血清IFN-γ、MBL、sFas表達水平對多發性骨髓瘤患者預后的評估價值

摘要：目的 探討血清干擾素-γ（IFN-γ）、甘露糖結合外源凝集素（MBL）、可溶性Fas（sFas）表達水平對多發性骨髓瘤（MM）患者預后的評估價值。方法 納入150例確診MM的患者，依照國際分期系統（ISS）標準將其分為Ⅰ期組46例、Ⅱ期組54例、Ⅲ期組50例。根據MM患者3年生存情況分為生存組98例和死亡組52例。采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清IFN-γ、MBL、sFas表達水平；Cox比例風險回歸模型分析MM患者死亡的影響因素；受試者工作特征（ROC）曲線分析血清IFN-γ、MBL、sFas表達水平對MM患者死亡的預測價值。結果 隨著ISS分期的提高，患者血清Ca水平明顯升高（P＜0.05），IFN-γ表達水平顯著降低，MBL、sFas水平顯著升高（P＜0.05）；死亡組患者血清IFN-γ水平與生存組相比顯著降低，血清MBL、sFas水平顯著升高（P＜0.05）；死亡組患者ISS Ⅲ期人數占比、血清Ca水平顯著高于生存組（P＜0.05）；血清MBL、sFas、Ca水平升高，ISS分期為Ⅲ期是MM患者3年內死亡的危險因素，血清IFN-γ水平升高是保護因素（P＜0.05）；血清IFN-γ、MBL、sFas聯合診斷MM患者死亡的曲線下面積為0.977，優于單獨診斷（Z分別為3.481、3.952、3.832，P＜0.05）。結論 MM患者血清IFN-γ表達水平降低，MBL、sFas水平升高，與患者3年預后有關，三者聯合對MM患者死亡具有預測價值，可以作為MM患者預后評估的生物標志物。

關鍵詞：多發性骨髓瘤；甘露糖結合外源凝集素；預后；干擾素γ；可溶性Fas

中圖分類號：R733.3 文獻標志碼：A DOI：10.11958/20241655

Abstract： Objective To investigate the prognostic value of serum interferon-γ （IFN-γ）， mannose-binding lectin （MBL） and soluble Fas （sFas） expression levels in patients with multiple myeloma （MM）. Methods A total of 150 MM patients diagnosed in our hospital were included in this study and used as the research subjects. According to ISS staging， patients were separated into the stage Ⅰ group （46 cases）， the stage Ⅱ group （54 cases） and the stage Ⅲ group （50 cases）. According to the survival status of MM patients， they were assigned into the survival group （n=98） and the death group （n=52）. Enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） was applied to detect expression levels of serum IFN-γ， MBL and sFas. The influencing factors of prognostic mortality in MM patients were analyzed by Cox proportional hazard regression model. The receiver operating curve （ROC） was plotted to analyze the diagnostic value of serum IFN-γ， MBL and sFas expression levels in the prognostic mortality of MM patients. Results With the improvement of ISS stage， the serum Ca level of patients increased significantly （P＜0.05）. With the improvement of ISS staging， the expression level of serum IFN-γ was greatly decreased， while the levels of serum MBL and sFas were significantly increased （P＜0.05）. The serum IFN-γ level was significantly lower in the death group than that of the survival group， while the serum MBL and sFas levels were significantly higher （P＜0.05）. The proportion of ISS Ⅲ stage and the level of serum Ca were significantly higher in the death group than those in the survival group （P＜0.05）. Elevated serum levels of MBL， sFas and Ca and ISS stage Ⅲ were risk factors for death within three years in patients with MM， and elevated serum IFN-γ level was protective factor for death within three years in patients with MM （P＜0.05）. The AUC of prognostic mortality in patients with combined serum IFN-γ， MBL and sFas in the diagnosis of MM was 0.977， which was better than that of patients diagnosed alone （Z=3.481， 3.952 and 3.832， P＜0.05）. Conclusion The decreased serum IFN-γ expression and the increased MBL and sFas levels are related to the three-year prognosis of MM patients， and the combination of the three has" predictive value for death of MM patients， and which can be used as a biomarker for the prognosis evaluation of MM patients.

