鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液關(guān)鍵質(zhì)量屬性分析

摘要：目的 評價(jià)鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液部分關(guān)鍵質(zhì)量屬性對產(chǎn)品質(zhì)量的影響。方法 對鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液的溶液顏色檢測法、析晶-包材-不溶性微粒的相關(guān)性、元素雜質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行分析/評估，并對14家企業(yè)的187批抽驗(yàn)樣品進(jìn)行分析。結(jié)果 通過對樣品吸光度與色差值進(jìn)行相關(guān)性分析，以450 nm為檢測波長，建立了紫外可見分光光度法測定樣品溶液的顏色；綜合各企業(yè)、過效期和破壞實(shí)驗(yàn)樣品的測定結(jié)果，確定限度為A450不得過0.13。證明樣品析晶的難易程度與所采用包材表面的粗糙程度相關(guān)，按易發(fā)生析晶程度排序，直立式聚丙烯輸液袋＞三層及五層共擠膜＞玻璃瓶；析晶樣品復(fù)溶后，盡管目視無可見異物，但4～6 μm不溶性微粒數(shù)量顯著升高。采用ICP-MS法，測定樣品中10種可能引入的元素雜質(zhì)的含量，其含量均低于安全限度的30%。結(jié)論 采用紫外可見分光光度法測定樣品的溶液顏色更為方便、準(zhǔn)確；應(yīng)關(guān)注樣品析晶-復(fù)溶后引入的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)；不需格外關(guān)注由元素雜質(zhì)引入的風(fēng)險(xiǎn)。

關(guān)鍵詞：鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液；質(zhì)量評價(jià)；溶液顏色；結(jié)晶；元素雜質(zhì)

中圖分類號：R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

An analysis of critical quality attributes for moxifloxacin hydrochloride and sodium chloride injection

Li Yu， Hou Jinfeng， Liu Haitao， Kou Jinping， Liu Qi， Li Jiahui， Gao Lujuan， Leng Bihan， and Che Baoquan

（Beijing Institute for Drug Control， NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Generic Drugs， Beijing Key Laboratory of" Analysis and Evaluation on Chinese Medicine， Beijing 102206）

Abstract Objective To evaluate the effect of critical quality attributes on the pharmaceutical quality of moxifloxacin hydrochloride and sodium chloride injections. Methods The study investigated and evaluated the solution color test， the relationship between crystallization， packaging materials and particulate matter， and the risk of elemental impurities for moxifloxacin hydrochloride and sodium chloride injections. A total of 187 batches of samples from 14 companies were analyzed. Results By analyzing the correlation between the absorbance and color difference values， a UV-Vis spectrophotometry method was established to determine the color of the solution at 450 nm. Based on the results of samples from various companies， expired samples， and samples of stress tests， the limit of the absorbance at 450 nm was not more than 0.13. The study demonstrated that the degree of crystallization was related to the roughness of the surface of the packaging material. It’s found that crystallization was most likely to occur in upright polypropylene infusion bags， followed by three-layer and five-layer co-extruded films， and finally glass bottles. Although visible foreign matters were not observed after re-dissolution of crystallized samples， the numbers of particulate matter of 4～6 μm were significantly increased. Ten elemental impurities that were potentially introduced into samples were determined by using ICP-MS， and the contents were below 30% of safety limits. Conclusion UV-Vis spectrophotometry is a more convenient and accurate method for determining the solution color. It is worth noting the quality risks associated with crystallization and re-dissolution. There is no further pay attention to the risk introduced by elemental impurities.

Key words Moxifloxacin hydrochloride and sodium chloride injection; Quality evaluation; Solution color; Crystallization process; Elemental impurities

鹽酸莫西沙星為第四代喹諾酮類抗菌藥物，原研為德國拜耳公司。臨床主要用于治療成人（≥18歲）由敏感細(xì)菌引起的上呼吸道和下呼吸道感染，如慢性支氣管炎和社區(qū)獲得性肺炎等[1-3]。注射劑直接注射進(jìn)血液，屬于高風(fēng)險(xiǎn)劑型[4]。因此，2023年國家藥品抽驗(yàn)工作將鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液列為抽驗(yàn)品種，從24個省、自治區(qū)和直轄市的藥品生產(chǎn)、經(jīng)營和醫(yī)療單位抽取到187批次樣品，涉及15個生產(chǎn)企業(yè)（包含原研企業(yè)）。187批樣品標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)合格率為100%，但在檢驗(yàn)過程中除有關(guān)物質(zhì)外（有關(guān)物質(zhì)及含量測定方法另文已發(fā)表[5]），發(fā)現(xiàn)存在以下3個方面的問題：

