大豆卵磷脂和低密度脂蛋白在山羊精液冷凍保存中的應用研究進展

摘要" 精液冷凍保存技術是現代畜牧業中用于遺傳資源保護和繁殖管理的重要手段。本文從山羊精液冷凍保存技術及其保存過程中的冷凍損傷和冷凍保護劑的應用，大豆卵磷脂（SL）和低密度脂蛋白（LDL）在精液冷凍保存中的作用機理及應用，以及兩者的聯合應用等方面，探討了SL和LDL在山羊精液冷凍保存中的研究進展。山羊精液冷凍保存技術是指通過構建極低溫環境使山羊精液中的精子生理活動處于靜止狀態。精液在保存過程中受低溫環境的影響導致細胞受損，活性氧積累導致精子質量下降，而冷凍保護劑的使用如甘油和卵黃可以減少精液冷凍保存過程中冰晶的形成，保護精子細胞膜免受冰晶的刺破。SL作為一種天然磷脂，在山羊精液冷凍保存過程中，能夠減少冰晶形成，減輕活性氧對精子的傷害，從而降低對精子的損傷；LDL作為一種存在于雞蛋黃中的脂蛋白，可與精液中的有害陽離子肽競爭性結合，保護精子免受有害蛋白的損傷；兩者具有協同效應，LDL增強了SL的冷凍保護作用，而SL提供額外的抗氧化保護，共同提高精子在冷凍和解凍過程中的存活率，提高冷凍保護劑的整體效果。本文為山羊精液冷凍保存提供思路和參考。

關鍵詞" 大豆卵磷脂；低密度脂蛋白；精液冷凍保存；山羊；精液質量

中圖分類號" S827.3" " " "文獻標識碼" A" " " "文章編號" 1007-7731（2025）02-0051-07

DOI號" 10.16377/j.cnki.issn1007-7731.2025.02.010

Advances in the application of soy lecithin and low-density lipoprotein in the cryopreservation of goat semen

MENG Kangcheng" " WANG Ru" " PANG Rui" " CHENG Xiao" " REN Chunhuan

（College of Animal Science and Technology， Anhui Agricultural University， Hefei 230036， China）

Abstract" Semen cryopreservation technology is an important means for the protection of genetic resources and breeding management in modern animal husbandry. In this paper， the research progress of soy lecithin （SL） and low- density lipoprotein （LDL） in cryopreservation of goat semen was discussed from the aspects of cryopreservation technology， cryopreservation damage in semen cryopreservation， and application of cryoprotectants， the mechanism and application of SL and LDL in cryopreservation of semen， and their combined application. The cryopreservation technology of goat semen is to make the physiological activity of sperm in goat semen static by constructing an extremely low temperature environment. Semen is affected by low temperature environment during storage， resulting in cell damage and accumulation of reactive oxygen species leading to sperm quality decline. The use of cryopprotectants such as glycerin and yolk can reduce the formation of ice crystals during cryopreservation of semen and protect sperm cell membrane from the punctured ice crystals. SL as a natural phospholipid， can reduce the formation of ice crystals and the damage of reactive oxygen species to sperm during cryopreservation of goat semen， thus reducing the damage of sperm by cryopreservation. LDL as a lipoprotein in egg yolk， can competitively bind with harmful cationic peptides in semen to protect sperm from harmful protein damage. The two have a synergistic effect， LDL enhances the cryoprotective effect of SL， while SL provides additional antioxidant protection， which together improves the survival rate of sperm during freezing and thawing， improving the overall effect of the cryoprotectants. This paper provides ideas and references for cryopreservation of goat semen.

