重慶市兩棲動(dòng)物新紀(jì)錄

關(guān)鍵詞：武陵掌突蟾；重慶市；新紀(jì)錄

掌突蟾屬（Leptobrachella）隸屬于角蟾科（Megophryidae），分布范圍廣泛，涵蓋中國(guó)南部、印度東北部和緬甸，經(jīng)由泰國(guó)和越南，一直延伸至馬來(lái)半島、婆羅洲和納土納群島［1］。早期對(duì)于掌突蟾屬的分類主要基于形態(tài)學(xué)特征，但隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對(duì)其系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系有了更深入的認(rèn)識(shí)。掌突蟾屬在分類歷史上曾被歸入多個(gè)不同的屬，如Paramegophrys、Carpophrys、Leptolalax、Lalax 和Lalos等［2］。Chen et al.［3］基于大規(guī)模的分子系統(tǒng)發(fā)育分析，建議將這些屬歸并到Leptobrachella，形成一個(gè)包含多個(gè)深度分化支系的大屬。

近年來(lái)，隨著更多野外工作和調(diào)查的開展，以及研究的深入，越來(lái)越多的掌突蟾屬新物種被發(fā)現(xiàn)并被描述。如在重慶發(fā)現(xiàn)的新物種縉云掌突蟾（Lepto?brachella jinyunensis）和貴師掌突蟾（L. yunyangen?sis），在廣西發(fā)現(xiàn)的桂南掌突蟾（L. guinanensis）和武鳴掌突蟾（L. wumingensis），以及在貴州發(fā)現(xiàn)的獨(dú)山掌突蟾（L. dushanensis）［2，4?7］。此外，掌突蟾屬的地理分布記錄也在不斷更新。如曹宇陽(yáng)等［8］報(bào)道了侗掌突蟾（L. dong）在廣西的新紀(jì)錄，馬琦等［9］報(bào)道了綏陽(yáng)掌突蟾（L. suiyangensis）在重慶的新紀(jì)錄，這些新發(fā)現(xiàn)不僅豐富了掌突蟾屬的物種多樣性，也為研究該地區(qū)的生物多樣性和生物地理學(xué)提供了重要資料。目前，掌突蟾屬包含105個(gè)物種，我國(guó)分布有42 種［10］，重慶市目前已記錄4 種，包括峨山掌突蟾（L. oshanensis）、貴師掌突蟾、縉云掌突蟾和綏陽(yáng)掌突蟾［2，4，9，11］。

武陵掌突蟾（L. wulingensis）是Qian et al.［12］發(fā)表的新種，模式產(chǎn)地為湖南省張家界市天子山自然保護(hù)區(qū)和天泉山森林公園，除模式產(chǎn)地以外目前已知分布于貴州省江口縣梵凈山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)和雷山縣雷公山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)及石阡縣［13?14］。2023—2024年，在重慶市酉陽(yáng)土家族苗族自治縣（以下簡(jiǎn)稱“酉陽(yáng)縣”）進(jìn)行兩棲動(dòng)物調(diào)查時(shí)，采集到2號(hào)掌突蟾標(biāo)本，通過(guò)形態(tài)特征鑒別和分子系統(tǒng)學(xué)綜合分析，確認(rèn)其為武陵掌突蟾，系重慶市新紀(jì)錄，進(jìn)一步擴(kuò)展了武陵掌突蟾的已知分布范圍。武陵山區(qū)因其獨(dú)特的地理環(huán)境和生態(tài)系統(tǒng)，成為生物多樣性研究的重要區(qū)域之一。武陵掌突蟾分布范圍的進(jìn)一步明確，不僅加深了對(duì)該地區(qū)生物多樣性的理解，而且有助于揭示掌突蟾屬在武陵山區(qū)的進(jìn)化和生態(tài)適應(yīng)機(jī)制，為保護(hù)和管理該區(qū)域的生物多樣性提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

2023年7月和2024年7月，在重慶市酉陽(yáng)縣青華林場(chǎng)進(jìn)行兩棲動(dòng)物調(diào)查時(shí)，采集到2號(hào)掌突蟾標(biāo)本（28°42′20″ N，108°53′12″ E，海拔1 012 m；28°43′24″ N，108°53′16″ E，海拔993 m）。取標(biāo)本肌肉組織（樣品號(hào)見表1），保存在無(wú)水乙醇中。標(biāo)本固定后，浸泡于75%的乙醇中，標(biāo)本存放于西南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院、重慶自然博物館，標(biāo)本號(hào)分別為SWU0001636和SWU0001410。

