miR-92a在心力衰竭中的表達(dá)及與心肌血管生成相關(guān)因子的關(guān)系

摘要 目的：探討DNA甲基化編碼重編程指標(biāo)微小核糖核酸-92a（miR-92a）在心力衰竭中的表達(dá)及與心肌血管生成相關(guān)因子的關(guān)系。方法：選取2022年1月—2023年1月于本院就診的心力衰竭病人100例作為觀察組，另選取同期于我院進(jìn)行健康體檢者100名作為對(duì)照組。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)miR-92a的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清心肌血管生成相關(guān)因子水平，采用Pearson法進(jìn)行相關(guān)分析，采用Logistic回歸分析進(jìn)行多因素分析，受試者工作特征曲線（ROC）評(píng)估預(yù)測(cè)價(jià)值。結(jié)果：與對(duì)照組相比，觀察組血清miR-92a的表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與對(duì)照組相比，觀察組血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、血管緊張素-2（Ang-2）含量升高（P＜0.05），血管緊張素-1（Ang-1）含量降低（P＜0.05）；miR-92a與VEGF、Ang-2呈正相關(guān)（r值分別為0.661，0.797，P＜0.001），與Ang-1呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.297，P＜0.001）；Logistic回歸分析結(jié)果表明，miR-92a、VEGF、Ang-1、Ang-2為心力衰竭發(fā)生的影響因素（P＜0.05）；miR-92a、VEGF、Ang-1、Ang-2預(yù)測(cè)心力衰竭的曲線下面積分別為0.644，0.730，0.667，0.677，聯(lián)合預(yù)測(cè)的曲線下面積為0.829。結(jié)論：miR-92a在心力衰竭中表達(dá)升高，與心肌血管生成相關(guān)因子具有相關(guān)性，miR-92a及心肌血管生成相關(guān)因子的檢測(cè)具有較高的診斷價(jià)值，且聯(lián)合檢測(cè)價(jià)值更高，可用于檢測(cè)心力衰竭。

關(guān)鍵詞 心力衰竭；DNA甲基化編碼重編程；微小核糖核酸-92a；心肌血管生成相關(guān)因子；相關(guān)性

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.13.018

心力衰竭是各種心臟疾病的終末階段，具有高住院率及高死亡率的特點(diǎn)，為家庭及社會(huì)帶來較大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［1-2］。防止和延緩心力衰竭的發(fā)生、發(fā)展，緩解病人的臨床癥狀，提高生活質(zhì)量，改善長(zhǎng)期預(yù)后，降低住院率及病死率至關(guān)重要［3］。研究表明，表觀遺傳學(xué)機(jī)制在心臟病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用［4］。表觀遺傳學(xué)主要包括組蛋白修飾、基因組印記、母體效應(yīng)、DNA甲基化及染色體失活等，其中DNA甲基化編碼重編程指標(biāo)微小核糖核酸-92a（miR-92a）是目前表觀遺傳學(xué)研究較為深入的一個(gè)類型，研究發(fā)現(xiàn)心臟的miR-92a可能參與了心力衰竭的發(fā)生及進(jìn)展［5］。心力衰竭因心室泵功能異常，導(dǎo)致血流動(dòng)力學(xué)障礙，從而使心肌供血降低，進(jìn)而造成全身各臟器組織血流灌注不足，最終加重疾病進(jìn)程［6］。研究表明，血管再生可減少冬眠心肌及頓抑心肌的數(shù)量，有利于缺血心肌的再灌注，從而抑制心肌細(xì)胞凋亡，減輕心室重塑，最終達(dá)到保護(hù)心功能、延緩心力衰竭的目的［7］。miR-92a在心力衰竭中的作用機(jī)制尚未明確，與心肌血管生成是否有關(guān)也尚不清楚。因此，本研究就miR-92a在心力衰竭中的表達(dá)及與心肌血管生成相關(guān)因子的關(guān)系進(jìn)行研究探討，為臨床防治心力衰竭提供思路及理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2022年1月—2023年1月于本院就診的心力衰竭病人100例作為觀察組，另選取同期于我院進(jìn)行健康體檢者100名作為對(duì)照組。觀察組，男52例，女48例；年齡23～70（46.13±23.35）歲；收縮壓（129.62±8.54）mmHg，舒張壓（80.91±5.27）mmHg；病程2～11（7.23±3.51）個(gè)月；心力衰竭Ⅰ級(jí)21例，Ⅱ級(jí)28例，Ⅲ級(jí)35例，Ⅳ級(jí)16例。對(duì)照組，男49名，女51名；年齡為25～72（48.41±23.42）歲；收縮壓（128.33±8.41）mmHg，舒張壓（81.68±5.43）mmHg。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有參與者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：確診心力衰竭者；年齡＞18歲且生命體征平穩(wěn)；臨床資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有先天性心臟病、甲狀腺功能亢進(jìn)、肺心病者；合并急性心腦血管疾病者；合并惡性腫瘤及其他嚴(yán)重疾病者；合并自身免疫性疾病、嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病、感染性疾病者；存在嚴(yán)重意識(shí)障礙或精神病史者；妊娠及哺乳期婦女。

