國產鹽酸米諾環素口服固體制劑的質量評價

摘要：目的 評價國內不同企業生產的鹽酸米諾環素膠囊及片劑的質量。方法 采用調研、文獻檢索、法定標準檢驗結合探索性研究的方式，對抽檢的96批次樣品進行檢驗和統計分析；根據法定標準檢驗過程中發現的問題，對有關物質、含量測定等關鍵質量屬性進行考察，分析不同企業產品的質量差異。結果 按法定標準檢驗96批次樣品，合格率為100%，與2018年鹽酸米諾環素膠囊國抽結果比較，產品質量總體持續穩定。但該品種存在含量測定結果偏低，有關物質方法耐用性差等問題。探索性研究對有關物質方法進行了優化，并對各雜質來源和結構進行了確證；對含量測定中供試品溶液配制方式進行了改進優化；不同內容物性狀膠囊和不同包裝形式在相同放置條件下雜質總量變化差異較大。結論 鹽酸米諾環素口服固體制劑總體質量良好，鹽酸米諾環素膠囊及片劑的質量標準需進一步完善；建議企業對制劑生產工藝進行優化，采用雙鋁塑包裝，保證產品質量。

關鍵詞：鹽酸米諾環素；質量評價；有關物質；含量測定

中圖分類號：R978 文獻標志碼：A

Quality evaluation of domestic oral solid preparations of minocycline hydrochloride

Yang Dan1，2， Yao Yuan1，2， Chen Minhui1，2， Zhang Qian1，2， Geng Yue1，2， Wu Li 1，2， Liu Wenxin1，2， and" Zhang Jinlin1，2

（1 Jiangsu Institute of Food and Drug Control， Nanjing 210019; 2 NMPA Key Laboratory for Impurity Profile of

Chemical Drugs， Nanjing 210019）

Abstract Objective To evaluate the quality of minocycline hydrochloride capsules and tablets produced by different domestic enterprises. Methods The combination of research， literature search， statutory standard tests， and exploratory research was used to test and statistically analyze 96 batches of sampled samples， investigate key quality attributes such as related substances and content determination， and analyze the quality differences of products from different enterprises based on the problems discovered during the standard inspection process. Results A total of 96 batches of samples were tested according to the specifications， and all of them complied with regulations. Compared with the results obtained in 2018， the product quality of ampicillin capsules was generally stable. However， there are some problems， such as low content determination results and poor durability of related material methods. In the exploratory study， the method for related substances was optimized， and the source and structure of each impurity were confirmed. The preparation method of the test product solution for content determination was improved and optimized. The total amount of impurities in capsules with different contents and different packaging forms varies greatly under the same conditions. Conclusion The quality of" the minocycline hydrochloride oral solid preparation was generally under good control. However， the quality control specification needs to be further improved. An improvement needs to be put forward to promote quality by optimizing preparation and adopting double aluminum-plastic packaging.

Key words Minocycline hydrochloride; Quality evaluation; Related substances; Content determination

鹽酸米諾環素又稱為鹽酸二甲胺四環素，屬于第二代半合成四環素類藥物，為廣譜類抗生素，對四環素敏感或耐藥的金黃色葡萄球菌均有效[1]，對銅綠假單胞菌和細菌樣微生物等的作用比其他四環素類略強，對大腸埃希菌、變形桿菌和沙門菌等的抗菌強度與四環素類相近[2]。臨床主要用于治療敗血癥、淺表性化膿性感染、急慢性支氣管炎和尿道炎等[3]。

鹽酸米諾環素于1966年由氰胺公司立達子公司合成[4]，1971年在美國上市[5]，2017年瀚暉制藥獲得原研生產技術使得原研得以地產化進入中國市場。經查詢國家藥品監督管理局（National Medical Products Administration， NMPA）進口藥品和國產藥品批準文號數據庫，我國鹽酸米諾環素僅有片劑與膠囊劑兩種劑型，其中片劑有批準文號8個，生產企業6家；膠囊共有批準文號13個，生產企業10家，根據膠囊內容物的不同，分為微丸膠囊和普通粉末膠囊，原研劑型為微丸膠囊。國內原料藥只有1個批準文號，生產企業1家。本次抽檢的96批樣品的原料藥均來源于外國同一家公司。目前ChP 2020[6]、USP-NF 2018[7]和BP 2023[8]收錄了鹽酸米諾環素原料、片劑與膠囊劑，JP 18[9]收錄了鹽酸米諾環素原料、片劑和注射液，EP 11.0[10]僅收錄了鹽酸米諾環素原料藥。