（1）15家企業(yè)注冊標(biāo)準(zhǔn)中，13家企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)采用吸光度法測定溶液顏色，不同標(biāo)準(zhǔn)中的方法在測定濃度、稀釋劑、檢測波長和限度等方面均存在差異，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)缺乏檢測波長及限度的選擇依據(jù)。色差值法可更全面準(zhǔn)確反映樣品的顏色，但色差計(jì)通用性較差[6]。需建立能準(zhǔn)確地判斷鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液溶液顏色的方法，并制定合理的限度。

（2）本品說明書要求15 ℃以上保存，并強(qiáng)調(diào)樣品儲存溫度低于15 ℃時會發(fā)生沉淀，并且在檢驗(yàn)過程中觀察到部分企業(yè)樣品出現(xiàn)結(jié)晶現(xiàn)象[7-8]，需考察減少樣品析晶的方法。此外，形成的結(jié)晶再復(fù)溶后，雖然目視無可見異物，但仍可能存在目視無法觀察到的不溶性微粒[9]，需進(jìn)一步考察樣品析晶后的風(fēng)險(xiǎn)。

（3）15家企業(yè)的注冊標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)中，僅有兩個標(biāo)準(zhǔn)檢測元素雜質(zhì)，按ICHQ3D《元素雜質(zhì)指南》，需考查注射劑中元素雜質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)[10-11]。

本文針對上述問題開展研究，為制訂更為嚴(yán)謹(jǐn)?shù)乃幤焚|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器及試藥

1.1 儀器

Colori5型紫外-可見分光光度計(jì)-色差計(jì)（美國Xrite公司）；TU1901型紫外-可見分光光度計(jì)（北京普析通用公司）；BJPX-B250型生化培養(yǎng)箱（山東博科公司）；YB-2型澄明度檢測儀（天津天光公司）；GWJ-8型微粒檢測儀（天津天大天發(fā)公司）；Merlin Compact型場發(fā)射掃描電鏡（德國Zeiss公司）；iCAP Q型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國Thermo公司）。

1.2 試藥

BVⅢ級硝酸（批號211101，質(zhì)量分?jǐn)?shù)65%～68%）購自北京化學(xué)試劑研究所；金標(biāo)準(zhǔn)液（批號23D50012，質(zhì)量濃度1000 μg/mL）；鎘（批號22B039-1，質(zhì)量濃度1000 μg/mL）；鉛（批號227010-6，質(zhì)量濃度1000 μg/mL）；砷（批號22B006-1，質(zhì)量濃度1000 μg/mL）；汞（批號226020-1，質(zhì)量濃度1000 μg/mL）；鈷（批號226048-2，質(zhì)量濃度1000 μg/mL）；釩（批號222011-4，質(zhì)量濃度1000 μg/mL）；鎳（批號227009-5，質(zhì)量濃度1000 μg/mL）；鋰（批號227028-2，質(zhì)量濃度1000 μg/mL）；銻（批號225032-6，質(zhì)量濃度1000 μg/mL）；銅（批號225017-4，質(zhì)量濃度1000 μg/mL）；內(nèi)標(biāo)混合溶液（批號22DA0384；含元素：鉍（Bi），質(zhì)量濃度5 μg/mL；鍺（Ge），質(zhì)量濃度5 μg/mL；銦（In），質(zhì)量濃度5 μg/mL；镥（Lu），質(zhì)量濃度5 μg/mL； 鈧（Sc），質(zhì)量濃度10 μg/mL；碲（Te），質(zhì)量濃度25 μg/mL），以上元素標(biāo)準(zhǔn)液均購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心。

