獲得；消毒時間過長又會對外植體產生毒害作用，組織損傷過大從而導致褐化或者死亡，因此，適宜的消毒液種類和恰當的消毒時間對無菌苗的獲取有著至關重要的作用。常用的消毒劑有75%乙醇、升汞（HgCl2）、次氯酸鈉（NaClO）、硝酸銀、多菌靈等，在試驗中可選用一種或幾種消毒劑組合配比施用。覃換玲等[15]采用75%乙醇（10、30 s）和0.1% HgCl2（6、8、10 min）組合的方式對小果甜柿當年生帶芽嫩枝莖段進行消毒，結果表明將外植體用75%乙醇處理10 s、0.1%HgCl2消毒8 min成活率為76.67%，顯著高于其余組合處理。劉彬等[16]以小果甜柿的休眠芽為外植體，經75%乙醇消毒30 s，再使用不同濃度次氯酸鈉（0.5%、1.0%、2.0%、2.5%）消毒6 min，結果表明休眠芽經75%乙醇消毒30 s，再使用1%次氯酸鈉消毒6 min，消毒效果最佳，成活率為62.56%。在本研究中外植體最佳滅菌處理為0.1 g·L-1 HgCl2消毒40 min，較前人研究中消毒時間明顯延長，可能是由于外植體的來源不同，其攜帶的病菌種類及數量也不同，導致消毒時間延長。

基礎培養基對組培苗的生長發育影響較大，外植體不同其培養基類型也存在差異，因此選擇適宜的培養基對再生體系的建立具有重要意義。植物組織培養過程中大多會使用MS、（1/2N）MS、WPM、DKW等基本培養基。劉一鳳[17]以1/2MS、1/2MS（1/2N）和1/2DKW為基本培養基，探究不同培養基類型對小果甜柿生根的影響，結果表明小果甜柿在1/2MS（1/2N）培養基中生長健壯，生根率和根平均條數均高于其他兩種培養基。劉曉娜等[18]以上西早生柿的組培苗為外植體，比較MS、1/2MS、（1/2N）MS、DKW、WPM 5種基本培養基對其快繁增殖的影響。結果表明DKW培養基中N、P、K含量高于（1/2N）MS培養基，組培苗的生長狀態優于其余4種培養基，這與Kochanová等[19]的結果相似。李晶等[20]以君遷子的休眠芽為外植體，接種到1/2MS、（1/2N）MS、DKW基本培養基中進行初代培養，研究發現DKW培養基最適宜君遷子初代培養。筆者在本研究中以1/2MS、（1/2N）MS、1/4MS為基本培養基進行繼代培養，結果表明1/2MS為君遷子L938組培苗繼代培養的最適培養基，與前人的結論不相符，可能是試材的差異造成的。

柿屬植物普遍存在生根難的問題，筆者在本試驗中采用不同質量濃度的NAA+IBA組合進行處理，發現生根效果好的T4、T5、T6處理組為1.0 mg·L-1的NAA，而生根效果較差的T1、T2、T3處理組為0.5 mg·L-1 NAA，說明高質量濃度的NAA對L938組培苗的生根有利，但對其地上部代謝可能產生一定影響，例如葉綠素的合成等，導致葉片發黃。劉洋[21]在君遷子生根培養中發現在IBA質量濃度固定的條件下，隨NAA濃度增高葉片出現發黃現象；張彥妮等[22]在復葉槭中的研究發現，增加NAA質量濃度可有效提高莖段生根率，但質量濃度過大其長勢會下降，與本研究中結果類似。

目前，國內外學者在柿屬植物組培快繁方面開展了大量工作，也取得了一定的成果，但生產上實質性進展仍比較緩慢。分析其原因，筆者認為主要為以下兩個方面。一是柿屬植物生根難，主要表現在生根率低、生根慢。劉一鳳[17]以添加1.0 mg·L-1 IBA的1/2MS為基本培養基，對小果甜柿的組培苗進行生根誘導，生根率僅為40.5%。影響生根的因素有很多，包括品種自身遺傳特性、培養基類型、繼代次數[23]、培養條件，激素組合等。此外，還有一些生長素類似物，如4-三氟甲基吲哚、4-氯吲哚-3-乙酸[24]等。其中植物激素的種類及濃度配比是影響生根的重要因素之一。艾鵬飛等[25]及Martini等[26]的研究表明，IAA更適合生根培養，且所生根系發育健壯，有利于后期的煉苗移栽。劉聰娟等[27]采用正交的方法，研究了不同濃度的IBA+IAA組合處理對三種甜柿品種生根的影響，結果表明將外植體接種到含有1.0 mg·L-1 IBA+1.0 mg·L-1 IAA的1/2 MS培養基中，生根率可達90%。本試驗中，在1.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 IBA處理條件下，L938生根率雖然達到93.33%，相較于部分柿屬植物略高，但其生長速度仍較慢，轉移到生根培養基后約50 d才開始生根。二是組培苗移栽成活率低。周瑞金等[28]以無核君遷子生根苗為試材進行大田移栽，其移栽成活率為63%。此過程受環境因素影響特別大，同時品種間存在明顯差異，筆者課題組也進行了相關試驗，然而效果均不理想，目前該部分研究仍在持續重點進行中。