Keywords" soy lecithin; low-density lipoprotein; semen cryopreservation; goat; semen quality

中國有悠久的山羊養殖歷史，養殖數量和品種多樣性均較高，隨著城鄉居民收入水平的不斷提高，國內人均羊肉消費量持續增長。然而，在山羊養殖方面存在許多問題，如小規模分散養殖、養殖技術和品種性能有待提高，以及疾病防治能力有待加強等。精液冷凍保存技術的發展對于遺傳資源的長期保存和優良品種的快速繁殖具有重要意義。改善山羊精液冷凍保存技術對于提高優良種公羊利用率、擴大遺傳影響范圍至關重要。然而，山羊精液對冷凍保存的敏感性較高，冷凍過程中易受到損傷，導致解凍后的精子活力下降。因此，研究有效的冷凍保護劑對于提高山羊精液冷凍保存效果具有重要意義。目前，許多學者對精液冷凍保存技術進行了深入研究。這些研究主要集中在開發新型稀釋劑、優化冷凍程序以及探索植物源性保護劑等方面。Ugur等[1]指出，改進冷凍保護程序，開發新型拓展劑可以有效減少公牛精液冷凍后的細胞損傷，提高解凍后的精子質量，證明了優化冷凍過程對于提高精子質量具有重要作用。Zhang等[2]研究了過量活性氧（Reactive oxygen species，ROS）引起的氧化應激對奶山羊精液的影響，并通過添加黃芪多糖來改善精液冷凍保存效果，結果表明，0.2 g/L黃芪多糖處理能有效提高精子線粒體膜電位和三磷酸腺苷含量，并通過調節凋亡相關蛋白降低了精子的凋亡率。針對奶山羊精漿中含有磷脂酶和卵黃凝集酶的情況，Zou等[3]利用牛精漿代替奶山羊精漿進行山羊精液冷凍保存，結果顯示，牛精漿加用牛稀釋液，可以提高奶山羊精子的冷凍質量。這些研究證明了選擇替代性冷凍保護劑的重要性。已有大量研究致力于改善精液冷凍保存技術，但在冷凍保護劑開發與應用方面仍存在較多不足。因此，本文綜述了大豆卵磷脂（Soybean lecithin，SL）和低密度脂蛋白（Low-density lipoprotein，LDL）在山羊精液冷凍保存中的應用效果及其作用機理，為進一步提高山羊精液冷凍保存技術提供參考。

1 山羊精液冷凍保存技術

山羊精液冷凍保存技術是指通過使用氮氣構建極低溫環境使山羊精液中的精子生理活動處于靜止狀態。在母山羊發情需要交配時，將儲存的精子解凍，使其恢復正常活力，并通過人工授精的方式將精子注射入母羊體內，確保母山羊能夠正常受孕[4]。但山羊精子在冷凍—解凍過程中會受到氧化應激、冷應激等不利因素帶來的損傷，導致精子解凍后質量較低，限制了山羊凍精的應用。此外，山羊精液冷凍保存效果也受精液的稀釋比、冷凍保護劑類型、抗氧化劑和稀釋劑種類等影響[5]。稀釋液的稀釋倍數對山羊精液的受胎率有顯著影響，劉孝德等[6]研究表明，山羊精液常溫稀釋液的稀釋倍數比為1∶10（v∶v）和1∶50（v∶v）時，母羊的第一情期受胎率最高。一般用于精液冷凍保存的擴展劑含有冷凍保護劑（如甘油或卵黃）[7]、維持滲透壓的物質[8]、能量來源（如葡萄糖或果糖）以及酶和抗生素等[9]。目前，山羊精液冷凍保存稀釋液中通常使用Tris作為緩沖液，并在其中添加無機鹽（如檸檬酸鈉，檸檬酸）、糖類（如葡萄糖，果糖和乳糖）、冷凍保護劑（如卵黃和甘油）以及抗氧化劑等物質。這些物質在冷卻、冷凍和解凍期間對于維持精子的活力至關重要，而各物質的添加量也會對精液冷凍造成較大影響[10]。近年來大量研究對部分傳統配制原料進行代替或補充，Thiangthientham等[11]評估了用芝麻油替代卵黃對山羊精子質量的影響，結果表明，8.75%卵黃和1.25%芝麻油組成的稀釋劑相比于10%卵黃，其保存的精子質量更高。Alcay等[12]研究表明，將8%虹鱒精漿添加進基于卵磷脂的補充劑中，對山羊精子保存具有有益的作用。