本次抽檢共96批次樣品，其中片劑7批，涉及生產企業1家，規格為50 mg；膠囊89批，涉及生產企業4家，共50和100 mg兩種規格。抽檢樣品來源于25個?。▍^、市），其中生產單位、經營單位、使用單位抽樣批次占比分別為16.2%、77.8%和3.3%。抽檢的樣品分別執行ChP 2020和企業注冊標準。

2018年曾對鹽酸米諾環素進行過國家藥品抽檢，研究表明國產鹽酸米諾環素膠囊的總體質量情況良好[11]。對于2018年微丸膠囊存在的批次間工藝不穩定的問題，本次抽檢中企業產品批間差異小，工藝較為穩定，產品質量有所提高。相較于2018年的抽檢，這次增加了片劑的質量評價，優化了有關物質方法和含量測定供試品溶液配制方式，解決了企業的實際難題，雜質譜分析更為全面，從生產工藝及樣品包裝形式方面對企業提出了合理的建議，將進一步促進國內鹽酸米諾環素口服固體制劑的質量，對于完善質量標準亦有重要意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AB高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；LC solution數據分析軟件（日本Shimadzu公司）；SPD-20A紫外檢測器（日本Shimadzu公司）；XSE205DU電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；pH計（瑞士Mettler Toledo公司）；純化水儀（Millipore公司）；STIK恒溫生化培養箱（德國Memmert公司）；Agilent 1290 Infinity II高效液相色譜儀（Agilent公司）；Agilent 6546 Q-TOF質譜（Agilent公司）

1.2 試藥

7批鹽酸米諾環素片和89批鹽酸米諾環素膠囊均為2023年度國家藥品評價性抽驗樣品，涉及5個生產企業（用A至E企業表示），調研收集到5批鹽酸米諾環素原料藥，具體見表1。

米諾環素對照品（批號130514-202103）購自中國食品藥品檢定研究院，純度為83.9%；色譜級N，N-二甲基甲酰胺購自美國Sigma公司；色譜級四氫呋喃、甲醇和乙腈購自德國Merck公司；三乙胺購自國藥集團化學試劑有限公司，質量分數≥99.0%。

2 試驗方法

2.1 法定標準檢驗所用方法

分別按照各企業現行標準對96批樣品進行檢驗，其中B、C、D、E企業執行ChP 2020標準，A企業執行企業注冊標準，主要檢驗項目包括性狀、鑒別、有關物質、溶出度、水分、裝量差異和含量測定等。

2.2 探索性研究所用方法

針對法定檢驗中發現的問題，結合品種特點及調研情況，重點開展有關物質方法優化、雜質譜分析、含量測定供試品溶液配制方式的優化等項目的探索性研究。

2.2.1 優化后的有關物質檢查方法及分析方法學驗證

參考相關文獻[12-13]及EP11.0方法，以可以有效分離國評中涉及的所有米諾環素已知雜質和潛在雜質為目標進行優化。最終在EP11.0方法的基礎上，降低了流動相鹽的濃度以及流速，調整了流動相中各組分的比例，具體方法：采用Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）的色譜柱，流動相為0.13 mol/L的草酸銨溶液-0.01 mol/L的乙二胺四乙酸二鈉-N，N-二甲基甲酰胺-四氫呋喃（600：180：140：80，用氨水調節pH至7.2），等度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測波長為280 nm，柱溫為40 ℃，進樣量為20 μL，記錄色譜圖至主峰保留時間2.6倍；供試品溶液濃度：0.25 mg/mL，自身對照溶液濃度：2.5 μg/mL，系統適用性溶液：精密稱取10 mg鹽酸米諾環素，用0.2 mol/L草酸銨溶液20 mL溶解后，60 ℃水浴加熱3 h，冷卻后用水稀釋至25 mL，色譜圖中米諾環素與雜質A（RRT0.71）之間分離度應大于5。