1.3 標(biāo)本采集

采集納入研究者空腹靜脈血5 mL，2 000 r/min離心10 min，取上清液置于－20 ℃的冰箱密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）

取待測(cè)血清，檢測(cè)DNA甲基化編碼重編程重要標(biāo)志基因miR-92a相對(duì)表達(dá)水平。檢測(cè)步驟為：提取總RNA→總RNA純度及完整性驗(yàn)證→逆轉(zhuǎn)錄cDNA→RT-PCR檢測(cè)，檢測(cè)過程中所用試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，以同一樣本中的U6的Ct值作為內(nèi)參，采用2－ΔΔCt計(jì)算其基因相對(duì)表達(dá)量，miR-92a正向引物為：5′-CCAGCCAAAGTAGGAAGGAG-3′，反向引物為5′-CCGGAGTTCCTCAGACAAGAG-3′；U6正向引物為：5'-TGCGGGTGCTCGCTTCGGCAGC-3′，反向引物為5′-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3′。

1.5 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

取待測(cè)血清，嚴(yán)格按照試劑盒說明書檢測(cè)心肌血管生成相關(guān)因子血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、血管緊張素-1（angiotensin-1，Ang-1）、血管緊張素-2（angiotensin-2，Ang-2）水平。首先進(jìn)行繪制樣本布局表、配置試劑標(biāo)準(zhǔn)品、清洗孔板，按照標(biāo)記，加入50 μL標(biāo)準(zhǔn)品工作液、40 μL樣品工作液、10 μL的待測(cè)樣品工作液，輕晃混勻，并用封板膜封板后，37 ℃恒溫孵箱孵育30 min，PBS洗滌5次，加入50 μL酶標(biāo)試劑，37 ℃恒溫孵箱孵育30 min，PBS洗滌5次后，向每孔加50 μL顯色劑A、50 μL顯色劑B，輕輕震蕩混勻，37 ℃避光顯色10 min后，每孔加入50 μL終止液終止反應(yīng)，以空白孔調(diào)零后，立即用酶標(biāo)儀在450 nm相對(duì)630 nm波長(zhǎng)處，測(cè)定每孔吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算VEGF、Ang-1、Ang-2的含量。過程中用到的試劑盒均購(gòu)自上海西唐生物科技有限公司。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用GraphPad Prism 8.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)。定性資料以例數(shù)、百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。臨床定量資料符合正態(tài)分布及方差齊性，各組比較采用單因素方差分析，采用Pearson法進(jìn)行相關(guān)分析，采用Logistic回歸分析進(jìn)行多因素分析，受試者工作特征曲線（ROC）評(píng)估檢測(cè)價(jià)值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組miR-92a檢測(cè)結(jié)果

與對(duì)照組相比，觀察組血清中miR-92a的表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。詳見圖1。

