秦皮苷調(diào)節(jié)SDF-1/CXCR4信號通路對類風(fēng)濕 關(guān)節(jié)炎大鼠炎性反應(yīng)的影響

〔摘要〕 目的 探討秦皮苷調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）/CXC趨化因子受體4（CXCR4）信號通路對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）大鼠炎性反應(yīng)的影響。方法 大鼠隨機(jī)分為正常組、RA組、秦皮苷低劑量（0.2 g/kg）組、秦皮苷高劑量（0.4 g/kg）組、秦皮苷高劑量（0.4 g/kg）+NUCC-390（2.2 mg/kg）組，每組10只。除正常組外，其余各組以Ⅱ型膠原誘導(dǎo)建立RA模型。干預(yù)后檢測各組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）與足容積；Micro-CT掃描檢測踝關(guān)節(jié)骨質(zhì)形態(tài)；HE染色觀察踝關(guān)節(jié)組織病理形態(tài)；ELISA法檢測血清與關(guān)節(jié)液炎癥因子白細(xì)胞介素（IL）-6、IL-18、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、C-反應(yīng)蛋白（CRP）、類風(fēng)濕因子（RF）水平；Western blot檢測踝關(guān)節(jié)組織SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 與正常組比較，RA組大鼠AI，足容積，骨破壞評分，踝關(guān)節(jié)組織病理形態(tài)學(xué)評分，IL-6、IL-18、TNF-α、CRP、RF水平及SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平均升高（P＜0.05）；與RA組比較，秦皮苷低、高劑量組AI，足容積，骨破壞評分，踝關(guān)節(jié)組織病理形態(tài)學(xué)評分，IL-6、IL-18、TNF-α、CRP、RF水平及SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平均降低（P＜0.05），且秦皮苷高劑量組各指標(biāo)水平相比秦皮苷低劑量組降低（P＜0.05）；與秦皮苷高劑量組比較，秦皮苷高劑量+NUCC-390組AI，足容積，骨破壞評分，踝關(guān)節(jié)組織病理形態(tài)學(xué)評分，IL-6、IL-18、TNF-α、CRP、RF水平及SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平均升高（P＜0.05）。結(jié)論 秦皮苷可通過下調(diào)SDF-1/CXCR4信號通路減輕RA大鼠炎性反應(yīng)并改善其關(guān)節(jié)炎癥狀。

〔關(guān)鍵詞〕 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；秦皮苷；基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1；CXC趨化因子受體4；炎性反應(yīng)

〔中圖分類號〕R285.5" " " " 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０25.03.002

Effects of fraxin on inflammatory response in rats with rheumatoid arthritis by regulating SDF-1/CXCR4 signaling pathway

HAN Tianran1， JI Qingzhuo2， WANG Xiaoyu1， WU Lin1， TAI Lishi3， LI Zeguang4*

1. The First Clinical School of Medicine， Heilongjiang University of Chinese Medicine， Harbin， Heilongjiang 124000， China;