1. 2 形態(tài)鑒定與測(cè)量

標(biāo)本的外部形態(tài)鑒定依據(jù)《中國(guó)兩棲動(dòng)物檢索及圖解》［15］和《中國(guó)兩棲動(dòng)物及其分布彩色圖鑒》［11］。使用量程0 ～ 200 mm，精度0. 1 mm 的SHAHE 電子數(shù)顯游標(biāo)卡尺（溫州三和量具儀器有限公司）測(cè)量17項(xiàng)外形特征量度。

1. 3 DNA 提取、擴(kuò)增及測(cè)序

使用天根生化科技（北京）有限公司的DNA提取試劑盒（DP304）提取總DNA，基于Simon et al.［16］的研究，使用引物16Sar和16Sbr擴(kuò)增16S rRNA基因部分片段。使用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行雙向測(cè)序，測(cè)序結(jié)果使用DNASTAR Lasergene7. 1. 0（DNASTAR）中的子程序SeqMan 進(jìn)行拼接［17］，同時(shí)輔以人工校對(duì)。

1. 4 分子系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系構(gòu)建

基于Qian et al.［12］、劉京等［13］和Li et al.［7］對(duì)掌突蟾屬的研究，從GenBank中下載掌突蟾屬部分物種的16S rRNA序列（表1），與本研究測(cè)定的序列進(jìn)行整合，以腺角蟾（Xenophrys glandulosa）、華深擬髭蟾（Leptobrachium huashen）和騰沖擬髭蟾（L.tengchongense）作為外群。使用MAFFT v7. 505 比對(duì)［18］、Gblocks v0. 91. b修剪序列［19］，使用PhyloSuitev1. 2. 2［20］中的ModelFinder 基于赤池信息標(biāo)準(zhǔn)選擇最適核苷酸替代模型，本研究計(jì)算的最佳模型是GTR+I+G。使用MrBayes 3. 2. 1［21］構(gòu)建貝葉斯樹，使用4個(gè)馬爾可夫鏈，運(yùn)算1 000萬(wàn)代，每500代采樣一次，舍棄樣本比例為25%。采用IQ-TREE［22］構(gòu)建最大似然分子系統(tǒng)進(jìn)化樹，設(shè)置2 000次自舉次數(shù)［23］。使用Figtree查看及編輯系統(tǒng)樹。

2 結(jié)果

2. 1 形態(tài)描述

采集的2 號(hào)標(biāo)本為雄性，體型小，體長(zhǎng)分別為20. 4、22. 9 mm，其他部位量度見表2。重慶市酉陽(yáng)縣的武陵掌突蟾種群頭長(zhǎng)略大于頭寬（HL∶HW =1. 05 ～ 1. 19），吻端鈍圓，略突出于下唇；吻棱較鈍，頰部有輕微凹陷；吻長(zhǎng)大于眼徑（SL∶ED = 1. 19 ～1. 26），鼻孔近吻端；瞳孔縱置；無(wú)犁骨齒；鼓膜明顯，圓形，略凹陷，鼓膜上緣與鼓上棱相接，鼓上棱從眼后至腋腺上方；舌后端有缺刻。

指端圓，輕微膨大呈球狀，指長(zhǎng)順序?yàn)棰?gt; Ⅳ ≈Ⅱ gt; Ⅰ，無(wú)指關(guān)節(jié)下瘤；內(nèi)掌突大且突出，外掌突小而圓；指間無(wú)蹼和指?jìng)?cè)緣膜；趾端圓，輕微膨大，趾長(zhǎng)順序?yàn)棰?gt; Ⅲ gt; Ⅴ gt; Ⅱ gt; Ⅰ，無(wú)趾關(guān)節(jié)下瘤；內(nèi)跖突橢圓形；趾基部有蹼跡，趾側(cè)緣膜窄；脛長(zhǎng)約為體長(zhǎng)的一半（TL∶SVL = 0. 50 ～ 0. 53），后肢貼體前伸時(shí)脛跗關(guān)節(jié)位置可達(dá)眼中部。背部皮膚粗糙，背部、腹側(cè)和四肢散布圓或長(zhǎng)的、大小不一的疣粒，兩眼間區(qū)域相對(duì)光滑。頭部、軀干和前肢腹面皮膚光滑；股部、脛跗部腹面和側(cè)面、泄殖腔周圍有白色錐形小棘。胸腺呈長(zhǎng)條形，股腺呈橢圓形，胸腺大于股腺；股腺位于股部后腹面，距股脛關(guān)節(jié)比距泄殖腔近；腋上腺、腹側(cè)腺體團(tuán)清晰可見（圖1）。