對上述方法進行專屬性、檢測限、定量限、線性與范圍、進樣精密度、準確度、重復性和溶液穩定性等方法學驗證。

2.2.2 雜質譜分析所用方法

通過文獻調研、高溫高濕試驗和強破壞試驗，對原料藥生產過程可能引入的工藝雜質、制劑生產及貯存過程中可能產生的降解產物進行雜質歸屬，明確各企業樣品的關鍵雜質，比較分析國產制劑與原研地產化藥品雜質水平的差異[14-15]。

采用Agilent 1290 Infinity II液相與Agilent 6546 Q-TOF質譜聯用技術對雜質結構進行解析。一維色譜條件采用“2.2.1”中優化的色譜條件，二維色譜條件參照文獻[16]進行調整，具體如下：色譜柱為Eclipse Plus C18 （2.1 mm×50 mm， 1.8 μm），流動相A相：0.1%甲酸水溶液，B相：乙腈，梯度洗脫（表2），流速為1.0" mL/min，柱溫為40 ℃，進樣體積為40 μL，檢測波長為280 nm。質譜檢測器采用ESI，正離子掃描，干燥器溫度200 ℃，干燥器流速8 L/min，霧化器壓力：35 psi，電離電壓3500 V，傳輸管電壓500 V，采集模式Auto MS/MS，采集速率3 spc/Sec，質量范圍50～1700 m/z。

2.2.3 含量測定采用優化后的供試品溶液配制方式

改進后的方法為：“取本品10粒，將內容物全量轉移至1000 mL量瓶中，用水洗滌膠囊殼數次，洗滌液合并轉移至上述1000 mL量瓶中，加水適量后超聲至鹽酸米諾環素溶解，冷卻后用水稀釋成含米諾環素0.5 mg/mL的溶液，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液”。為了考察該方法的適用性，隨機選取4個廠家15批樣品以及3批B廠家一致性評價過審后樣品，共計18批，進行了試驗。

3 試驗結果及討論

3.1 法定標準檢驗的結果及發現的問題

按照法定標準檢驗，96批次鹽酸米諾環素片和鹽酸米諾環素膠囊共7個檢驗項目均符合規定，合格率為100%。

但在法定檢驗過程中發現以下問題：①有關物質涉及2個標準，不同的標準對雜質的種類和含量限度要求不同，其中ChP 2020方法雜質檢出個數有限，且只對雜質A進行了規定，其他已知雜質諸如雜質B、雜質C、雜質H、雜質E等均按照其他單個雜質進行控制；A家企業方法在檢驗過程中因流動相鹽濃度較高，容易造成系統堵塞，且方法的耐用性較差，雜質E和雜質I不能夠穩定地分離，與該企業溝通，發現確存在此現象。因而，需建立一套專屬性強、靈敏度高、操作便捷、有區分力、耐用性強的有關物質分析方法，并分析雜質譜、雜質來源，用統一的方法對5家企業進行產品質量評價。②含量檢測過程中發現B家企業的測定結果均較低，最低的僅有92.5%，但是同批次溶出度測定結果均高于含量測定結果，需進一步探討究竟是產品質量問題還是供試品溶液配制方式對測定結果有影響。

3.2 探索性研究結果

3.2.1 有關物質方法分析方法學驗證結果

專屬性試驗中，強酸、強堿、強氧化、高溫、光照各條件下降解產生的雜質峰與米諾環素主峰的分離度均滿足要求，均不干擾主峰和已知雜質，物料平衡在90.0%～110.0%范圍內，方法專屬性良好；鹽酸米諾環素對照品在0.125～50 μg/mL濃度范圍內線性良好，線性回歸方程為y=37400.62x，R2=1.00；鹽酸米諾環素檢測限為0.1090 μg/mL，對應S/N=4.15，定量限為0.4359 μg/mL，對應S/N=13.56；供試品溶液連續進樣6針，每針峰總面積RSD值為0.06%，進樣精密度良好；鹽酸米諾環素對照品在80%、100%和120%水平下，回收率分別為100.86%、98.74%和98.70%，RSD分別為0.8%、0.9%和0.3%；取6份供試品溶液平行進樣，統計含量大于0.05%的各雜質，其含量變化值均在±0.05%以內，方法重復性良好；穩定性試驗中，供試品溶液在2～8 ℃條件下，4 h內穩定性良好，1%自身對照溶液在2～8 ℃條件下，24 h內穩定性良好。經過方法學驗證，該方法靈敏、專屬性強、準確度高，可有效用于鹽酸米諾環素產品的質量控制。

