熒光定量聚合酶鏈式反應聯合顯色培養法在孕晚期孕婦B群鏈球菌篩查中的價值

【摘要】目的 分析熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）聯合顯色培養法在孕晚期孕婦B群鏈球菌篩查中的價值，為臨床提供參考。方法 選取2022年10月至2024年3月陽光融和醫院孕35～37周行B群鏈球菌篩查的1 000例孕婦進行回顧性分析，分別采用B群鏈球菌顯色培養法、qRT-PCR法對孕婦肛拭子或陰拭子B群鏈球菌進行檢測。以肉湯增菌培養法為金標準，比較B群鏈球菌顯色培養法、qRT-PCR法檢測B群鏈球菌的一致性；評估B群鏈球菌顯色培養法、qRT-PCR法對B群鏈球菌的檢測效能；以B群鏈球菌顯色培養法、qRT-PCR法任一檢測方法陽性作為聯合檢測陽性，評估聯合檢測與肉湯增菌培養法對B群鏈球菌的檢測一致性及檢測效能。結果 1 000例標本經金標準檢出陽性94例，陰性906例，陽性檢出率為9.40%。B群鏈球菌顯色培養法檢出陽性89例，陰性911例，陽性檢出率為8.90%，與金標準檢測一致性中等（Kappa值=0.681，Plt;0.05）；qRT-PCR法檢出陽性98例，陰性902例，陽性檢出率為9.80%，與金標準一致性較好（Kappa值=0.839，Plt;0.05）；聯合檢測陽性148例，陰性為852例，陽性檢出率為14.80%，與金標準檢測一致性較好（Kappa值=0.881，Plt;0.05）。與B群鏈球菌顯色培養法相比，qRT-PCR法檢測靈敏度、準確率均較高，漏診率較低，聯合檢測靈敏度較高，特異度、漏診率均較低（均Plt;0.05）；與qRT-PCR法相比，聯合檢測靈敏度較高，特異度、漏診率均較低（均Plt;0.05），準確率比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05）。結論 B群鏈球菌顯色培養法、qRT-PCR法聯合檢測可提高檢測敏感度，提升B群鏈球菌陽性檢出能力，可為臨床診斷提供參考。

【關鍵詞】熒光定量聚合酶鏈式反應；顯色培養法；肉湯增菌培養法；B群鏈球菌

【中圖分類號】R446 【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-2665.2025.01.0004.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2025.01.002

B群鏈球菌是一種革蘭氏陽性菌，約25%的成年健康女性為B群鏈球菌攜帶者，可通過垂直傳播感染新生兒，是新生兒發生敗血癥的重要原因之一，死亡率較高，且治療后也有較大概率發生神經后遺癥[1-2]。因此，圍產期B群鏈球菌篩查并預防性給藥至關重要。肉湯增菌培養法作為圍產期B群鏈球菌檢測的金標準，其敏感度和特異度均較高。但肉湯增菌培養法的結果容易受送檢時間、保存條件、環境因素等的影響，且培養需要較長時間，從而限制了該法在快速診斷中的應用。B群鏈球菌顯色培養法是通過B群鏈球菌代謝產物特征性顯色進行篩查的方法，但其對不產溶血素的菌落無顯色反應，有漏診風險，檢測效能有待進一步提高[3-4]。實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）測定B群鏈球菌具有較高的敏感度與特異度，且所需時間短[5]。本研究對1 000例孕晚期孕婦使用兩種方法聯合測定，評估其對B群鏈球菌的檢出情況，進而判斷聯合檢測的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2022年10月至2024年3月陽光融和醫院孕35～37周行B群鏈球菌篩查的1 000例孕婦進行回顧性分析。孕婦年齡21～45歲，平均年齡（32.36±3.27）歲；孕周35～37周，平均孕周（35.92±0.18）周。排除同一患者的重復樣本、多胎病例。本研究經陽光融和醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 患者標本采集及檢測方式

1.2.1 標本采集 孕35～37周的圍產期孕婦經產科醫師采集陰拭子（872例）或肛拭子（128例）標本，每例標本平均分為3份，一份用于顯色肉湯增菌培養法，一份用于B群鏈球菌顯色培養檢測，另一份用于B群鏈球菌qRT-PCR檢測，保存后送檢。

1.2.2 肉湯增菌培養法 取一份陰拭子或肛拭子標本，接種于B群鏈球菌增菌肉湯培養液中，于5% CO2培養箱內培養（24 h），再轉種于哥倫比亞培養基，待細菌生長后，使用全自動微生物質譜檢測系統[安圖實驗儀器（鄭州）有限公司，豫械注準20182400196，型號：Autof ms1000]，對生長的細菌進行鑒定。如待鑒定菌群中有B群溶血鏈球菌則報告陽性。