2. Acupuncture and Rehabilitation Center， Qingdao Hiser Hospital of Qingdao University， Qingdao， Shandong 266000， China;

3. Department of Neurology， Hanji Minkang TCM Internal Medicine Clinic， Baoding， Hebei 072550， China; 4. Department of Rheumatology， The First Affiliated Hospital， Heilongjiang University of Chinese Medicine， Harbin， Heilongjiang 124000， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To investigate the effects of fraxin on inflammatory response in rats with rheumatoid arthritis （RA） by regulating stromal cell-derived factor-1 （SDF-1）/CXC chemokine receptor 4 （CXCR4） signaling pathway. Methods Rats were randomly divided into normal group， RA group， low-dose （0.2 g/kg） fraxin group， high-dose （0.4 g/kg） fraxin group， high-dose （0.4 g/kg） fraxin+NUCC-390 （2.2 mg/kg） group， with 10 rats in each group. The RA model was established with type II collagen induction in all groups except the normal group. After the intervention， the arthritis index （AI） and paw volume of rats in each group were measured. Micro-CT scanning was performed to assess the bone morphology of the ankle joints. Histopathological morphology of the ankle joint tissue was observed using HE staining. ELISA was used to test the levels of inflammatory cytokines interleukin （IL）-6， IL-18， tumor necrosis factor-α （TNF-α）， C-reactive protein （CRP）， and rheumatoid factor （RF） in the serum and synovial fluid. Western blot was performed to measure the protein expression levels of SDF-1 and CXCR4 in the ankle joint tissue. Results Compared with the normal group， the RA group exhibited increased levels of AI， paw volume， bone destruction score， histopathological morphological score of the ankle joint， and the levels of IL-6， IL-18， TNF-α， CRP， RF， as well as the protein expression levels of SDF-1 and CXCR4 （Plt;0.05）. Compared with the RA group， both the low-dose and high-dose fraxin groups showed decreased levels of AI， paw volume， bone destruction score， histopathological morphological score of the ankle joint， and the levels of IL-6， IL-18， TNF-α， CRP， RF， as well as the protein expression levels of SDF-1 and CXCR4 （Plt;0.05）. Furthermore， the high-dose fraxin group exhibited lower levels of these indicators compared to the low-dose fraxin group （Plt;0.05）. Compared with the high-dose fraxin group， the high-dose fraxin+NUCC-390 group showed increased levels of AI， paw volume， bone destruction score， histopathological morphological score of the ankle joint， and the levels of IL-6， IL-18， TNF-α， CRP， RF， as well as the protein expression levels of SDF-1 and CXCR4 （Plt;0.05）. Conclusion Fraxin can alleviate the inflammatory response and relieve arthritis symptoms in RA rats by downregulating the SDF-1/CXCR4 signaling pathway.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 rheumatoid arthritis; fraxin; stromal cell-derived factor-1; CXC chemokine receptor 4; inflammatory response

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis， RA）是免疫系統(tǒng)過度激活造成的一種進(jìn)行性、對稱性自身免疫病，非化膿性滑膜炎性增生、關(guān)節(jié)軟骨侵蝕和骨進(jìn)行性破壞是其主要病理特征，可造成關(guān)節(jié)晨僵并伴有發(fā)紅、腫脹、疼痛等，嚴(yán)重影響患者正常生活與工作，還可對患者家庭和社會造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān)[1-2]。免疫細(xì)胞大量浸潤和關(guān)節(jié)無菌性炎癥是RA的主要發(fā)病機(jī)制，還可促進(jìn)其病情進(jìn)展，因此，減輕關(guān)節(jié)炎癥是改善RA關(guān)節(jié)滑膜增生和骨質(zhì)損傷癥狀的有效手段[3-4]?；|(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（stromal cell derived factor-1， SDF-1）是一種具有強(qiáng)趨化效力的細(xì)胞因子，又稱為CXC趨化因子配體12（C-X-C motif chemokine ligand 12， CXCL12），可與其受體CXC趨化因子受體4（CXC chemokine receptor 4， CXCR4）結(jié)合，影響炎癥與軟骨細(xì)胞分化、成熟、存活過程，與關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，下調(diào)CXCR4可顯著消除RA小鼠炎癥[5]，下調(diào)CXCL12/CXCR4信號通路可明顯抑制RA大鼠炎癥并改善其關(guān)節(jié)病理損傷[6]?；诖搜芯勘尘翱芍琒DF-1/CXCR4是治療RA的重要靶標(biāo)。秦皮是始載于《神農(nóng)本草經(jīng)·中經(jīng)》的常用中藥，具有清熱解毒、收澀止痢、燥濕、止帶、明目之功，能用于RA的臨床治療，其水煎液可降低RA大鼠炎癥并改善其踝關(guān)節(jié)病理組織形態(tài)[7]。秦皮苷是秦皮的主要活性成分，可通過抑制軟骨細(xì)胞凋亡減輕膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠軟骨損傷[8]。但秦皮苷是否可通過抑制SDF-1/CXCR4信號通路治療RA，目前并不清楚。本文通過建立RA大鼠模型，探究秦皮苷調(diào)節(jié)SDF-1/CXCR4信號通路對其炎性反應(yīng)的影響。