Key words： multiple myeloma; mannose-binding lectin; prognosis; interferon-gamma; soluble Fas

多發性骨髓瘤（MM）是一種骨髓漿細胞惡性增生疾病，歸類為B細胞淋巴瘤，其特點是漿細胞的異常增生，約占血液系統惡性腫瘤的10%［1］。隨著對MM發病機制理解的不斷加深及新型治療藥物的使用，MM患者的生存預后顯著改善［2］。然而，大多數MM會復發，一些患者在治療后容易產生耐藥性，導致預后較差［3］。最近研究表明，干擾素（IFN）對于維持有效的抗腫瘤反應至關重要，而IFN信號轉導的缺失會導致患者對治療產生耐藥性［4］。曾雪嬌等［5］研究表明，慢性淋巴細胞白血病（CLL）患者血清中IFN-γ水平下降，并與CLL發生發展關系密切。甘露糖結合凝集素（MBL）是C型凝集素超家族的成員，可以充當模式識別受體并發揮作用［6］。韋巖等［7］研究表明，復發性白血病患者血清MBL水平明顯低于初發白血病患者，MBL對白血病具有診斷價值。血清可溶性Fas（sFas）是一種受體蛋白，由于Fas基因轉錄本的剪接過程出現異常，導致缺乏跨膜區的Fas大量生成，并從細胞膜上脫落形成sFas，進而影響細胞凋亡［8］。雷小茹等［9］研究表明，急性淋巴細胞白血病（ALL）患者血清中sFas表達水平升高，可作為預測ALL療效的指標。然而，目前尚缺乏血清IFN-γ、MBL、sFas表達水平對MM患者預后評估的相關研究。本研究選取MM患者為研究對象，檢測其血清IFN-γ、MBL、sFas表達水平，探討三者對預后的診斷價值，為降低發病率、改善患者預后提供新思路。

1 對象與方法

1.1 研究對象 納入2019年1月—2021年3月在本院確診的150例MM患者，按照國際分期系統（ISS）標準分成Ⅰ期組46例、Ⅱ期組54例、Ⅲ期組50例。納入標準：（1）MM診斷符合中國多發性骨髓瘤診治指南相關診斷標準［10］。（2）年齡18周歲以上。（3）未接受放療和化療等輔助治療者。排除標準：（1）孕婦及哺乳期婦女。（2）患有類風濕關節炎等自身免疫性疾病或急慢性傳染病。（3）有嚴重器官功能衰竭、惡性血液系統疾病及其他惡性腫瘤。（4）精神異常及中樞神經系統疾病。（5）最近3個月有出血史、大量輸血史、嚴重創傷或外科手術史。（6）嚴重傳染病或其他炎性疾病。全部研究對象均簽署知情同意書，并得到醫院倫理委員會批準（2018-KY-045-01）。

1.2 方法 （1）收集患者年齡、性別、體質量指數（BMI）、高血壓、糖尿病、治療方案、血紅蛋白（Hb）、免疫球蛋白M（IgM）、血清鈣（Ca）等臨床和實驗室檢查資料。（2）血清樣品收集。于化療前，抽取患者6 mL空腹靜脈血，分入2支試管，分別作血常規檢測和血清指標檢測。血清樣品靜置30 min后，3 000 r/min離心10 min將血清分離，-80 ℃冷凍保存。（3）酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清IFN-γ、MBL、sFas水平。取1支試管標本，按照檢測試劑盒說明書進行操作，試劑盒購自上海江萊生物技術有限公司。

1.3 隨訪及預后評估 采用電話或門診的形式進行系統性隨訪36個月。隨訪數據包含患者的生存狀況、骨髓檢測、影像學檢查等，至少每3個月進行1次隨訪，隨訪截至2024年3月。隨訪期間記錄患者的生存時間，對所選全部患者進行預后評估，患者均完成隨訪。根據隨訪截止后MM患者生存情況分為生存組98例和死亡組52例。

1.4 統計學方法 采用SPSS 25.0軟件進行數據分析。符合正態分布的計量數據以[[x] ±s

]表示，2組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較使用SNK-q檢驗；不符合正態分布的計量資料以M（P25，P75）表示，2組間比較采用Mann-Whitney U檢驗；計數資料以例或例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。MM患者預后的影響因素采用Cox比例風險回歸模型分析；受試者工作特征（ROC）曲線分析血清IFN-γ、MBL、sFas表達水平對MM患者死亡的預測價值。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.5 MM患者死亡影響因素的多因素Cox回歸分析 以MM患者3年內是否死亡（是=1，否=0）為因變量，將血清學指標及單因素分析結果中差異有統計學意義的血清IFN-γ、MBL、sFas、Ca、ISS分期（Ⅲ期=1，Ⅰ—Ⅱ期=0）為自變量納入Cox回歸分析。結果顯示，血清MBL、sFas、Ca水平升高，ISS分期為Ⅲ期是MM患者3年內死亡的危險因素，血清IFN-γ水平升高是MM患者3年內死亡的保護因素（P＜0.05）。見表5。

2.6 血清IFN-γ、MBL、sFas對MM患者死亡的預測價值 血清IFN-γ、MBL、sFas對MM患者3年內死亡單獨及聯合預測的ROC曲線下面積（AUC）分別為0.887、0.865、0.882和0.977，聯合預測效能優于單獨預測（Z分別為3.481、3.952和3.832，P＜0.05），見圖1、表6。

