天津市市售經(jīng)濟(jì)貝類中麻痹性貝類毒素污染狀況調(diào)查

麻痹性貝類毒素（paralyticshellfishpoison，PSP）是一種強(qiáng)烈的神經(jīng)毒素，耐酸性高，被人體攝入后無(wú)法立即分解代謝。如果攝入量較大，會(huì)引起頭暈惡心、肌肉麻痹、呼吸困難等癥狀，最終導(dǎo)致死亡。目前國(guó)內(nèi)外已廣泛開展了PSP毒理學(xué)研究。例如，Andrinolo等[1-2]在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行PSP 毒性試驗(yàn);Garcia等[3]在PSP中毒死亡患者中獲取組織和體液樣本進(jìn)行尸檢分析，以及利用人肝微粒體實(shí)現(xiàn)PSP在體外連續(xù)氧化和葡萄糖醛酸化[4]等。然而對(duì)于PSP，科學(xué)家至今尚未研制出特效解毒藥劑或預(yù)防疫苗，人體攝入該毒素后只能依靠自行代謝。

世界上許多沿海海域均發(fā)生過由水華、赤潮等引起的PSP感染以及相關(guān)人類中毒事件。尼加拉瓜甚至靠近北極圈的冰島都在當(dāng)?shù)刭O貝中檢測(cè)到 PSP^[5-6] 。我國(guó)渤海海域位于暖溫帶，其中的天津港經(jīng)貿(mào)航運(yùn)遍布全球，往來(lái)頻繁的海上運(yùn)輸和貿(mào)易進(jìn)一步促進(jìn)了該海域不同藻類的引入和擴(kuò)散。據(jù)統(tǒng)計(jì)7，截至2019年，渤海灣共發(fā)現(xiàn)17種外來(lái)浮游植物，其中包含產(chǎn)PSP的有毒藻類鏈狀亞歷山大藻（Alexandriumcatenella）和塔瑪亞歷山大藻（A.tamarense）。這些藻類主要靠壓載水傳播，也可通過依附于海產(chǎn)品、海流傳播或自我擴(kuò)散。近幾年，毗鄰該海域的河北省沿海城市頻頻發(fā)生PSP中毒事件，均發(fā)生在4月底至5月中旬。河北省相關(guān)政府部門也會(huì)在每年5一8月發(fā)布食用毛蚶（Scapharcasubcrenata）紫貽貝（Mytilusgalloprovincialis，俗稱海虹）等貝類的安全警示。天津市對(duì)貝類的需求量很大，尤其在夏季，貝類產(chǎn)品深受消費(fèi)者青睞，當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)上銷售的經(jīng)濟(jì)貝類主要來(lái)自山東、河北、遼寧等省的相關(guān)養(yǎng)殖海域。

為了解天津市場(chǎng)銷售的經(jīng)濟(jì)貝類中PSP的污染狀況，項(xiàng)目組于2019—2023年每年4—8月在天津市大型水產(chǎn)批發(fā)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)等地采集主要經(jīng)濟(jì)貝類樣品，對(duì)這些貝類樣品的麻痹性貝類毒素含量進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，旨在摸清不同貝類的染毒含量變化趨勢(shì)，并在每年P(guān)SP高發(fā)期進(jìn)行監(jiān)測(cè)，適時(shí)提出預(yù)警，防止食用貝類中毒事件在天津發(fā)生。