1.2.3 B群鏈球菌顯色培養法 取一份陰拭子或肛拭子標本，經氯化鈉注射液懸浮（50 μL），接種于B群鏈球菌顯色培養板中，避光孵育24 h。如果培養基顏色變為淺粉色至紅色，則判定為B群溶血鏈球菌陽性。

1.2.4 qRT-PCR法 使用qRT-PCR對標本中B群鏈球菌進行檢測，檢測試劑盒采購西安天隆科技有限公司，檢測步驟及結果判讀嚴格按照說明書進行。

1.3 觀察指標 ⑴比較兩種篩查方法檢測結果及一致性。經B群鏈球菌顯色培養法、qRT-PCR檢測陽性菌株分別作為各自檢測方法陽性，通過與金標準對比，分析評估兩種方式檢測敏感度與特異度。⑵分析兩者聯合檢測結果及與金標準檢測一致性。通過與金標準對比分析聯合檢測敏感度與特異度。⑶分析B群鏈球菌顯色培養法、qRT-PCR法及聯合檢測效能。靈敏度=[真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）]×100%；特異度=[真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）]×100%；準確率=[（真陽性例數+真陰性例數）/總例數]×100%；漏診率=[假陰性例數/（真陽性例數+假陰性例數）]×100%。

1.4 統計學分析 采用SPSS 25.0統計學軟件對數據進行分析。計數資料以例或百分率（%）表示，采用χ2檢驗；一致性分析采用Kappa檢驗，Kappa值為0.76～1.00說明一致性較好；Kappa值≥0.41但lt;0.76說明一致性中等；Kappa值lt;0.41說明一致性較差。以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種篩查方法檢測結果及一致性分析 1 000例標本經金標準檢出陽性94例，陰性906例，陽性檢出率為9.40%。B群鏈球菌顯色培養法檢出陽性89例，陰性911例，陽性檢出率為8.90%，與金標準檢測一致性中等（Kappa值=0.681，Plt;0.05）；qRT-PCR法檢出陽性98例，陰性902例，陽性檢出率為9.80%，與金標準檢測一致性較好（Kappa值=0.839，Plt;0.05），見表1。

2.2 B群鏈球菌顯色培養法及qRT-PCR法聯合檢測與金標準檢測一致性 聯合檢測檢出陽性148例，陰性852例，陽性檢出率為14.80%，與金標準檢測一致性較好（Kappa值=0.881，Plt;0.05），見表2。

2.3 B群鏈球菌顯色培養法、qRT-PCR法及聯合檢測效能分析 與B群鏈球菌顯色培養法相比，qRT-PCR法檢測靈敏度、準確率均較高，漏診率較低，聯合檢測靈敏度較高，特異度、漏診率均較低，差異均有統計學意義（均Plt;0.05）；與qRT-PCR法相比，聯合檢測靈敏度較高，特異度、漏診率均較低，差異均有統計學意義（均Plt;0.05）；準確率比較，差異無統計學意義（χ2值=0.486，Pgt;0.05）。見表3。

3 討論

B群鏈球菌屬于條件致病菌，可引發新生兒肺炎、敗血癥等，治療后也可能發生神經系統后遺癥，嚴重影響患兒生長發育[6-7]。因此，對孕婦進行B群鏈球菌篩查并進行預防性用藥，對降低分娩過程中B群鏈球菌感染風險，預防母嬰產后感染有重要臨床意義。

B群鏈球菌檢測金標準為肉湯培養基培養。B群鏈球菌顯色培養法是以黃色素產生法為基礎的酶反應顯色，為B群鏈球菌提供營養成分與生長因子，并抗雜菌生長。B群鏈球菌可在此培養基中生成紅色菌落，而其他細菌與酵母菌在該培養基中不生長，或不產生菌落[8]。本研究結果顯示，金標準檢測1 000例陰拭子或肛拭子標本中陽性94例，陰性906例，陽性率為9.40%。而B群鏈球菌顯色培養法檢測出陽性89例，陰性911例，陽性檢出率為8.90%，與金標準檢測一致性為中等，靈敏度為69.14%，特異度為97.35%，檢測靈敏度相對較低。分析原因為，B群鏈球菌顯色培養法對不產溶血素的菌落無顯色反應，對于不產溶血素的菌落無法檢出[9]。宋建梅等[10]研究顯示，B群鏈球菌顯色培養基檢測孕產婦B群鏈球菌感染陽性率為23.80%，高于本研究結果，可能與納入的患者差異有關。

qRT-PCR利用基因探針技術，能夠特異性地檢測B群鏈球菌的DNA序列，該方法檢測所需時間較短、敏感度較高[11]。本研究qRT-PCR法檢出陽性98例，陰性902例，陽性檢出率為9.80%。陶婭琳等[12]研究顯示，qRT-PCR法對圍產期孕婦B群鏈球菌檢出陽性率為7.17%，與本研究結果相近。qRT-PCR法檢測真陽性為82例，有16例誤診，存在12例漏診，漏診的原因可能為病毒菌落數過低，不易被檢出。在B群鏈球菌的檢測中，漏診的危險性要高于誤診，因此，提升B群鏈球菌的檢測敏感度是研究重點[13]。本研究結果顯示，聯合檢測的陽性檢出率較高，與金標準的一致性較高，檢測靈敏度升高，但檢測特異度低于B群鏈球菌顯色培養法、qRT-PCR法。因此，臨床應根據實際需要選擇合適的檢測方式，滿足檢測需要。

綜上所述，B群鏈球菌顯色培養法、qRT-PCR法聯合檢測可提高檢測靈敏度，可為臨床提供參考。

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