1 材料與方法

1.1" 材料

1.1.1" 實驗動物" 6周齡雄性SPF級Wistar大鼠52只，體質(zhì)量200～220 g，購自杭州子源實驗動物科技有限公司，許可證號：SCXK（滬）2024-0004，適應(yīng)性飼養(yǎng)于相對濕度45%～60%、溫度23～25 ℃的環(huán)境內(nèi)，進(jìn)行晝夜（12 h/12 h）交替光照并自由進(jìn)食飲水。本研究已獲得黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，倫理審批編號：HZYLLKT202432301。

1.1.2" 主要試劑與儀器" 牛Ⅱ型膠原蛋白（規(guī)格：10 mg，免疫級，美國Chrondex公司，批號：20021）；秦皮苷（純度：HPLC≥98%，四川省維克奇生物科技有限公司，批號：WKQ-0000435）；NUCC-390（純度：98.18%，美國TargetMol公司，批號：T12269）；大鼠腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白細(xì)胞介素（interleukin， IL）-6、IL-18、C-反應(yīng)蛋白（C-reac？鄄tive protein， CRP）ELISA試劑盒（英國Abcam公司，批號：ab236712、ab234570、ab213909、ab108827）；HE染色試劑盒（英國Abcam公司，批號：ab245880）；兔抗大鼠GAPDH、SDF-1、CXCR4抗體（英國Abcam公司，批號：ab9485、ab25117、ab124824）；大鼠類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor， RF）ELISA試劑盒（上海艾連達(dá)生物科技有限公司，批號：ALD28663）。

NEMO NMC-200型Micro-CT儀（平生醫(yī)療科技有限公司）；HM325型石蠟切片機(jī)（德國MICROM公司）；CX31型倒置顯微鏡（日本OLYMPUS公司）；MK3型多功能酶標(biāo)儀（美國Thermo Labsystems公司）；SE400型垂直電泳系統(tǒng)、TE62型蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)（美國Amersham公司）；MiniChemi 610型化學(xué)發(fā)光成像儀（北京賽智科技有限公司）。

1.2" 方法

1.2.1" 造模與藥物干預(yù)" 以Ⅱ型膠原誘導(dǎo)建立RA模型[9]。以0.1 mol/L冰醋酸溶液20 mL溶解牛Ⅱ型膠原，與冷弗氏完全佐劑等體積混合，冰水浴內(nèi)進(jìn)行充分?jǐn)嚢枞榛@得0.1 mg/mLⅡ型膠原乳劑，4 ℃下保存?zhèn)溆?。取Wistar大鼠42只，剃除尾根部和背部脊柱兩側(cè)毛發(fā)，每處皮內(nèi)注射0.1 mLⅡ型膠原乳劑進(jìn)行免疫。8 d后于大鼠左后足跖部皮內(nèi)注射0.1 mLⅡ型膠原乳劑進(jìn)行加強(qiáng)免疫，2周后完成造模，觀察大鼠雙后足與踝關(guān)節(jié)腫脹情況。以5級評分法評估大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)（arthritis index， AI），以AI≥2分表示RA模型制備成功[10]。RA模型大鼠共制備成功40只，將其隨機(jī)分為RA組、秦皮苷低劑量組、秦皮苷高劑量組、秦皮苷高劑量+NUCC-390組，每組10只，另取10只Wistar大鼠用同樣方式皮內(nèi)注射等量生理鹽水，設(shè)為正常組。

造模成功24 h后進(jìn)行藥物干預(yù)。用0.2、0.4 g/kg的秦皮苷分別干預(yù)秦皮苷低劑量組、秦皮苷高劑量組大鼠[8]；用0.4 g/kg的秦皮苷與2.2 mg/kg的NUCC-390[11]聯(lián)合干預(yù)秦皮苷高劑量+NUCC-390組大鼠；秦皮苷和NUCC-390均用生理鹽水溶解，秦皮苷做腹腔注射，NUCC-390做肌內(nèi)注射，正常組、RA組大鼠用等劑量生理鹽水進(jìn)行腹腔與肌內(nèi)注射，每組大鼠每天干預(yù)1次，連續(xù)干預(yù)28 d。