生活時(shí)體背面為棕褐色。兩眼間有棕黑色倒三角形斑，其后在兩腋之間有一個(gè)“W”形斑，兩眼之間的三角形斑與頰部之間有一個(gè)不明顯的“Y”形斑；上唇緣具黑棕色縱紋；鼓上棱下緣呈黑色；背部、體側(cè)和四肢上散布有白色或橙色的腺疣；體側(cè)具中等大小的黑色斑；前臂、股部、脛部、跗部、指和趾背面有黑色細(xì)橫紋；肘部及上臂橙黃色。

咽喉部及四肢腹面呈灰紫色；胸部銀灰色；腹部乳白色且半透明，腹部血管清晰可見；下頜至胸腹部散有密集的小疣狀白點(diǎn)；腹部有不規(guī)則的斑駁紋理；頭胸部和腹部邊緣具不明顯的棕色斑點(diǎn)；腋上腺為橙色，腹側(cè)腺為乳白色，股腺和胸腺為白色；虹膜雙色，上半部分為亮橙色，下半部分逐漸變?yōu)樯钽y色。

2. 2 分子系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系與遺傳距離

PCR 擴(kuò)增獲得武陵掌突蟾的線粒體16S rRNA序列2條，多重比對(duì)后，長(zhǎng)度分別為480、490 bp，共176個(gè)堿基變異位點(diǎn)，125個(gè)簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)。采用貝葉斯法和最大似然法得到的系統(tǒng)發(fā)育樹拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)相似，僅以貝葉斯樹為例。在本研究中，重慶市酉陽(yáng)縣青華林場(chǎng)的武陵掌突蟾種群和貴州江口種群以及模式產(chǎn)地湖南省張家界種群聚為一支，具有較高的節(jié)點(diǎn)支持率，與貴州江口種群的貝葉斯推斷（BI）下的后驗(yàn)概率為1，2 000次重復(fù)的最大似然超快速引導(dǎo)支持分析值為 100，與湖南張家界種群的BI下的后驗(yàn)概率為0. 98，最大似然超快速引導(dǎo)支持分析值為99（圖2）。

遺傳距離分析的結(jié)果顯示，重慶市酉陽(yáng)縣的武陵掌突蟾種群與貴州江口種群之間沒(méi)有遺傳差異，二者的遺傳距離為0；而與模式產(chǎn)地湖南張家界的武陵掌突蟾種群相比，遺傳距離為1. 6%，具有一定的遺傳分化（表3）。

2. 3 生境描述

武陵掌突蟾發(fā)現(xiàn)于重慶市酉陽(yáng)縣青華林場(chǎng)（圖3）。該物種棲息于海拔990 ～ 1 800 m植被繁茂的山澗、河岸附近的巖石或靠近溪流巖石的土壤生境。同域分布的兩棲動(dòng)物還有棘腹蛙（Quasipaa bouleng?eri）、武陵瘰螈（Paramesotriton wulingensis）和大樹蛙（Zhangixalus dennysi）等。

3 討論

武陵掌突蟾目前文獻(xiàn)記載的分布地點(diǎn)有5處，分別是湖南省張家界天子山自然保護(hù)區(qū)、湖南省張家界天泉山森林公園［12］、貴州省梵凈山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)、貴州省雷公山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)［13］和貴州省石阡縣［14］，海拔414 ～ 1 687 m。本次在重慶酉陽(yáng)的發(fā)現(xiàn)是該種在重慶市的首次記錄，拓寬了對(duì)該種分布范圍的認(rèn)知。

重慶地形以山地和丘陵為主，這種獨(dú)特的地理環(huán)境為兩棲動(dòng)物的生存和繁衍提供了豐富的生態(tài)位。雖然重慶擁有良好的自然條件，但目前對(duì)該地區(qū)的掌突蟾屬物種的研究仍顯不足，尚未充分挖掘其多樣性潛力。未來(lái)的研究應(yīng)進(jìn)一步關(guān)注重慶地區(qū)掌突蟾屬物種多樣性的調(diào)查和研究，以期更全面地了解其多樣性及保護(hù)需求。

掌突蟾屬物種因體型較小、形態(tài)保守且同域分布程度高，其物種多樣性曾被嚴(yán)重低估。如峨山掌突蟾曾被記錄廣泛分布于中國(guó)多個(gè)省份，包括甘肅、四川、重慶、貴州和湖北［24］。但近期研究表明，這種廣泛分布的物種實(shí)際上是一個(gè)包含多個(gè)譜系和隱存種的物種復(fù)合體，即使在其模式產(chǎn)地四川省峨眉山也存在這種情況［2?4，12］。狹義的峨山掌突蟾僅分布在包含模式產(chǎn)地的四川盆地西南邊緣山區(qū)［25］。