2 山羊精液冷凍保存中的冷凍損傷

在精液冷凍保存和升溫解凍過程中，精子細胞因外界環境變化而受到一定的損傷，再加上山羊精子質膜較薄，抗冷打擊能力較弱，其在低溫環境下容易受損，導致冷凍保存效果不佳[13]。在冷凍過程中，精子細胞外的水會形成冰晶，導致細胞外溶液濃度升高，細胞脫水，細胞內溶質濃度增加，冰點降低，從而損傷精子細胞；另一方面，形成的冰晶可能會刺破精子細胞膜，損害其正常生理功能[14]。山羊精子細胞含有大量的多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acid， PUFA），這使得精子膜更容易受到ROS引起的氧化損傷[15]。另外，在精液冷凍保存過程中，精子因遭受冷打擊，可能導致ROS過量積累并與精子質膜發生脂質過氧化反應，造成精子活力降低、線粒體功能受損、質膜完整性破壞和精子凋亡，使精子喪失正常的生理功能和授精能力[16]。

3 山羊精液冷凍保存中冷凍保護劑的應用

精液冷凍保護劑在精子冷凍保存中起著至關重要的作用，其可以有效降低極低溫環境對精子的損傷，保證精子在解凍后仍能保持正常活力。精液冷凍保護劑可以分為滲透性保護劑和非滲透性保護劑[17]。滲透性保護劑的作用是降低冰核溫度和縮小冰晶尺寸，滲入精子細胞內部，提高精子細胞內的溶液濃度，從而防止精子細胞因嚴重脫水而受損[18]。常見的滲透性保護劑包括甘油、乙二醇等，但其具有一定毒性，某些試劑滲透到精子細胞內部，易造成細胞損傷[19]，因此需要使用非滲透性冷凍保護劑來保護冷凍的精子細胞。非滲透性冷凍保護劑通常是大分子物質，無法穿透精子細胞內部，不會破壞細胞內部結構。常見的非滲透性保護劑包括卵黃和脫脂乳等[20]。本文介紹了滲透性保護劑甘油和非滲透性保護劑卵黃在精液冷凍保存中的應用。

3.1 甘油在精液冷凍保存中的應用

甘油作為一種小分子物質，可以通過精子細胞膜進入精子內部，改變細胞內溶液濃度和物質組成，并通過降低細胞內溶液的冰點，減少精液冷凍保存過程中冰晶的形成，從而保護精子[21]。姜璐瑤等[22]研究表明，在冷凍稀釋液中添加6%甘油作為冷凍保護劑，搭配-100～-10 ℃溫區內以-40 ℃/min的速率進行降溫的精液冷凍程序，更適合東佛里生奶綿羊精液的冷凍保存。在公羊精液冷凍保護劑中添加3%甘油+3%二甲基乙酰胺或4%甘油+二甲基乙酰胺，其冷凍保護效果較好[23]。席利萌等[18]評估了滲透性冷凍保護劑對山羊精子的抗冷凍保護作用，結果證明，以Tris卵黃為基礎，稀釋添加6%的甘油對山羊精液起到較好的保存效果。以上研究表明，甘油作為滲透性冷凍保護劑對精液冷凍保存具有積極作用。

3.2 卵黃在精液冷凍保存中的應用

卵黃是一種應用較廣泛的非滲透性冷凍保護劑，具有豐富的卵磷脂和脂蛋白，可以保護精子細胞膜免受冰晶的刺破，防止精子冷休克[24]。然而，卵黃的使用可能會導致潛在的有害代謝產物和毒素生成，且卵黃成分具有顯著的個體差異，不同禽類卵黃對山羊精液的冷凍效果影響也有不同。Swelum等[25]比較了各種禽類卵黃對山羊精液冷凍保存效果的影響，結果表明，在曲線速度、直線速度和漸進性運動等方面，相比于其他禽類卵黃稀釋液，雞卵黃稀釋液在改善解凍后山羊的精子質量上有更好的效果。山羊精漿中的卵黃凝固酶能夠將卵黃中的卵磷脂水解為脂肪酸和溶血卵磷脂，而溶血卵磷脂會對山羊精子的活力和頂體產生不利影響[26]，且卵黃作為動物源成分之一，易在冷凍過程和體外受精過程中受到微生物或其他物質的污染，所以研究者傾向使用植物源性冷凍保護劑代替卵黃，SL是其中一種代表性物質，范文華等[27]通過添加SL降低了卵黃的使用濃度，有效減少了溶血卵磷脂的生成量，降低了對精子的毒害作用。