3 討論

MM是一種血液系統的惡性腫瘤，其特征是骨髓中漿細胞的克隆性增生［11］。MM的全球年發病人數約為16萬，該病的發展過程中會導致患者出現病理性骨折、骨髓衰竭和多器官衰竭［12］。盡管蛋白酶抑制劑、免疫調節藥物和單克隆抗體的引入為MM的治療帶來了顯著進展，但MM仍是一種難以治愈的疾病。即使在完全緩解的患者中，復發也較為常見，患者平均生存期約為6年［13］。檢測MM患者的最常用方法是評估其單克隆蛋白和血清游離輕鏈水平，但由于這些檢查設備成本高昂且操作復雜，并不適合大規模應用于所有患者的檢測［14］。因此，尋找易于獲得、成本低廉，并且在疾病診斷中敏感度和特異度均較高的生物標志物顯得尤為關鍵。

IFN-γ是干擾素家族中的一個獨特成員，不僅在針對病毒、細菌和腫瘤的先天性與適應性免疫反應中發揮關鍵作用，而且在促進病理性炎癥過程中也起著重要作用［15］。研究發現，造血干細胞/白細胞分離術產物中的IFN-γ是MM患者移植治療后反應喪失的重要生物標志物，提示它在移植后早期的治療管理中可能發揮作用［16］。Cheng等［17］研究證實，激活IFN-γ信號通路通過抑制程序性細胞死亡配體1（PD-L1）的表達發揮抗癌效應，在促進腫瘤細胞凋亡及T細胞介導的腫瘤細胞清除中具有重要作用。另有研究表明，IFN-γ通過Janus激酶1/2-轉錄激活因子3（JAK1/2-STAT3）信號通路調節CLL中的復雜促生存信號網絡，合理解釋了IFN-γ促進CLL細胞存活和耐藥的作用機制［18］。然而，IFN-γ在MM中的相關研究仍然較少。本研究結果顯示，MM患者IFN-γ表達顯著下調，且與患者預后有關，其水平升高是患者死亡的保護因素。根據上述結果，筆者推測IFN-γ可能作為一種抗癌因子，通過調控相應因子的表達進而發揮腫瘤細胞促凋亡作用，其低表達與MM的發展有關。

MBL基因多態性與不同類型腫瘤的風險和預后有關［19］。研究表明，成年炎癥性腸病（IBD）患者MBL受體MBL2 A/A純合子水平顯著升高，MBL和MBL依賴性補體激活可導致IBD病程中的過度炎癥和不良反應［20］。此外，MBL的高表達會誘發血清中IL-6表達增加，從而參與急性髓系白血病的發生發展，且與患者異常造血密切相關［21］。然而，近年來MBL在MM中的研究仍然較少。本研究結果顯示，MM患者血清MBL水平升高，是MM患者死亡的獨立危險因素。這提示MBL可能作為一種促癌因子，通過調控炎性因子的表達參與MM的發生發展，進而導致患者死亡。

sFas是Fas的一種縮短形式，是通過跳過編碼跨膜結構域的FAS外顯子6而選擇性剪接mRNA所產生［22］。研究表明，sFas通過與Fas配體結合來抑制細胞凋亡，從而在致癌和腫瘤轉移中發揮多種作用［23］。另有研究表明，肝癌患者血清sFas表達水平升高，sFas過表達可能與患者未來罹患肝癌風險有關［24］。何昊等［25］研究證實，白血病細胞可能過度表達Fas受體，sFas與Fas配體結合阻斷了細胞凋亡，從而無法通過正常細胞凋亡途徑處理sFas，導致細胞異常增殖。本研究結果顯示，MM患者血清sFas水平升高，與患者預后有關，其水平升高是MM患者死亡的獨立危險因素，提示sFas由MM細胞釋放并與Fas配體相結合，發揮腫瘤細胞抗凋亡作用，其過表達參與MM的發展。

ROC曲線分析結果顯示，血清IFN-γ、MBL、sFas對MM患者死亡聯合預測的AUC高于單獨預測，表明聯合預測的價值更高。以IFN-γ、MBL、sFas的截斷值預測MM患者死亡具有更高的準確性，對于后續患者臨床治療具有重要意義。三者可以作為預測MM患者預后的血清標志物。

綜上，MM患者血清IFN-γ表達水平降低，MBL、sFas表達水平升高，三者與患者預后有關，三者聯合對MM患者死亡具有一定的預測價值。

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（2024-10-15收稿 2024-12-16修回）

（本文編輯 胡小寧）