2.2 兩組血清VEGF、Ang-2、Ang-1水平比較

與對(duì)照組相比，觀察組血清VEGF、Ang-2水平升高（P＜0.05），血清Ang-1水平降低（P＜0.05）。詳見表1。

2.3 miR-92a與心肌血管生成相關(guān)因子的相關(guān)性

miR-92a與VEGF、Ang-2呈正相關(guān)（r值分別為0.661，0.797，P＜0.001），與Ang-1呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.297，P＜0.001）。詳見圖2。

2.4 多因素Logistic回歸分析

Logistic回歸分析結(jié)果表明，miR-92a、VEGF、Ang-1、Ang-2為心力衰竭發(fā)生的影響因素（P＜0.05）。詳見表2。

3 討 論

心力衰竭是一種多病因?qū)е碌男墓δ懿蝗膹?fù)雜臨床綜合征，隨著社會(huì)的不斷發(fā)展及老齡化的加劇，我國(guó)心力衰竭病人人數(shù)與日俱增，據(jù)調(diào)查顯示，心力衰竭患病人數(shù)已達(dá)400萬(wàn)例，預(yù)計(jì)到2030年其患病率將增加46%，這使得心力衰竭已經(jīng)成為繼惡性腫瘤后第2大威脅人類生命的重大公共衛(wèi)生問題［8］。雖然隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展及各種治療方案的出臺(tái)及完善，心力衰竭病人生存期得到了一定程度上的延長(zhǎng)，但目前仍無(wú)治愈的方法［9］。因此，積極探索心力衰竭的發(fā)病機(jī)制及致病因素，尋找早期診斷手段以及治療的新靶點(diǎn)是目前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的重中之重，這對(duì)于心力衰竭的治療、降低病死率、改善預(yù)后等都具有積極而深遠(yuǎn)的意義［10］。所以，本研究就miR-92a在心力衰竭中的表達(dá)及其與心肌血管生成相關(guān)因子的關(guān)系進(jìn)行研究探討，以期為臨床提供參考。