綜上，傳統的山羊冷凍保護劑以卵黃為主，但其作為動物源成分，存在一定的生物安全性風險，且成分復雜，不易制備標準濃度的冷凍保護劑。因此選擇替代卵黃的物質非常有必要。本文分析了SL和LDL在精液冷凍保存中的作用機理及應用，為改良山羊精液冷凍稀釋液配方提供參考。

4 SL在精液冷凍保存中的作用機理及應用

SL是一種天然磷脂，含有豐富的磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺等成分。磷脂酰膽堿是細胞膜的重要組成部分，在精子冷凍保存過程中，可以維持精子細胞膜的流動性和穩定性，防止細胞膜在低溫條件下發生硬化或損傷[28]。在精液冷凍保存中，SL能夠模擬精子膜的脂質環境，減少冰晶形成，降低對精子的損傷。還可以通過減少ROS對精子的損傷，保護精子細胞膜的完整性和功能，維持細胞膜的穩定性，從而使其在冷凍和解凍過程中保持結構完整性[28]。此外，SL無法通過精子細胞膜，使得細胞外溶液濃度增加，精子細胞脫水，減少細胞內冰晶的形成，從而降低精子在冷凍保存過程中受到機械損傷的可能[29]。SL還能提高細胞外溶液的滲透壓，增強精子對不同滲透壓的抵抗能力，有助于減少精子質膜和頂體外膜的損傷[30]。Fukui等[31]使用以SL為基礎的稀釋液和含有卵黃的Tris稀釋液進行人工授精，并比較了母羊的生育能力，結果發現SL在動物精子冷凍保存中表現出比卵黃更強的安全性能。

近年來，SL已廣泛應用于豬、牛和雞等動物的精液冷凍保存中。汪俊躍等[32]研究發現，利用5%高壓均質SL替代卵黃對豬精液冷凍保存具有良好的效果，能有效提高精子質量，研究結果證明了SL替代卵黃的可行性和優勢。Abdel-ghani等[33]研究表明，在0.125%卵磷脂納米粒子的作用下，荷斯坦公牛的冷凍精子在平衡和解凍后顯示出更出色的性能。Sun等[34]在稀釋液中添加1.0%納米SL可顯著提高公雞精液活力，改善質膜和頂體完整性，提高解凍后精子的線粒體活性，并增強了總抗氧化能力與超氧化物歧化酶活性，有效提升了公雞精液解凍后的質量和生育能力，這一結果證明了SL在家禽精液冷凍保存程序中的應用價值。SL的優勢還體現在山羊精液冷凍保存中，含有不同濃度SL的稀釋劑能夠有效保持精子的活力和功能，起到較好的冷凍保護效果[28]。Kasimanickam等[35]比較了不同稀釋液對綿羊精子在液體儲存期間的DNA碎片指數、線粒體膜電位和精子運動性的影響，結果發現，在綿羊精液冷凍保存中添加11%的SL精液保存效果良好，且精子的一些運動參數顯著優于使用卵黃，揭示了SL作為動物源稀釋液替代品的巨大潛力。王震[36]在絨山羊精液冷凍稀釋液中聯合添加LDL和SL代替卵黃，結果表明，該處理明顯提高解凍后山羊精液的質量。Salmani等[37]研究結果顯示，添加1.5% SL相較于卵黃，解凍后精子的活力和質膜完整性雖沒有顯著差異，但精子運動能力有所提升。

以上研究結果表明，SL不僅能夠替代卵黃，而且在某些方面還具有更優的效果。此外，SL價格相對較低，更適合應用于大規模冷凍精液生產，并且不含蛋黃和奶粉等動物源性病毒和支原體，對于提高精液冷凍保存的安全性和可持續性具有重要意義。同時，使用SL作為冷凍保護劑，有助于減少對動物資源的依賴，符合當前對環境友好和可持續發展的要求。在精液冷凍過程中，通過調整SL濃度和與其他成分（如甘油、糖類等）的組合，可以優化山羊精液冷凍程序，提高精子的冷凍存活率和解凍后的人工授精效率。