1 材料和方法

1. 1 試驗(yàn)材料

1. 1. 1 樣品采集和處理

2019—2023年，每年4—8月在天津市大型水產(chǎn)批發(fā)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)［金元寶濱海農(nóng)產(chǎn)品交易市場(chǎng)、何莊子批發(fā)市場(chǎng)、博疆菜市場(chǎng)（原資水道海鮮市場(chǎng)）］以及渤海灣天津海域（漢沽海域 N38^° 58.00^′.E117^°52.00^′ ， N38^°58.00^′ / E117^°57.00^′ N38^°58.00^′ ） E118^°02.00^′ ；大港海域 N38^°48.00^′ 、 ， N38^°48 ： 00^′ 了 E117^°54. 50'， N38^° 48.00^′.E118^°02.00^′? 采集14種貝類樣品。采集樣品共計(jì)370個(gè)，均為當(dāng)?shù)刂饕?jīng)濟(jì)貝類（見表1）。按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)貝類中麻痹性貝類毒素的測(cè)定》（GB5009.213—2016）[8]第5.2節(jié)中的規(guī)定處理樣品：首先用清水將貝類樣品外表面洗凈，切斷閉殼肌，開殼，用蒸餾水淋洗其內(nèi)部，去除泥沙及其他異物;取出貝肉;收集約 200g 貝肉分散置于篩子中瀝水 5min ;將貝肉充分均質(zhì)。若樣品不能及時(shí)檢測(cè)，于 -18°C 以下保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 1.2 儀器和材料

試驗(yàn)所用儀器和材料主要有：MultiskanFC酶標(biāo)儀（Thermo）、SQP電子天平（Sartorius）、VORTEX-GENIE2旋渦混合器（Scientific Industries）3-18KS離心機(jī)（SIGMA）、麻痹性貝類毒素酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒（Abraxis）

1.2 檢測(cè)方法

樣品前處理：向燒杯中加入 10g 樣品和10mL0.1mol/L 的HCl，煮沸并攪拌 5min ;冷卻后在 4^°C 條件下以 3500r/min 離心 10min ，收集上清液，調(diào)整 pH 至4.0以下；取 100μL 上清液，稀釋至 10mL ，待測(cè)。

按照ELISA試劑盒使用說明書的檢測(cè)步驟進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。每個(gè)質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液及每個(gè)樣品均做平行樣。用酶標(biāo)儀 450nm 下測(cè)量吸光度值（OD），取平均值。以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度為 x 軸，以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的百分比吸光度值（用其他標(biāo)準(zhǔn)品平均吸光度值除以零標(biāo)準(zhǔn)的平均吸光度值乘以 100% ）為 y 軸構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的百分比吸光度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取結(jié)果，再乘以稀釋倍數(shù)得到最終結(jié)果。所用試劑盒均置于 冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 結(jié)果判定

根據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)貝類中麻痹性貝類毒素的測(cè)定》（GB 5009.213—2016）[8]中的標(biāo)準(zhǔn)，“任何麻痹性貝類毒素含量值大于 800μg/kg 的樣品即被認(rèn)為是有害的，對(duì)人類食用不安全”，以結(jié)果 800μg/kg 為限量，以試劑盒建議 lt;4μg/kg 為陰性未檢出，進(jìn)行結(jié)果判定。

2 結(jié)果和分析

2.1 貝類污染基本狀況

麻痹性貝類毒素污染狀況調(diào)查結(jié)果顯示（見表2）。在采集的14種共370份貝類樣品中，共有141個(gè)樣品檢出PSP，檢出率為 38.11% ，檢出樣品的含量為 4.05～79.24μg/kg ，均值為17.83μg/kg ，沒有超過限量值 800μg/kg 的樣品。所有樣品中，檢出率前幾位的品種由高到低依次為毛蚶、櫛孔扇貝、紫貽貝、長(zhǎng)牡蠣、黃蜆。其中毛蚶樣品的檢出率為 82.00% ，含量在 4.19～79.18μg/ kg ，均值為 26.18μg/kg ；櫛孔扇貝樣品的檢出率為 72.97% ，含量在 4.05～79.24μg/kg ，均值為20.88μg/kg ;紫貽貝樣品的檢出率為 50.00% ，含量在 7.64～75.90μg/kg ，均值為 31.56μg/kg 。

2.2 不同貝類PSP污染狀況

采集到的貝類樣品主要可分為11種（日本鏡蛤、西施舌、血蚶統(tǒng)稱為其他蛤，因數(shù)量少，在此不作統(tǒng)計(jì)），其中PSP檢出率最高的是毛蚶，達(dá)82.00% ，檢出率由高到低依次為：毛蚶、櫛孔扇貝、紫貽貝、長(zhǎng)牡蠣、黃蜆、四角蛤蜊、縊蟶、文蛤、菲律賓蛤仔、脈紅螺、青蛤。青蛤樣品的檢測(cè)結(jié)果均為陰性（見圖1）。PSP含量檢測(cè)均值最高的是紫貽貝，達(dá) 31.56μg/kg ，含量均值由高到低依次為：紫貽貝、毛蚶、櫛孔扇貝、縊蟶、黃蜆、長(zhǎng)牡蠣、脈紅螺、菲律賓蛤仔、四角蛤蜊、文蛤、青蛤（見圖2）。