1.2.2" 大鼠AI與足容積檢測" 藥物干預(yù)結(jié)束后24 h評估各組大鼠AI。雙后足與踝關(guān)節(jié)未腫脹為0分；小趾關(guān)節(jié)紅腫為1分；足跖與趾關(guān)節(jié)腫脹為2分；踝關(guān)節(jié)以下足爪腫脹為3分；全部足爪腫脹包括踝關(guān)節(jié)為4分[10]。用足趾測量儀測定大鼠足容積，將踝關(guān)節(jié)以下足趾浸入容量杯內(nèi)讀取數(shù)值，即可得足容積，取雙后肢足跖平均值。

1.2.3" 標(biāo)本采集" 麻醉各組大鼠后斷尾采血、離心，獲得血清樣本保存于-80 ℃冰箱中。以尾靜脈空氣栓塞處死各組大鼠，均用1 mL生理鹽水沖洗踝關(guān)節(jié)腔后離心沖洗液，獲得關(guān)節(jié)液樣本保存于-80 ℃冰箱中。截取大鼠左下肢，剝?nèi)リP(guān)節(jié)周圍附著肌肉后沖洗，截取約360 mg關(guān)節(jié)組織用EDTA溶解骨質(zhì)中的鈣鹽，用RIPA裂解液提取總蛋白保存于-80 ℃冰箱中；剩余關(guān)節(jié)組織投入10%甲醛中固定3 d，取出放入10%硝酸溶液內(nèi)脫鈣3 d，流水沖洗后用石蠟包埋，用石蠟切片機(jī)切成5～7 μm的組織薄片備用。

1.2.4" Micro-CT掃描檢測踝關(guān)節(jié)骨質(zhì)形態(tài)并進(jìn)行評分" 截取大鼠右下肢，剝?nèi)リP(guān)節(jié)面肌肉后沖洗，固定在Micro-CT上進(jìn)行掃描成像，觀察踝關(guān)節(jié)骨質(zhì)形態(tài)并進(jìn)行骨破壞評分[12]。關(guān)節(jié)骨質(zhì)正常，評0分；關(guān)節(jié)骨質(zhì)早期輕度異常，關(guān)節(jié)間隙輕微狹窄，評1分；關(guān)節(jié)骨質(zhì)早期明確異常，有明顯侵蝕，關(guān)節(jié)間隙輕微狹窄，評2分；關(guān)節(jié)骨質(zhì)中度破壞，關(guān)節(jié)間隙狹窄＜正常50%，評3分；關(guān)節(jié)骨質(zhì)重度破壞，關(guān)節(jié)間隙狹窄＞正常50%，但關(guān)節(jié)間隙尚未消失，評4分；關(guān)節(jié)骨質(zhì)重度破壞，關(guān)節(jié)間隙消失，評5分。

1.2.5" HE染色及組織病理形態(tài)學(xué)評分" 取各組大鼠踝關(guān)節(jié)組織石蠟切片，脫蠟后流水沖洗，依次滴加蘇木精與伊紅染液，按HE染色試劑盒操作說明書進(jìn)行HE染色。水洗后封片干燥、固定，光鏡下觀察踝關(guān)節(jié)組織病理形態(tài)并拍攝圖像。根據(jù)滑膜炎癥與增生、血管翳生成、軟骨與骨破壞情況進(jìn)行組織病理形態(tài)學(xué)評分[13]?；ぱ仔约?xì)胞浸潤情況：無、局部浸潤、彌漫性浸潤，分別評0、1、2分；滑膜增生情況：無、一個關(guān)節(jié)面增生、多個關(guān)節(jié)面增生，分別評0、1、2分；血管翳與軟骨破壞情況：無、血管翳覆蓋軟骨但軟骨無破壞、血管翳覆蓋軟骨且軟骨破壞，分別評0、1、2分；骨破壞情況：無、輕度、嚴(yán)重，分別評0、1、2分。病理形態(tài)學(xué)評分為4項評分之和，總分為0～8分。