5 LDL在精液冷凍保存中的作用機理及應用

LDL作為一種存在于雞蛋黃中的脂蛋白，在膽固醇代謝和類固醇激素合成中發揮著關鍵作用[38]。在精液冷凍保存過程中，精子可能會遭受物理和化學損傷，導致結構和功能發生改變。LDL可與精液中的有害陽離子肽競爭性結合，防止有害物質與精子細胞膜結合，保護精子免受有害蛋白的損傷[39]。其通過保護細胞膜減少冰晶的形成，維持細胞膜的穩定性，從而降低冷凍損傷。另外，LDL可以隔離精漿中的骨唾液酸蛋白，防止其與精子表面結合，減少膽固醇在精子膜中的流失，從而最大限度地減少膜損傷和冷凍損傷[40]。單獨添加LDL可以減輕甘油在精液冷凍保存中產生的毒性[41]。在哺乳動物的精液冷凍保存過程中，脂質過氧化是一種常見的問題，精子細胞膜膜中的PUFA受到氧化應激的影響，發生脂質過氧化反應，導致其受到損傷，影響精子的活力和功能。LDL中的抗氧化成分可以幫助減少這種氧化損傷，保護精子的DNA和膜結構，使用含有LDL的冷凍稀釋液可以顯著提高解凍后精子的活力，維持精子膜的完整性，保持精子的運動能力和授精潛力[42-43]。此外，LDL可以改善精子的運動特性，如直線速度、曲線速度和平均路徑速度等，這對于精子的運動和授精過程至關重要[44]，且與卵黃相比，使用LDL作為冷凍保護劑不會影響動物的生育能力[45]。

近年來，在犬[46]、牛[47]和馬[48]等動物的精液冷凍保存中，LDL已被廣泛研究并應用于實踐，顯示出顯著的保護效果。狄和雙等[49]研究表明，在犬精液稀釋液中添加8%或10%的LDL，能有效改善解凍后精子的活力。在山羊精液冷凍保存中LDL同樣發揮優良效益，在冷凍稀釋液中添加0.09 g/mL LDL時，可以有效冷凍保存絨山羊精液，冷凍保存效果優于使用卵黃 [36]。但LDL在山羊精液冷凍保存中的具體效果及原理還需大量實驗證明，相關研究有待進一步深入。因此，對于不同品種的山羊，LDL的具體濃度仍需通過大量實驗來確定。在實際應用中，研究人員需根據物種特性和冷凍保存的具體要求，優化LDL的濃度和配方，以達到較佳的保護效果。

6 SL和LDL聯合應用的研究進展及前景

SL和LDL在精液冷凍保存過程中具有重要作用，兩者均有望代替卵黃，作為精液稀釋液冷凍保護劑應用于畜禽精液保存[50]。相比于單獨使用SL或LDL，聯合添加這兩者也能顯著改善解凍后精子的存活時間和運動參數。王震[36]比較了在山羊精液冷凍稀釋液中單獨添加與聯合添加LDL和SL的冷凍保存效果，結果表明，聯合添加0.04 g/mL LDL和1.5% SL顯著提高了解凍后精子的運動參數和細胞膜完整性，說明LDL和SL具有良好的協同作用，能有效提高山羊精液的冷凍保存效果。這種聯合作用可能是因為LDL在超低溫冷凍時釋放出磷脂和脂質，磷脂是構成細胞膜的生物活性物質之一，有利于促進細胞代謝和維持膜結構。SL作為卵黃中卵磷脂的替代物，在冷凍過程中可以補充受損的磷脂結構；降低細胞液冰點，減少冰晶形成，從而減少冰晶對精子的損傷[51]。也可能是LDL和SL均含有抗氧化成分，SL可以通過減少ROS的損傷保護精子細胞膜的完整性和功能[28]，而LDL中的抗氧化成分可以幫助減少脂質過氧化造成的損傷[43]，兩者互補優勢為精子提供更優的冷凍保護液。同時SL作為非滲透性冷凍保護劑，可以通過增加細胞外液的滲透壓，促使細胞在冷凍時脫水，減少冰晶的形成[30]。LDL的加入可以進一步增強這種效果，提高精子的抗凍能力。因此，LDL和SL的結合使用可能產生協同效應，LDL增強了SL的冷凍保護作用，而SL提供了額外的抗氧化保護，共同提高精子在冷凍和解凍過程中的存活率，提高冷凍保護劑的整體效果。這種策略為提高不同動物精液冷凍保存的成功率提供新的視角。