1.3 樣品

鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液為2023年國家藥品抽檢樣品，共計(jì)187批次，涉及15家生產(chǎn)企業(yè)，包含國內(nèi)生產(chǎn)企業(yè)14家，以及原研企業(yè)德國拜耳公司，規(guī)格：250 mL，鹽酸莫西沙星按C21H24FN3O4計(jì)0.4 g。

光照破壞樣品：①取樣品1，置3500 Lx光照箱中，照射30 d；②取樣品2，置室外自然光下放置28 d。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 建立溶液顏色檢測方法

利用紫外-可見分光光度計(jì)-色差計(jì)對《中國藥典》2020年版“溶液顏色檢查法”標(biāo)準(zhǔn)比色液測定，得到色差值（DE*、a*和b*）。以色差值（a*和b*）作為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)建立色系模型，結(jié)合色差值DE*對溶液的顏色色系進(jìn)行判定。檢測條件：光源：D65/10°視角；比色皿：10 mm；照明觀察條件：d/o（漫反射照明/垂直接收）條件；儀器透射測量精度：85%透過率條件下±0.2%。

選取15家企業(yè)的42批次鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液代表性樣品和光照破壞樣品，取適量原液直接測DE*值。以各企業(yè)注射劑樣品及光照破壞樣品DE*值為橫坐標(biāo)，同時在420～460 nm范圍內(nèi)，以樣品每隔10 nm的吸光度值為縱坐標(biāo)，分別進(jìn)行線性回歸分析。比較不同波長處吸光度值與DE*值的相關(guān)性，選取相關(guān)性最高的波長作為測定波長。在此波長下，分別對各企業(yè)的42批代表樣品進(jìn)行檢測，綜合代表樣品、過效期和破壞實(shí)驗(yàn)樣品的檢測結(jié)果，確定限度。

2.2 析晶-包材-不溶性微粒的相關(guān)性分析

從15家企業(yè)的鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液樣品中隨機(jī)抽取20個樣品，于4 ℃下放置，連續(xù)7 d觀察不同樣品中析出晶體的數(shù)量。

用掃描電鏡觀測15家企業(yè)使用的包材與藥液接觸面的表面特征，并進(jìn)行相關(guān)性分析。掃描電鏡參數(shù)：加速電壓5.0 kV，電子束電流1.48 pA；工作距離9.29 mm，掃描駐留時間1 μs；樣品噴金處理。

另抽取15家企業(yè)樣品各1批，于4 ℃下放置2周，觀察到樣品析出結(jié)晶后取出，室溫（約22 ℃）放置12 h，目視樣品中無可見異物后，比較低溫析晶復(fù)溶后的樣品與未經(jīng)低溫放置的樣品中4～6 μm的不溶性微粒差異。

2.3 元素雜質(zhì)分析

建立電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS），對15家企業(yè)的42批次代表性樣品中的元素雜質(zhì)進(jìn)行測定，測定元素種類包括全部1類雜質(zhì)和2A類雜質(zhì)以及3個在生產(chǎn)過程中涉及的元素雜質(zhì)。

對照品貯備液制備：精密量取鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL、鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液50 μL、砷標(biāo)準(zhǔn)溶液150 μL、汞標(biāo)準(zhǔn)溶液30 μL、鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液50 μL、釩標(biāo)準(zhǔn)溶液100 μL、鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液200 μL、銻標(biāo)準(zhǔn)溶液900 μL置10 mL塑料量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。精密量取100 μL上述溶液、鋰標(biāo)準(zhǔn)溶液25 μL、銅標(biāo)準(zhǔn)溶液30 μL，置同一10 mL塑料量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。

標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液制備：按表1進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線配制。

內(nèi)標(biāo)溶液的制備：精密量取內(nèi)標(biāo)混合元素標(biāo)準(zhǔn)溶液各100 μL置100 mL容量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。

供試品溶液的制備：精密量取本品625 μL，置10 mL塑料量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。

參照2020版《中國藥典》四部通則電感耦合等離子質(zhì)譜法進(jìn)行樣品測定。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1 建立溶液顏色檢測方法