1.2.6" ELISA法檢測炎癥因子水平" 將各組大鼠血清及關(guān)節(jié)液自-80 ℃冰箱取出，4 ℃下進(jìn)行解凍，采用ELISA法于酶標(biāo)儀內(nèi)檢測IL-6、IL-18、TNF-α、CRP、RF水平，按ELISA試劑盒操作說明書進(jìn)行檢測。

1.2.7" Western blot檢測SDF-1、CXCR4蛋白水平

取各組大鼠踝關(guān)節(jié)組織總蛋白，測定其濃度后進(jìn)行煮沸變性。每組取20 μg上樣行SDS-PAGE電泳，通過全濕式電轉(zhuǎn)將其轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素酶上。封閉后孵育一抗（SDF-1、CXCR4、GAPDH抗體均以1∶1 000比例稀釋），4 ℃下過夜。二抗以1∶2 000比例稀釋，并于37 ℃下孵育2 h。洗滌后顯色各組蛋白，化學(xué)發(fā)光成像儀內(nèi)拍攝蛋白圖像并定量其灰度，用GAPDH作內(nèi)參對照，歸一化各組SDF-1與CXCR4蛋白表達(dá)。

1.3" 統(tǒng)計學(xué)分析

實驗數(shù)據(jù)以GraphPad Prism 9.0軟件做統(tǒng)計學(xué)分析，以“ｘ±s”表示，組間多重比較行單因素方差分析，事后兩兩比較行SNK-q檢驗，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1" 各組大鼠AI與關(guān)節(jié)腫脹程度比較

與正常組比較，RA組AI與足容積均升高（P＜0.05）；與RA組比較，秦皮苷低、高劑量組AI與足容積均降低（P＜0.05）；與秦皮苷低劑量組比較，秦皮苷高劑量組AI與足容積均降低（P＜0.05），秦皮苷高劑量+NUCC-390組AI與足容積均升高（P＜0.05）；與秦皮苷高劑量組比較，秦皮苷高劑量+NUCC-390組AI與足容積均升高（P＜0.05）。詳見表1。

2.2" 各組大鼠踝關(guān)節(jié)骨質(zhì)形態(tài)結(jié)果

正常組大鼠踝關(guān)節(jié)骨質(zhì)形態(tài)完好，關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)清晰、正常；RA組大鼠踝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)破損、模糊且有部分相鄰關(guān)節(jié)面融合，楔骨、骰骨、距骨等骨質(zhì)呈蟲蝕樣增生，踝關(guān)節(jié)骨質(zhì)形態(tài)發(fā)生明顯病變；秦皮苷低、高劑量組大鼠踝關(guān)節(jié)骨質(zhì)病變均減輕，秦皮苷高劑量組相比秦皮苷低劑量組進(jìn)一步減輕；秦皮苷高劑量+NUCC-390組大鼠踝關(guān)節(jié)骨質(zhì)病變相比秦皮苷低、高劑量組加重。詳見圖1。

與正常組比較，RA組骨破壞評分升高（P＜0.05）；與RA組比較，秦皮苷低、高劑量組骨破壞評分均降低（P＜0.05）；與秦皮苷低劑量組比較，秦皮苷高劑量組骨破壞評分降低（P＜0.05），秦皮苷高劑量+NUCC-390組骨破壞評分升高（P＜0.05）；與秦皮苷高劑量組比較，秦皮苷高劑量+NUCC-390組骨破壞評分升高（P＜0.05）。詳見表2。