綜上，本文介紹了山羊精液冷凍保存技術及冷凍保存過程中的冷凍損傷和冷凍保護劑的應用，探討了SL和LDL以及兩者聯用在山羊精液冷凍保存中的應用。LDL和SL在山羊精液冷凍保存中可以通過減少冰晶形成，減輕活性氧對精子的傷害等作用提高冷凍保存中精子的活力，且兩者具備一定的聯合效應。LDL和SL在精液冷凍保存中的應用前景廣闊，但仍存在許多不足，如LDL和SL在山羊冷凍精液保存中的具體作用機制尚未完全明確，不同濃度和配比對精子冷凍保存效果的影響也需進一步研究。此外，針對不同物種的特定需求，開發定制化的冷凍保護劑也是未來研究的重要方向之一。LDL和SL作為冷凍保護劑，在山羊精液冷凍保存中展現出較大的潛力，能夠提高精子在冷凍和解凍過程中的存活率。因此，充分挖掘LDL和SL在精液冷凍保存中的應用，對于遺傳資源保護和優良品種推廣具有重要意義。

參考文獻

[1] UGUR M R，SABER ABDELRAHMAN A，EVANS H C，et al. Advances in cryopreservation of bull sperm[J]. Frontiers in veterinary science，2019，6：268.

[2] ZHANG X，HU Z T，LI Y，et al. Effect of Astragalus polysaccharides on the cryopreservation of goat semen[J]. Theriogenology，2022，199：47-57.

[3] ZOU J H，WEI L X，LI D X，et al. Study on cryopreservation of Guanzhong dairy goat semen with bovine semen seminal plasma[J]. Theriogenology，2022，189：113-117

[4] 李振龍. 山羊精液冷凍保存技術及保存效果影響因素[J]. 畜牧獸醫科學（電子版），2022（11）：34-36.

[5] 紀云飛. 山羊精液冷凍保存技術研究進展[J]. 養殖與飼料，2020，19（8）：53-55.

[6] 劉孝德，姜勛平，陳家振. 山羊精液常溫稀釋液和最佳稀釋倍數研究[J]. 中國草食動物科學，2003，23（5）：17-19.

[7] SAHA A，ASADUZZAMAN M，BARI F Y. Cryopreservation techniques for ram sperm[J]. Veterinary medicine international，2022，2022：7378379.

[8] EZZATI M，SHANEHBANDI D，HAMDI K，et al. Influence of cryopreservation on structure and function of mammalian spermatozoa：an overview[J]. Cell and tissue banking，2020，21（1）：1-15.

[9] 劉虹夫，張家新，蘇蕊. 山羊精液冷凍保存稀釋液添加劑研究進展[J]. 中國畜牧雜志，2022，59（2）：42-47.

[10] ZHANG L M，WANG X Y，JIANG C Y，et al. Effects of different diluents and freezing methods on cryopreservation of huram semen[J]. Veterinary sciences，2024，11（6）：251.

[11] THIANGTHIENTHAM P，KALLAYANATHUM W，JUNTAUTSA S，et al. Sesame oil as a partial substitute for egg yolk in goat semen extenders[J]. Animal reproduction science，2024，266：107500.

[12] ALCAY S，USTUNER B，AKTAR A，et al. Goat semen cryopreservation with rainbow trout seminal plasma supplemented lecithin-based extenders[J]. Andrologia，2020，52（4）：e13555.

[13] 范文華. 大豆卵磷脂和原花青素在山羊精液冷凍中的應用研究[D]. 上海：上海海洋大學，2020.

[14] HUNGERFORD A，BAKOS HW，AITKEN R J. Sperm cryopreservation：current status and future developments[J]. Reproduction fertility and development，2023，35（3）：265-281.

[15] 張宇. NAC、SLS和SDS三種抗氧化劑對山羊精液冷凍保存效果的研究[D]. 楊凌：西北農林科技大學，2021.