3.1.1 樣品色系判定

采用色差計(jì)法對15家企業(yè)的42批次代表樣品進(jìn)行測定，各企業(yè)樣品的DE*值均在31.44～32.21之間。觀測各樣品的溶液顏色在色系模型中的位置（圖1），諸樣品在色系模型中均在綠黃色系的左邊，更貼近綠黃色系，因此可以判定樣品的溶液顏色歸屬為綠黃色。

3.1.2 紫外可見分光光度法檢測波長的選擇

以各企業(yè)注射劑樣品及光照破壞樣品的DE*值為橫坐標(biāo)，相應(yīng)波長下的吸光度值為縱坐標(biāo)，分別進(jìn)行線性回歸分析。由相關(guān)系數(shù)結(jié)果可見，450 nm波長下樣品的吸光度值與DE*值的相關(guān)系數(shù)最大（表2），即該波長處的吸光度值與DE*值的相關(guān)性好于其他波長，因此選擇450 nm作為溶液顏色的檢測波長。

3.1.3 限度確定及樣品測定

選擇450 nm作為檢測波長，對15家企業(yè)的42批樣品進(jìn)行測定，其吸光度值（A450）在0.1103～0.1193之間。同時，測定過效期樣品，其A450值仍在此范圍內(nèi)（表3）。現(xiàn)行鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液注冊標(biāo)準(zhǔn)中采用450 nm波長檢測樣品的顏色，存在3個限度，分別為0.14、0.15和0.18，均高于本文對樣品及過效期樣品的測定值。按本文方法，測定光照破壞樣品1和樣品2的A450值（表3），可見，在無外包裝材料保護(hù)下，樣品置3500 Lx光照箱中照射30 d的A450值為0.1369；在室外自然光下放置28 d的樣品溶液明顯變黃（圖2），A450值為0.1771。

結(jié)合樣品測定數(shù)據(jù)，認(rèn)為以在3500 Lx光照箱中照射30 d的樣品的吸光度值作為鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液溶液顏色的上限，即A450不得過0.13，較現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)更為嚴(yán)謹(jǐn)。

3.2 析晶-包材-不溶性微粒的相關(guān)性分析

3.2.1 樣品低溫情況考察

連續(xù)7 d觀察不同企業(yè)鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液在4 ℃放置樣品出現(xiàn)析晶的數(shù)量（表4），其中一家企業(yè)產(chǎn)品同時使用玻璃瓶及三層共擠膜兩種包結(jié)果表明，不同樣品出現(xiàn)析晶的早晚及多少與包材相關(guān)：使用直立式聚丙烯輸液袋的產(chǎn)品最早出現(xiàn)析晶，且出現(xiàn)析晶的樣品數(shù)最多；使用三層或五層共擠膜的產(chǎn)品稍晚，出現(xiàn)析晶的樣品數(shù)也少于使用直立式聚丙烯輸液袋的產(chǎn)品；使用玻璃瓶的產(chǎn)品第4天才出現(xiàn)析晶，且出現(xiàn)析晶的樣品量最少。采用直立式聚丙烯輸液袋的樣品較使用玻璃包材的樣品更易發(fā)生析晶，提示包材與樣品的析晶現(xiàn)象具有相關(guān)性。目前，15家企業(yè)產(chǎn)品只有一家企業(yè)使用直立式聚丙烯輸液袋。

3.2.2 掃描電鏡分析包材表面

采用掃描電鏡法觀察不同企業(yè)使用的包材與藥液接觸面的表面特征。原研企業(yè)拜耳與3家國內(nèi)企業(yè)使用玻璃包材，其余企業(yè)使用的包材有直立式聚丙烯輸液袋、三層共擠膜和五層共擠膜。

由掃描電鏡圖可見，直立式聚丙烯輸液袋表面最為粗糙，其次是三層共擠膜、五層共擠膜，玻璃包材表面最為光滑。結(jié)合樣品低溫時的析晶結(jié)果，認(rèn)為可能是由于直立式聚丙烯輸液袋材質(zhì)較三層和五層共擠膜硬，在運(yùn)輸、貯藏過程中更易因碰撞產(chǎn)生折痕，使得表面更為粗糙，易形成晶種發(fā)生析晶現(xiàn)象。三層共擠膜及五層共擠膜較直立式聚丙烯輸液袋表面更為光滑，玻璃材質(zhì)表面最為光滑且不易變形，因而不易發(fā)生析晶現(xiàn)象。建議使用直立式聚丙烯輸液袋的企業(yè)考慮析晶導(dǎo)致的產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)。