重慶酉陽(yáng)的武陵掌突蟾與重慶記載的縉云掌突蟾、綏陽(yáng)掌突蟾和貴師掌突蟾在形態(tài)上存在明顯的差異。（1）武陵掌突蟾與縉云掌突蟾。武陵掌突蟾腹部為乳白色或淺灰白色，夾雜淺棕色斑點(diǎn)；縉云掌突蟾腹部則為花白色，遍布深灰色斑；生活時(shí)，武陵掌突蟾體背為棕褐色，縉云掌突蟾體背為深灰棕色，帶有煙黑色圖案；武陵掌突蟾指長(zhǎng)順序?yàn)棰?gt; Ⅳ ≈Ⅱ gt; Ⅰ，縉云掌突蟾為Ⅲ gt; Ⅰ gt; Ⅳ = Ⅱ。（2）武陵掌突蟾與綏陽(yáng)掌突蟾。武陵掌突蟾體背部散有稀疏大疣，而綏陽(yáng)掌突蟾體背部缺失大疣；生活時(shí)，武陵掌突蟾體色為棕褐色，綏陽(yáng)掌突蟾則為灰棕色；背外側(cè)斑不明顯，綏陽(yáng)掌突蟾背外側(cè)斑明顯；武陵掌突蟾虹膜上半部分為亮橙色，綏陽(yáng)掌突蟾為銅色。（3）武陵掌突蟾與貴師掌突蟾。武陵掌突蟾背前中部具“W”形斑，而貴師掌突蟾無(wú)此斑；武陵掌突蟾腹部乳白色且半透明，貴師掌突蟾咽部、胸部和腹部呈灰白色，有紫褐色斑點(diǎn)；后肢前伸貼體時(shí)，武陵掌突蟾的脛跗關(guān)節(jié)前達(dá)眼中部，而貴師掌突蟾的脛跗關(guān)節(jié)前達(dá)眼前角。

武陵掌突蟾分布范圍較廣，分布點(diǎn)之間最遠(yuǎn)的直線距離約為401 km，為貴州省雷公山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)和湖南省張家界天子山自然保護(hù)區(qū)。武陵山占地約10萬(wàn)km2，橫跨4個(gè)省（直轄）市（湖南、湖北、貴州、重慶）。武陵掌突蟾在重慶市的發(fā)現(xiàn)，填補(bǔ)了該物種在武陵山重慶段的分布。該物種垂直分布高差幅度較大，相對(duì)高差達(dá)1 273 m。重慶酉陽(yáng)的武陵掌突蟾種群與模式產(chǎn)地湖南張家界的種群相比，顳上線顏色深且呈黑色，而模式產(chǎn)地的種群顳上線弱；胸腺清晰可見，模式產(chǎn)地的種群胸腺則不明顯；體背部皮膚呈棕褐色，與模式產(chǎn)地種群的棕色或紅棕色有所不同。與貴州的武陵掌突蟾種群也存在一定差異，如頭長(zhǎng)略大于頭寬，而貴州種群是頭寬大于頭長(zhǎng)；皮膚呈棕褐色，貴州種群的體背部皮膚則呈灰棕色。由于本次采集的標(biāo)本數(shù)量有限，上述差異是否由不同環(huán)境下的適應(yīng)性變異引起，還需要通過(guò)進(jìn)一步的標(biāo)本采集和研究來(lái)驗(yàn)證。通過(guò)剖視查驗(yàn)，重慶市發(fā)現(xiàn)的武陵掌突蟾?jìng)€(gè)體性腺未發(fā)育成熟，判定為亞成體。

重慶酉陽(yáng)的武陵掌突蟾種群與貴州江口種群之間遺傳差異極小，說(shuō)明兩種群之間在遺傳層面上具有高度的相似性；與湖南張家界種群相比，遺傳距離為1. 6%，反映出一定的遺傳分化，可能是由地理隔離導(dǎo)致。重慶市酉陽(yáng)縣青華林場(chǎng)的武陵掌突蟾種群與貴州江口種群地理位置較近，直線距離約為96 km，遺傳差異較小；而與湖南張家界種群地理位置相對(duì)較遠(yuǎn)，直線距離約為170 km，遺傳差異相對(duì)較大。考慮到地理屏障的存在，如山脈、河流等自然障礙，也可能對(duì)這些種群之間的基因流動(dòng)產(chǎn)生限制作用。如武陵山脈及其周邊地形形成天然的屏障，阻礙了不同區(qū)域種群間的基因交流，從而促進(jìn)了遺傳分化的形成。因此，地理隔離和地理屏障共同作用，可能是影響武陵掌突蟾種群遺傳分化的主要因素。