[16] 潘赟，劉世榮，易曉華，等. 抗氧化劑對山羊精液冷凍保存效果的研究進展[J]. 家畜生態學報，2020，41（11）：6-11.

[17] LV C R，WU G Q，HONG Q H，et al. Spermatozoa cryopreservation：state of art and future in small ruminants[J]. Biopreservation and biobanking，2019，17（2）：171-182.

[18] 席利萌，羅軍，楊地坤，等. 滲透性冷凍保護劑對山羊精子的冷凍保護效果[J]. 西北農林科技大學學報（自然科學版），2015，43（8）：27-32.

[19] JIANG P，LI Q，LIU B L，et al. Effect of cryoprotectant-induced intracellular ice formation and crystallinity on bacteria during cryopreservation[J]. Cryobiology，2023，113：104786.

[20] 張美娜，郭富強，宋國欣，等. 冷凍保護劑對家畜精液冷凍保存的研究進展[J]. 黑龍江畜牧獸醫，2019（21）：37-41.

[21] 郝冠英，劉宏濤，王晶晶，等. 不同抗凍保護劑對綿羊精液冷凍保存效果的影響[J]. 黑龍江動物繁殖，2022，30（1）：12-17.

[22] 姜璐瑤，衛夢瑤，鄒家浩，等. 東佛里生奶綿羊精液冷凍保存方法的研究[J]. 中國畜牧雜志，2022，59（1）：199-20.

[23] DE MENEZES G F O，BITTENCOURT R F，DE LIMA CARDOSO F，et al. Dimethylacetamide alone or in combination with glycerol can be used for cryopreservation of ovine semen[J]. Animal reproduction，2020，17（4）：e20200036.

[24] LIANG J C，LARBI A，Lyu C R，et al. Fertility results after exocervical insemination using goat semen cryopreserved with extenders based on egg yolk，skim milk，or soybean lecithin[J]. Reproduction in domestic animals，2023，58（3）：431-44.

[25] SWELUM A A，BA-AWADH H A，OLARINRE I O，et al. Correlation between fatty acids levels in chicken，duck，goose，pigeon，quail and Turkey egg yolks and post-thawed quality of ram semen[J]. Reproduction in domestic animals，2023，58（9）：1298-1310.

[26] LEBOEUF B，RESTALL B，SALAMON S. Production and storage of goat semen for artificial insemination[J]. Animal reproduction science，2000，62（1/2/3）：113-141.

[27] 范文華，戴建軍，張樹山，等. 大豆卵磷脂與卵黃在山羊精液冷凍過程中的聯合作用研究[J]. 中國畜牧雜志，2020，56（9）：100-104.

[28] SUN L W，FAN W H，WU C F，et al. Effect of substituting different concentrations of soybean lecithin and egg yolk in tris-based extender on goat semen cryopreservation[J]. Cryobiology，2020，92：146-150.

[29] ZHANG Y T，Yuan W J，Liu Y C，et al. Plasma membrane lipid composition and metabolomics analysis of Yorkshire boar sperms with high and low resistance to cryopreservation[J]. Theriogenology，2023，206：28-39.

[30] 張迪，于洋，王志剛，等.大豆卵磷脂在家畜精液冷凍保存中的應用研究進展[J]. 中國畜牧雜志，2023，59（5）：1-4.

[31] FUKUI Y，KOHNO H，TOGARI T，et al. Fertility after artificial insemination using a soybean-based semen extender in sheep[J]. Journal of reproduction and development，2008，54（4）：286-289.

[32] 汪俊躍，張樹山，戴建軍，等. 高壓均質（HPH）大豆卵磷脂替代卵黃在豬精液冷凍保存效果的研究[J]. 中國獸醫科學，2020，50（11）：1461-1468.

[33] ABDEL-GHANI M A，EL-SHARAWY M E，ZAID E K，et al. Low concentrations of soybean lecithin nanoparticles had a positive impact on Holstein bulls' cryopreserved semen[J]. Reproduction in domestic animals，2024，59（5）：e14613.