4 結 論

新梢（4月份）相較于新梢（5月份）、休眠芽成活率高，可達71.33%，為君遷子優系L938啟動培養的最適宜外植體。以生長期中的君遷子L938莖段作為外植體，經0.1 g·L-1 HgCl2處理40 min后滅菌效果最佳，外植體的成活率達35.3%，顯著優于其余處理。以株高達1.5 cm左右的君遷子組培苗為外植體，采用1/2MS培養基進行繼代培養，新梢增殖系數達到了4.4，為君遷子L938組培苗繼代培養的最適培養基。T4（1.0 mg·L-1 NAA、1.0 mg·L-1 IBA）為君遷子優系L938最適生根組合，生根率達93.33%，根長29.08 cm，根表面積19.53 cm2、根系體積1.05 cm3。

參考文獻References：

[1] 韓衛娟，刁松鋒，張悅，傅建敏，李華威，孫鵬，索玉靜，李芳東. 無核君遷子果實發育成熟過程中生理指標變化規律[J]. 浙江農林大學學報，2022，39（3）：554-561.

HAN Weijuan，DIAO Songfeng，ZHANG Yue，FU Jianmin，LI Huawei，SUN Peng，SUO Yujing，LI Fangdong. Variation patterns of physiological indices of seedless Diospyros lotus during fruit development and ripening[J]. Journal of Zhejiang A amp; F University，2022，39（3）：554-561.

[2] 艾鵬飛，羅正榮. 柿和君遷子試管苗緩慢生長法保存及其遺傳穩定性研究[J]. 園藝學報，2004，31（4）：441-446.

AI Pengfei，LUO Zhengrong. Conservation of in vitro shoots of persimmon and date plum by slow growth and genetic stability of recovered plantlets[J]. Acta Horticulturae Sinica，2004，31（4）：441-446.

[3] 艾鵬飛，羅正榮. 柿和君遷子試管苗莖尖玻璃化法超低溫保存及再生植株遺傳穩定性研究[J]. 中國農業科學，2004，37（12）：2023-2027.

AI Pengfei，LUO Zhengrong. Cryopreservation of in vitro shoot-tips of persimmon and date plum by vitrification and genetic stability of regenerated plantlets[J]. Scientia Agricultura Sinica，2004，37（12）：2023-2027.

[4] 龍海濤. ‘太秋’甜柿不同砧木類型初期篩選及抗寒性評價[D]. 楊凌：西北農林科技大學，2023.

LONG Haitao. Initial screening of different rootstock types and evaluation of cold resistance in sweet persimmo ‘Taishu’[D]. Yangling：Northwest A amp; F University，2023.

[5] LI X H，JIANG Z Y，SHEN Y Y，LI F H，YU X Y，QU S C. In vitro regeneration and Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation of D. lotus （Diospyros lotus L.）[J]. Scientia Horticulturae，2018，236：229-237.

[6] 呂中一，關長飛，李家艷，丁瑜，范芝蕊，楊勇. 柿屬植物組織培養技術研究進展[J]. 北方園藝，2023（12）：129-137.

Lü Zhongyi，GUAN Changfei，LI Jiayan，DING Yu，FAN Zhirui，YANG Yong. Research progress on tissue culture of Diospyros[J]. Northern Horticulture，2023（12）：129-137.

[7] LIU Y，LU X Y，ZHANG H，LI S Z，LI Z. Establishment of a highly efficient in vitro propagation system of Diospyros lotus[J]. Forests，2023，14（2）：366.

[8] 呂中一，聞家樂，劉澤遠，張馨予，胡碧春，范芝蕊，關長飛，楊勇. 君遷子組培體系的建立及優化[J/OL]. 西北農林科技大學學報（自然科學版），2024，52（5）：1-8. （2023-11-01）. https：//link.cnki.net/urlid/61.1390.S.20231031.1639.010.