3.2.2 優化后的有關物質方法與原方法的結果對比

兩套現行有關物質方法的流動相和色譜柱均不同，其中ChP 2020方法中采用的流動相為：0.2 mol/L醋酸銨-二甲基甲酰胺-四氫呋喃（600：398：2，內含0.01 mol/L乙二胺四乙酸二鈉），色譜柱為C8柱；A家企業注冊標準采用的流動相為：二甲基甲酰胺-四氫呋喃-0.2 mol/L草酸銨-0.01 mol/L乙二胺四乙酸二鈉（120：80：600：180），用氨水調節pH值至7.2，色譜柱為C18柱。

上述兩套有關物質方法均存在一定的問題，為了更好地控制產品質量，對不同企業產品進行統一的評價，對方法進行了優化改進。采用優化后的方法對每個企業3批樣品，共計15批進行了檢測，優化后的方法能夠實現所有米諾環素已知雜質的分離，并且相較于原先的方法檢出雜質能力更強（圖1），對優化前后的雜質檢出個數及雜質總量數據進行顯著性分析，P＜0.05，說明優化后的方法檢出雜質能力顯著提高，對控制產品質量有重要意義。

同一批次的樣品法定檢驗方法和優化后的方法典型色譜圖比較見圖2。可以看出優化后方法基線更穩定，雜質分離能力更強，對該方法進行了完整的分析方法學驗證，結果均符合要求。改進后的方法亦能夠穩定地將雜質E和雜質I分離，提高了色譜柱的耐用性，解決了企業的難題。

3.2.3 雜質譜分析

（1） 雜質來源分析：按照新建的方法，5家企業各選取3批制劑（除去外包裝），連同兩家企業提供的5批原料藥，置于溫度（40±2） ℃、相對濕度（75±5）%的條件下，分別于0、1、2和3月進行有關物質測定，獲得原料藥以及不同企業產品完整的雜質分布情況，制劑典型色譜圖見圖3。鹽酸米諾環素產品中共檢出可能出現的雜質23個，結合文獻[11]分析及穩定性實驗結果，對各雜質進行歸屬。雜質15是降解雜質，雜質3、雜質11、雜質14（雜質A）、雜質20于原料藥和制劑中均存在，既是工藝雜質又是降解雜質，具體的含量變化見圖4。強破壞條件下（強酸、強堿、強氧化、高溫、光照）主要產生的降解雜質為雜質14（雜質A），見圖5，提示鹽酸米諾環素產品在生產、貯存、運輸過程中要注意避光，控制溫度，才能有效保證產品的質量。

在法檢過程中（圖6），C家企業雜質A均值高于其他4家企業，根據該企業的提供的生產工藝，在預混之前應對預膠化淀粉進行70～80 ℃的高溫干燥，推測制粒過程如果該輔料冷卻不徹底，會導致雜質A增加。A家企業的雜質A處于第二高，據梅芊等[11]2018年國評質量分析，微丸膠囊因采用濕法制粒、擠出滾圓成微丸、60 ℃加熱烘干等工藝，會增加雜質含量升高的風險，片劑制備工藝亦有濕法制粒、干燥等環節，所以再次提醒企業在生產過程中應關注高溫干燥環節。

（2）雜質結構推斷：對穩定性試驗過程中出現的15個雜質進行了結構解析。根據歐洲藥典系統適用性溶液定位，確定7個已知雜質結構，并且參照EP11.0版鹽酸米諾環素有關物質項下列出的9個雜質結構，采用LC/MS共推斷出其他9個雜質的結構，各雜質編號依次對應色譜圖3上的編號，見表3。