[34] SUN L W，HE M Q，WU C F，et al. Beneficial influence of soybean lecithin nanoparticles on rooster frozen-thawed semen quality and fertility[J]. Animals，2021，11（6）：1769.

[35] KASIMANICKAM R，KASIMANICKAM V，TIBARY A，et al. Effect of semen extenders on sperm parameters of ram semen during liquid storage at 4 ℃[J]. Small ruminant research，2011，99（2/3）：208-213.

[36] 王震. 低密度脂蛋白和大豆卵磷脂對內蒙古絨山羊精液冷凍保存的影響[D]. 呼和浩特：內蒙古農業大學，2022.

[37] SALMANI H，TOWHIDI A，ZHANDI M，et al. In vitro assessment of soybean lecithin and egg yolk based diluents for cryopreservation of goat semen[J]. Cryobiology，2014，68（2）：276-280.

[38] EVANS R J，BAUER D H，VAGHEFI S B，et al. Influence of feeding cottonseed oil to laying hens on the low density lipoproteins of their eggs[J]. The journal of nutrition，1969，99（4）：485-490.

[39] 劉楊，黃和璐，董海濤，等. 鴿蛋低密度脂蛋白對冷休克和凍融豬精子HSP70及凋亡相關基因表達的影響[J]. 畜牧獸醫學報，2015，46（6）：940-948.

[40] HU J H，JIANG Z L，LV R K，et al. The advantages of low-density lipoproteins in the cryopreservation of bull semen[J]. Cryobiology，2011，62（1）：83-87.

[41] MOUSTACAS V S，ZAFFALON F G，LAGARES M A，et al. Natural，but not lyophilized，low density lypoproteins were an acceptable alternative to egg yolk for cryopreservation of ram semen[J]. Theriogenology，2011，75（2）：300-307.

[42] PILLET E，DUCHAMP G，BATELLIER F，et al. Egg yolk plasma can replace egg yolk in stallion freezing extenders[J]. Theriogenology，2011，75（1）：105-114.

[43] NAUC V，MANJUNATH P. Radioimmunoassays for bull seminal plasma proteins （BSP-A1 /-A2，BSP-A3，and BSP-30-kilodaltons），and their quantification in seminal plasma and sperm1[J]. Biology of reproduction，2000，63（4）：1058-1066.

[44] MOUSAVI S M，TOWHIDI A，ZHANDI M，et al. A soy lecithin nanoparticles-based extender effectively cryopreserves Holstein bull sperm[J]. Animal reproduction science，2023，257：107326.

[45] BENCHARIF D，AMIRAT-BRIAND L，GARAND A，et al. The advantages of using a combination of LDL and glutamine in comparison with TRIS egg yolk and Equex? STAMP extenders in the cryopreservation of canine semen[J]. Research in veterinary science，2012，93（1）：440-447.

[46] ANASTáCIO DA SILVA E，CORCINI C D，DE ASSIS ARAúJO CAMELO FJr ，et al. Probe ultrasonification of egg yolk plasma forms low-density lipoprotein nanoparticles that efficiently protect canine semen during cryofreezing[J]. Journal of biological chemistry，2022，298（7）：101975.

[47] AKHTER S，ANSARI M S，RAKHA B A，et al. Effect of low density lipoproteins in extender on freezability and fertility of buffalo （Bubalus bubalis） bull semen[J]. Theriogenology，2011，76（4）：759-764.

[48] CONTRERAS M J，ARIAS M E，FUENTES F，et al. Cellular and molecular consequences of stallion sperm cryopreservation：recent approaches to improve sperm survival[J]. Journal of equine veterinary science，2023，126：104499.

[49] 狄和雙，王利剛，賀衛華，等. 不同濃度的低密度脂蛋白對犬精液冷凍效果研究[J]. 黑龍江畜牧獸醫，2019（20）：152-154.

[50] 潘彩霞. 精液稀釋液冷凍保護劑卵黃替代物的研究進展[J]. 黑龍江動物繁殖，2020，27（6）：33-36.

[51] 呂瑞凱. 低密度脂蛋白、大豆卵磷脂和海藻糖對豬精液冷凍保存效果的影響[D]. 楊凌：西北農林科技大學，2011.

（責任編輯：胡立萍）