2.3" 各組大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理檢測結(jié)果

正常組大鼠踝關(guān)節(jié)軟骨、骨質(zhì)、滑膜組織形態(tài)正常，滑膜組織無明顯炎癥細(xì)胞浸潤；RA組大鼠踝關(guān)節(jié)軟骨、骨質(zhì)破損且關(guān)節(jié)面粗糙，有血管翳形成，滑膜組織增生并可見明顯炎癥細(xì)胞浸潤，踝關(guān)節(jié)組織發(fā)生明顯病理損傷；秦皮苷低、高劑量組大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理損傷均減輕，秦皮苷高劑量組相比秦皮苷低劑量組進(jìn)一步減輕；秦皮苷高劑量+NUCC-390組大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理損傷相比秦皮苷低、高劑量組加重。詳見圖2。

與正常組比較，RA組病理形態(tài)學(xué)評分升高（P＜0.05）；與RA組比較，秦皮苷低、高劑量組病理形態(tài)學(xué)評分均降低（P＜0.05）；與秦皮苷低劑量組比較，秦皮苷高劑量組病理形態(tài)學(xué)評分降低（P＜0.05），秦皮苷高劑量+NUCC-390組病理形態(tài)學(xué)評分升高（P＜0.05）；與秦皮苷高劑量組比較，秦皮苷高劑量+NUCC-390組病理形態(tài)學(xué)評分升高（P＜0.05）。詳見表3。

2.4" 各組大鼠關(guān)節(jié)液及血清炎癥因子水平比較

與正常組比較，RA組關(guān)節(jié)液及血清IL-6、IL-18、TNF-α、CRP、RF水平均升高（P＜0.05）；與RA組比較，秦皮苷低、高劑量組關(guān)節(jié)液及血清IL-6、IL-18、TNF-α、CRP、RF水平均降低（P＜0.05）；與秦皮苷低劑量組比較，秦皮苷高劑量組關(guān)節(jié)液及血清IL-6、IL-18、TNF-α、CRP、RF水平均降低（P＜0.05），秦皮苷高劑量+NUCC-390組關(guān)節(jié)液及血清IL-6、IL-18、TNF-α、CRP、RF水平均升高（P＜0.05）；與秦皮苷高劑量組比較，秦皮苷高劑量+NUCC-390組關(guān)節(jié)液及血清IL-6、IL-18、TNF-α、CRP、RF水平均升高（P＜0.05）。詳見表4—5。

2.5" 各組大鼠踝關(guān)節(jié)組織SDF-1/CXCR4通路蛋白表達(dá)水平比較

與正常組比較，RA組SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與RA組比較，秦皮苷低、高劑量組SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平均降低（P＜0.05）；與秦皮苷低劑量組比較，秦皮苷高劑量組SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平均降低（P＜0.05），秦皮苷高劑量+NUCC-390組SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平均升高（P＜0.05）；與秦皮苷高劑量組比較，秦皮苷高劑量+NUCC-390組SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平均升高（P＜0.05）。詳見圖3、表6。