Lü Zhongyi，WEN Jiale，LIU Zeyuan，ZHANG Xinyu，HU Bichun，FAN Zhirui，GUAN Changfei，YANG Yong. Establishment and optimization of a tissue culture and rapid propagation system of Diospyros lotus L.[J/OL]. Journal of Northwest A amp; F University （Natural Science Edition），2024，52（5）：1-8. （2023-11-01）. https：//link.cnki.net/urlid/61.1390.S.20231031.1639.010.

[9] 許智宏，張憲省，蘇英華，胡玉欣，徐麟，王佳偉. 植物細胞全能性和再生[J]. 中國科學：生命科學，2019，49（10）：1282-1300.

XU Zhihong，ZHANG Xiansheng，SU Yinghua，HU Yuxin，XU Lin，WANG Jiawei. Plant cell totipotency and regeneration[J]. Scientia Sinica：Vitae，2019，49（10）：1282-1300.

[10] 馮曉暉，閆學彤，鄭珂媛，周強，張偉中，王權勇，朱木蘭. 富含紫杉烷類紅豆杉的離體培養[J]. 植物學報，2023，58（6）：917-925.

FENG Xiaohui，YAN Xuetong，ZHENG Keyuan，ZHOU Qiang，ZHANG Weizhong，WANG Quanyong，ZHU Mulan. In vitro culture of Taxus rich in taxanes[J]. Chinese Bulletin of Botany，2023，58（6）：917-925.

[11] BANSAL Y，MUJIB A，MAMGAIN J，DEWIR Y H，RIHAN H Z. Phytochemical composition and detection of novel bioactives in anther callus of Catharanthus roseus L.[J]. Plants，2023，12（11）：2186.

[12] 薛婉鈺，劉娜，苑鑫，張婷婷，曹云娥，陳書霞. 黃瓜胚性愈傷組織的誘導保存和再生[J/OL]. 西北農林科技大學學報（自然科學版），2024，52（7）：1-7. （2024-01-05）. https：//doi.org/10.13207/j.cnki.jnwafu.2024.07.011.

XUE Wanyu，LIU Na，YUAN Xin，ZHANG Tingting，CAO Yun’e，CHEN Shuxia. Induction and preservation of cucumber embryogenic callus[J/OL]. Journal of Northwest A amp; F University （Natural Science Edition），2024，52（7）：1-7. （2024-01-05）. https：//doi.org/10.13207/j.cnki.jnwafu.2024.07.011.

[13] NAKAJIMA I，ITO A，MORIYA S，SAITO T，MORIGUCHI T，YAMAMOTO T. Adventitious shoot regeneration in cotyledons from Japanese pear and related species[J]. In Vitro Cellular amp; Developmental Biology-Plant，2012，48（4）：396-402.

[14] 謝啟鑫，黃美連，吳曉萍，莊東紅. 君遷子葉片培養再生植株的研究[J]. 中國農業科學，2008，41（2）：607-612.

XIE Qixin，HUANG Meilian，WU Xiaoping，ZHUANG Donghong. Plant regeneration from leaves of date plum （Diospyros lotus L.）[J]. Scientia Agricultura Sinica，2008，41（2）：607-612.

[15] 覃換玲，高營營，黃麗輝，陳淑媛，黃天琨，李賢高，周曉璇，關長飛，楊勇. 小果甜柿組織培養快繁技術[J]. 果樹學報，2023，40（9）：1992-2000.

QIN Huanling，GAO Yingying，HUANG Lihui，CHEN Shuyuan，HUANG Tiankun，LI Xiangao，ZHOU Xiaoxuan，GUAN Changfei，YANG Yong. Study on tissue culture and rapid propagation of Xiaoguo Tianshi as a sweet persimmon rootstock[J]. Journal of Fruit Science，2023，40（9）：1992-2000.

[16] 劉彬，杜曉云，陳文興，郭大勇，徐莉清，張青林，羅正榮. 廣親和砧木小果甜柿離體快繁技術建立及優化[J]. 果樹學報，2023，40（9）：1980-1991.

LIU Bin，DU Xiaoyun，CHEN Wenxing，GUO Dayong，XU Liqing，ZHANG Qinglin，LUO Zhengrong. Establishment and optimization of in vitro rapid propagation technology of Xiaoguo Tianshi as compatible rootstock for persimmon[J]. Journal of Fruit Science，2023，40（9）：1980-1991.

[17] 劉一鳳. 完全甜柿砧木小果甜柿繁殖技術研究[D]. 武漢：華中農業大學，2017.