表觀遺傳學(xué)是遺傳學(xué)的分支學(xué)科，與傳統(tǒng)的遺傳學(xué)不同，其是在基因核苷酸序列不發(fā)生改變的情況下調(diào)控可遺傳基因的表達(dá)，而傳統(tǒng)遺傳學(xué)恰恰與之相反，是基因核苷酸序列或堿基對(duì)改變而導(dǎo)致的遺傳基因水平的變化，而近年來研究發(fā)現(xiàn)，心力衰竭的發(fā)生與表觀遺傳學(xué)關(guān)系密切［11］。DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)中最重要的修飾方式，也是表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，其具有重要的生物學(xué)意義，在調(diào)控基因表達(dá)、參與細(xì)胞分化、維護(hù)染色體完整及促進(jìn)組織發(fā)育等方面發(fā)揮至關(guān)重要的作用［12］。研究發(fā)現(xiàn)，某些與心血管疾病相關(guān)基因的DNA甲基化編碼重編程的改變可能參與心力衰竭的發(fā)生、發(fā)展，這一過程在生物發(fā)育的某個(gè)階段和細(xì)胞分化的某種狀態(tài)下可以逆轉(zhuǎn)，故這一性質(zhì)成了治療的新方向及研究的關(guān)鍵，得到了越來越多的關(guān)注及重視［13］。miR-92a是與心血管疾病關(guān)系密切的基因之一，其過表達(dá)可促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡，從而造成心室肌萎縮和心室重塑，進(jìn)而促進(jìn)心血管疾病的發(fā)生，最終引發(fā)心力衰竭及進(jìn)展，因此本研究選擇其作為反映心臟DNA甲基化編碼重編程的指標(biāo)［14］。目前，臨床治療心力衰竭最重要的策略是阻斷心肌重塑、逆轉(zhuǎn)心室重塑，而血管再生與心室重塑密切相關(guān)，心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)、存活及心臟的舒縮功能均依賴于血管的生成，由此可見，促進(jìn)血管再生有望成為治療心力衰竭的重要靶點(diǎn)［15］。VEGF、Ang-1、Ang-2是重要的血管生成相關(guān)因子，VEGF是體內(nèi)作用最強(qiáng)的促血管生成因子，當(dāng)心力衰竭出現(xiàn)時(shí)，心肌處于缺血、缺氧狀態(tài)，VEGF受到刺激大量分泌，從而使原先存在的血管內(nèi)皮代償形成新的毛細(xì)血管，以增加心肌供血；Ang-1、Ang-2作為血管生成素信號(hào)系統(tǒng)的關(guān)鍵成員，其作用僅次于VEGF，Ang-1可活化內(nèi)皮細(xì)胞形成完成的血管壁，從而維持血管的穩(wěn)定，Ang-2則可在缺血、缺氧刺激下促進(jìn)血管的新生和重塑［16-18］。但DNA甲基化編碼重編程與血管生成相關(guān)因子是否有關(guān)，目前還尚不清楚，有待臨床的進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，觀察組血清miR-92a的相對(duì)表達(dá)水平明顯升高，血清VEGF、Ang-2含量明顯升高，Ang-1含量明顯降低；DNA甲基化編碼重編程指標(biāo)miR-92a與VEGF、Ang-2呈正相關(guān)，與Ang-1呈負(fù)相關(guān)；Logistic回歸分析結(jié)果表明，miR-92a、VEGF、Ang-1、Ang-2為心力衰竭發(fā)生的影響因素；miR-92a、VEGF、Ang-1、Ang-2對(duì)心力衰竭預(yù)測(cè)價(jià)值的AUC分別為0.644，0.730，0.667，0.677，聯(lián)合預(yù)測(cè)的AUC為0.829。朱琳琳等［19］研究表明，心臟DNA甲基化編碼重編程標(biāo)志基因miR-92a的表達(dá)在缺血性心力衰竭中顯著升高，是缺血性心力衰竭發(fā)生、發(fā)展的危險(xiǎn)因素；申達(dá)甫等［20］研究發(fā)現(xiàn)，心力衰竭病人血清中VEGF含量明顯高于健康人，其可獨(dú)立用于慢性心力衰竭的診斷，且診斷效能良好；楊東等［21］研究發(fā)現(xiàn)，Ang-2水平隨著心力衰竭分級(jí)的升高而升高，是診斷心力衰竭合并心房顫動(dòng)的有效指標(biāo)，這與本研究結(jié)果類似。這說明心力衰竭病人中存在心臟DNA甲基化編碼重編程情況，且其與心肌血管生成相關(guān)因子具有一定關(guān)系，DNA甲基化編碼重編程及心肌血管生成相關(guān)因子是心力衰竭發(fā)生、發(fā)展的危險(xiǎn)因素，其在心力衰竭的診斷、治療監(jiān)測(cè)、療效判斷、預(yù)后評(píng)估中有著極為重要的意義，而對(duì)其進(jìn)行綜合的分析及判斷，可以更全面地了解病人的疾病程度，從而制定出更有效、更具有針對(duì)性的治療方案，改善病人生活質(zhì)量，提高病人預(yù)后。

綜上所述，miR-92a在心力衰竭中表達(dá)升高，與心肌血管生成相關(guān)因子具有相關(guān)性，miR-92a及心肌血管生成相關(guān)因子的檢測(cè)具有較高的診斷價(jià)值，且聯(lián)合檢測(cè)價(jià)值更高，可用于檢測(cè)心力衰竭。但本研究研究仍然存在一定局限性，本次研究對(duì)心力衰竭其他指標(biāo)沒有進(jìn)行探討，在以后的研究中會(huì)逐步完善，以期為臨床提供更全面的診療依據(jù)。

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（收稿日期：2023-04-25）

（本文編輯鄒麗）

基金項(xiàng)目 2022年度湖北省自然科學(xué)基金創(chuàng)新群體項(xiàng)目（No.2022CAF036）

通訊作者 王治校，E-mail：409455912@qq.com

引用信息 龔蕾，王治校.miR-92a在心力衰竭中的表達(dá)及與心肌血管生成相關(guān)因子的關(guān)系［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（13）：2402-2405.