（3）原料藥和制劑的雜質譜對比：由前期調研可知，本次國家評價性藥品抽檢抽到的制劑原料藥均來自國外同一家企業，僅生產批號不同。檢測從A家和D家企業共征集到的5批原料藥，以及相對應批次的制劑，具體的雜質譜如表4所示。結果表明，原料藥工藝較為穩定，鹽酸米諾環素制劑的雜質主要來源于原料藥，所以原料藥的生產、運輸、儲存是保證制劑質量的關鍵。

（4）包裝形式對雜質含量的影響：5家企業拆除外包裝后進行穩定性試驗，各個企業3個月內雜質個數及總雜變化情況如表5所示，微丸膠囊和片劑相較于粉末膠囊更為穩定，內容物同為粉末的B企業和C企業總雜變化量差異較大，說明采用雙鋁塑包裝可以增加制劑穩定性。

3.2.4 含量測定供試品溶液配制方法的改進

原方法規定“取裝量差異項下的內容物適量（約相當于米諾環素50 mg），研細，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水80 mL，超聲使鹽酸米諾環素溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液”。經過試驗驗證，B企業膠囊殼對主成分有不同程度的吸附，最高達1%；另外平均裝量偏低，也會導致含量測定結果偏低。

新方法采用全量轉移的方式（見“2.2.3”），降低膠囊殼吸附和平均裝量對含量測定結果的影響，能準確測定鹽酸米諾環素膠囊的真實含量，該方法在一致性評價審評工作中也獲得了認可，B企業過評后樣品均采用新方法進行供試品溶液的配制。18批樣品的測定結果見圖7，采用新方法進行供試品溶液配制后，含量測定結果均有一定程度的提高。

試驗過程中發現：B企業過一致性評價的樣品和未過一致性評價的樣品按照原供試品配制方式進行含量測定，過評后樣品的含量測定結果均值為98.4%，明顯增加，過評后的產品質量好于未過評的產品，這也是一致性評價審評工作的意義所在。綜上所述，為了準確地測定鹽酸米諾環素膠囊的含量，采用新的供試品溶液配制方式。

4 小結

本次抽檢結果顯示，96批產品合格率100%，說明鹽酸米諾環素口服固體制劑總體質量較好。探索性研究中針對B企業含量測定結果偏低的現象，優化了供試品溶液配制方式，能夠保證檢測結果的準確性；B企業過一致性評價后產品質量有所提升。

針對法檢過程中有關物質部分雜質分離不佳、色譜系統容易堵塞的問題，對方法進行了優化，并完善了雜質譜。實驗過程中發現企業在處方工藝中存在安全風險，溫度過高會導致雜質A增加，提示企業關注生產工藝細節，在貯存、運輸過程中要注意避光，控制溫度，保證產品質量。加速穩定性試驗證明，雙鋁塑包裝有助于制劑穩定性，建議企業進行雙鋁塑包裝。目前ChP 2020標準有關物質方法雜質分離個數有限，且只對雜質A及單個雜質進行了控制，建議對有關物質方法進行修訂。

參 考 文 獻

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收稿日期：2024-03-19

基金項目：2023年國家藥品評價性抽檢資助國藥監藥管（No. [2023]2號）

作者簡介：楊丹，女，生于1996年，碩士，研究方向為藥物分析，E-mail： 547721332@qq. com

*通信作者，E-mail： zjluser@126. com

第一作者：楊丹，女，生于1996年，藥師，2022年獲藥學碩士，現任江蘇省食品藥品監督檢驗研究院化藥室檢驗員，主要從事藥品質量控制工作，參與國家藥品抽檢工作，完成多項探索性研究課題。

通信作者：張錦琳，女，生于1982年，現任江蘇省食品藥品監督檢驗研究院主任藥師，中國藥科大學碩士生導師、中國藥學發展獎食品藥品質量檢測技術獎杰出青年學者獎獲得者。主要研究方向為現代藥物分析技術及其在藥物質量標準中的應用、仿制藥一致性評價等。起草《中國藥典》、《國際藥典》和進口標準幾十余個，積極將新技術新理念引入國標準，提高了標準的有效性、操作性和檢驗成本。主持和參與多個國家重大專項、省級課題。