3 討論

目前，RA的標(biāo)準(zhǔn)治療以糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等非甾體抗炎藥為主，并輔助使用阿巴西普、利妥昔單抗等單克隆抗體治療藥物，可有效緩解RA患者關(guān)節(jié)病變，但很難達(dá)到根治效果，且部分患者不耐受，療效較差，因此，仍需研發(fā)新型藥物滿足RA的臨床治療需求[14-15]。本研究以Ⅱ型膠原誘導(dǎo)建立RA模型，結(jié)果顯示，造模大鼠足趾明顯腫脹，且其AI相比正常組大鼠明顯升高，提示RA大鼠模型建立成功。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)仍然不確定RA的確切病因，但大量研究顯示，自身免疫系統(tǒng)異常引發(fā)的炎性細(xì)胞激活、增殖、浸潤與炎癥因子大量生成，是造成關(guān)節(jié)炎性病變和骨破壞的主要病理機(jī)制，因此，治療RA的關(guān)鍵是抑制免疫炎癥[4，16-17]。中醫(yī)藥防治RA具有悠久的歷史和豐富的臨床經(jīng)驗，安全經(jīng)濟(jì)且療效良好，具有廣闊應(yīng)用前景。RA歸屬于中醫(yī)學(xué)“痹證”“歷節(jié)風(fēng)”范疇，熱毒是其主要病機(jī)，并可引發(fā)患者關(guān)節(jié)紅、腫、熱、痛等急性發(fā)作，治法以清熱解毒為主[4]。秦皮是我國傳統(tǒng)中藥材，具有明顯的清熱解毒之功，契合RA的病機(jī)，在RA臨床治療中有廣泛應(yīng)用，其水煎液能通過抑制炎癥減輕RA大鼠踝關(guān)節(jié)損傷[7]。秦皮苷是從秦皮中提取的一種天然活性物質(zhì)，是秦皮的主要有效成分之一，可明顯抑制脂多糖誘導(dǎo)的M1型巨噬細(xì)胞極化，通過降低炎癥因子表達(dá)而抑制機(jī)體炎癥，進(jìn)而預(yù)防炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展[18]；還可減輕肺炎克雷伯菌所致重癥肺炎大鼠肺組織炎性損傷[19]；且可緩解膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠軟骨細(xì)胞凋亡及軟骨損傷[8]。因而推測秦皮苷可能是治療RA的有效藥物。本研究結(jié)果顯示，以秦皮苷干預(yù)RA大鼠，可減少其炎癥因子IL-6、IL-18、TNF-α、CRP、RF的表達(dá)，減輕其體內(nèi)炎癥，降低RA大鼠AI、足容積、踝關(guān)節(jié)組織病理形態(tài)學(xué)評分，并緩解其踝關(guān)節(jié)骨質(zhì)形態(tài)病變，表明秦皮苷可抑制RA大鼠炎性反應(yīng)，減輕其關(guān)節(jié)病理損傷，改善其關(guān)節(jié)紅腫、骨質(zhì)破壞等關(guān)節(jié)炎癥狀，提示秦皮苷在RA臨床治療中具有較好的應(yīng)用前景。

SDF-1/CXCR4是調(diào)控免疫系統(tǒng)激活與免疫炎癥的重要信號，可通過調(diào)控軟骨細(xì)胞存活、分化介導(dǎo)關(guān)節(jié)炎疾病的發(fā)生發(fā)展，下調(diào)SDF-1與CXCR4蛋白表達(dá)可有效減輕骨關(guān)節(jié)炎大鼠軟骨損傷，修復(fù)受損軟骨和軟骨下骨，發(fā)揮明顯的抗骨關(guān)節(jié)炎作用[20-21]，阻斷SDF-1/CXCR4信號通路傳導(dǎo)還可明顯緩解RA大鼠關(guān)節(jié)損傷[6]。本研究結(jié)果顯示，RA大鼠關(guān)節(jié)組織SDF-1與CXCR4表達(dá)相比正常組升高，以秦皮苷干預(yù)可逆轉(zhuǎn)其表達(dá)變化趨勢，表明SDF-1/CXCR4信號通路參與調(diào)控RA發(fā)病過程，并與秦皮苷對RA大鼠的治療作用有關(guān)；以秦皮苷和SDF-1/CXCR4信號激活劑NUCC-390聯(lián)合干預(yù)RA大鼠，可降低秦皮苷單獨干預(yù)對RA大鼠的抗炎作用，消除其對RA大鼠關(guān)節(jié)病理損傷的減輕作用，逆轉(zhuǎn)其對RA大鼠關(guān)節(jié)紅腫、骨質(zhì)破壞等關(guān)節(jié)炎癥狀的改善作用，最終揭示秦皮苷可通過抑制SDF-1/CXCR4信號通路激活來減輕RA大鼠炎性反應(yīng)。

綜上所述，秦皮苷可抑制RA大鼠體內(nèi)炎性反應(yīng)，減輕其關(guān)節(jié)病理損傷，改善其關(guān)節(jié)腫脹、骨質(zhì)破壞等關(guān)節(jié)炎癥狀，阻止SDF-1/CXCR4信號通路激活可能是秦皮苷治療RA的藥理機(jī)制之一。本文首次證實了秦皮苷對RA的潛在治療作用，對其在RA臨床治療中的研發(fā)應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)，有助于RA治療方案的改進(jìn)。

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