3.2.3 析晶與不溶性微粒的相關(guān)性分析

取15家企業(yè)的樣品各1批次，經(jīng)析晶-復(fù)溶-目視觀測無可見異物后，測定樣品中4～6 μm的不溶性微粒，并與未經(jīng)低溫放置的正常樣品比較（表5），可見，樣品析晶再復(fù)溶后， 4～6 μm的微粒數(shù)較正常樣品提高了近百倍，存在一定風(fēng)險(xiǎn)。

3.3 元素雜質(zhì)分析

3.3.1 限度

參考ICH Q3D《口服、注射和吸入給藥途徑的元素雜質(zhì)的安全性評估原則》中對注射劑的要求，結(jié)合注射劑中常用元素的每日允許暴露量和本品日最大攝入量，折算成鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中各元素雜項(xiàng)的濃度限度（表6）。

3.3.2 樣品測定結(jié)果

對15家企業(yè)的42批次代表樣品中的元素雜質(zhì)進(jìn)行測定，各元素雜質(zhì)的最大值與限度見表7。可見，所有樣品中10種元素雜質(zhì)的濃度最大值為限度值的4.4%，按ICHQ3D《元素雜質(zhì)指南》規(guī)定，如樣品結(jié)果低于限度的30%，則不需要關(guān)注元素雜質(zhì)引入的風(fēng)險(xiǎn)。提示鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中的諸元素雜質(zhì)均得到較好的控制。

4 結(jié)論

本文的研究結(jié)果表明，采用450 nm作為檢測波長，能夠準(zhǔn)確反映樣品溶液顏色的變化，采用本研究設(shè)立的限度標(biāo)準(zhǔn)，較目前各注冊企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的限度更為嚴(yán)謹(jǐn)。本文建立的溶液顏色檢查方法既具有色差計(jì)發(fā)的專屬性，又具有紫外分光光度法的普適性，是測定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液溶液顏色的理想方法。

本文的研究發(fā)現(xiàn)，采用直立式聚丙烯輸液袋包裝的鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液較采用三層及五層共擠膜和玻璃瓶包裝的樣品更易產(chǎn)生析晶現(xiàn)象，且發(fā)生析晶的樣品，復(fù)溶后溶液中4～6 μm的不溶性微粒數(shù)顯著升高，存在潛在風(fēng)險(xiǎn)。

本文按ICHQ3D《元素雜質(zhì)指南》，采用ICP-MS法分析鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中10種可能引入的元素雜質(zhì)的含量。測定結(jié)果顯示，元素雜質(zhì)在產(chǎn)品中均得以較好地控制。

參 考 文 獻(xiàn)

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收稿日期：2024-11-19

基金項(xiàng)目：2023年國家藥品評價(jià)性抽檢資助國藥監(jiān)藥管（No. [2023]2號）

作者簡介：李彧，女，生于1993年，檢驗(yàn)員，主要研究方向?yàn)樗幬锓治觯珽-mail： liyuyjy@163.com

*通信作者，E-mail： chebaoq_21@163.com

第一作者：李彧，女，生于1993年，藥師，2024年獲藥物分析學(xué)碩士，現(xiàn)北京市藥品檢驗(yàn)研究院抗生素室檢驗(yàn)員，主要從事藥品質(zhì)量控制工作，完成抗生素和化學(xué)藥品的國家評價(jià)性抽驗(yàn)工作，曾多次參與或承擔(dān)藥典標(biāo)準(zhǔn)提高課題。

通信作者：車寶泉，男，生于1973年，博士，現(xiàn)任北京市藥品檢驗(yàn)研究院抗生素室主任。主持承擔(dān)多項(xiàng)科技部重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)和北京市科技計(jì)劃項(xiàng)目。在國內(nèi)外刊物上發(fā)表學(xué)術(shù)論文90余篇，其中SCI及EI論文10篇，國家發(fā)明專利授權(quán)10項(xiàng)。