LIU Yifeng. Establishment of propagation technology for PCNA rootstock Xiaoguo Tianshi[D]. Wuhan：Huazhong Agricultural University，2017.

[18] 劉曉娜，馬俊蓮，張子德，宋春麗. 上西早生甜柿離體快繁技術研究[J]. 河北農業大學學報，2004，27（1）：61-63.

LIU Xiaona，MA Junlian，ZHANG Zide，SONG Chunli. Study on micropropagation in vitro of Uenishiwase persimmon[J]. Journal of Agricultural University of Hebei，2004，27（1）：61-63.

[19] KOCHANOVá Z，ONUS N，BRINDZA J. Adventitious shoot regeneration from dormant buds of persimmon （Diospyros kaki Thunb.） cv. Hachiya[J]. Journal of Agrobiology，2011，28（2）：113-118.

[20] 李晶，羅玉潔，張青林，羅正榮，劉繼紅. 君遷子休眠芽及葉片離體培養體系優化及植株再生[J]. 華中農業大學學報，2016，35（4）：14-19.

LI Jing，LUO Yujie，ZHANG Qinglin，LUO Zhengrong，LIU Jihong. In vitro culture system optimization and regeneration of date plum （Diospyros lotus Linn.） dormant buds and leaves[J]. Journal of Huazhong Agricultural University，2016，35（4）：14-19.

[21] 劉洋. 君遷子組織培養再生體系的建立及遺傳轉化研究[D]. 長沙：中南林業科技大學，2022.

LIU Yang. Establishment of Diospyros lotus L. tissue culture regeneration system and genetic transformation research[D]. Changsha：Central South University of Forestry amp; Technology，2022.

[22] 張彥妮，董亞茹，卓麗環，張遠東. 激素對復葉槭莖段和葉片愈傷組織誘導及再生的影響[J]. 林業科學研究，2012，25（4）：516-520.

ZHANG Yanni，DONG Yaru，ZHUO Lihuan，ZHANG Yuandong. Effect of plant hormones on callus induction and regeneration of stem segment and leaf from Acer negundo[J]. Forest Research，2012，25（4）：516-520.

[23] ZHANG X，LIU J R，JIA W J，ZHAO J H，XU R Q. Thymol modulates in vitro plant regeneration and gene expression in sesame[J]. In Vitro Cellular amp; Developmental Biology-Plant，2022，58（2）：240-255.

[24] PINCELLI-SOUZA R P，TANG Q，MILLER B M，COHEN J D. Horticultural potential of chemical biology to improve adventitious rooting[J]. Horticulture Advances，2024，2（1）：12.

[25] 艾鵬飛，羅正榮. 甜柿試管苗生根條件的研究[J]. 華中農業大學學報，2002，21（2）：154-157.

AI Pengfei，LUO Zhengrong. Studies on rooting conditions of nonastringent persimmon in vitro[J]. Journal of Huazhong Agricultural，2002，21（2）：154-157.

[26] MARTINI A N，VLACHOU G，PAPAFOTIOU M. Effect of explant origin and medium plant growth regulators on in vitro shoot proliferation and rooting of Salvia tomentosa，a native sage of the northeastern Mediterranean Basin[J]. Agronomy，2022，12（8）：1889.

[27] 劉聰娟，唐霞，劉愷，馬俊蓮. 甜柿組培苗生根條件的研究[J]. 河北林果研究，2006，21（2）：185-188.

LIU Congjuan，TANG Xia，LIU Kai，MA Junlian. Studies on rooting conditions of nonastringent persimmon in vitro[J]. Hebei Journal of Forestry and Orchard Research，2006，21（2）：185-188.

[28] 周瑞金，張曉娜，扈惠靈，李桂榮，宋如慧. 無核君遷子離體葉片的植株再生[J]. 北方園藝，2016（22）：104-106.

ZHOU Ruijin，ZHANG Xiaona，HU Huiling，LI Guirong，SONG Ruhui. Plant regeneration from leaves of seedless date plum （Diospyros lotus L.）[J]. Northern Horticulture，2016（22）：104-106.

基金項目：河北省自然科學基金項目（C2022204197）；河北省高等學校科學技術研究項目（QN2021075）；河北農業大學引進人才科研專項（YJ201828）

作者簡介：檀蘇紅，女，在讀碩士研究生，研究方向為果樹栽培與生理。E-mail：2604656729@qq.com

*通信作者Author for correspondence. E-mail：sygjj@hebau.edu.cn；E-mail：wangwj65@126.com