2.3 不同時(shí)間PSP污染分布狀況

2019年共采集貝類樣品24份，包含13份紫貽貝樣品和11份其他品種，其中有4份紫貽貝樣品檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，檢出率為 16.67% ，檢測(cè)均值為 31.77μg/kg 。2020年共采集貝類樣品82份，檢出率為41. 00% ，檢測(cè)均值為 。2021年共采集貝類樣品109份，檢出率為43.12% ，檢測(cè)均值為 10.64|μg/kg 。2022年共采集樣品100份，檢出率為 28.00% ，檢測(cè)均值為12.80μg/kg 。2023年共采集樣品55份，檢出率為 50.91% ，檢測(cè)均值為 10.33μg/kg （見圖3）。

不同月份貝類PSP的污染狀況見表3、圖4。由表3可見，在渤海海域PSP高發(fā)期的4—8月，4月份PSP檢出率最低，為 25.93% ，但平均含量最高，污染主要來(lái)自紫貽貝、櫛孔扇貝、毛蚶樣品；6、7月PSP檢出率較高，分別達(dá)到 46.38% ！43.59% ；而8月份PSP檢出率又呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。由圖4可見，4—7月紫貽貝PSP平均含量始終保持在較高水平，到8月份才降至較低；櫛孔扇貝PSP平均含量則是由4月份的最高值逐漸下降，至7、8月份降至較低水平；蟶PSP平均含量同樣也是4月份最高，而后呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)；毛蚶PSP平均含量則是有逐漸升高的趨勢(shì)，在8月份達(dá)到最高;其他種類的PSP平均含量均維持在較低水平。

3 討論

麻痹性貝類毒素（PSP）是公認(rèn)對(duì)人體健康危害最嚴(yán)重的神經(jīng)毒素之一，至2010年已研究出57種毒素及衍生物，主要產(chǎn)生自亞歷山大藻屬（Alexandriumspp.）[io]、扁甲藻屬（Pyrodiniumspp.）[']和裸甲藻屬（Gymnodinium spp.）[1]這3類海洋甲藻。有學(xué)者[13對(duì)1977—2018年渤海灣發(fā)生的赤潮進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，在2016年鏈狀亞歷山大藻曾引發(fā)2次赤潮，而同年4月底，河北省秦皇島發(fā)生海虹（紫貽貝）中毒事件。2019年4月下旬至5月上旬，河北省秦皇島市、唐山市接連發(fā)生9起PSP中毒事件，說明每年4月起，渤海海域中的海水貝類攝食有毒藻類后在體內(nèi)累積的毒素含量已經(jīng)可以直接導(dǎo)致人體食用中毒。有學(xué)者[14]對(duì)渤海海域5個(gè)具有代表性的海水養(yǎng)殖區(qū)（萊山、萊州、漢沽、秦皇島和葫蘆島）定期采集的浮游植物和貝類樣品進(jìn)行了PSP分析，其中秦皇島和萊州的浮游植物樣品含有PSP的濃度較高，貝類樣品中PSP檢出率高達(dá) 98% 。在遼東灣已發(fā)現(xiàn)產(chǎn)PSP的有毒藻類有8種，且PSP在夏季風(fēng)險(xiǎn)較高[15]，所以在每年4—8月染毒高發(fā)期容易發(fā)生PSP中毒事件。盡管全球范圍內(nèi)都發(fā)生過PSP中毒甚至死亡事件，對(duì)PSP也進(jìn)行了大量的研究[16-17]，但人們對(duì)毒素來(lái)源始終知之甚少，目前仍局限于3種海洋藻類，是否有其他毒素來(lái)源還有待發(fā)現(xiàn)。

本研究對(duì)2019—2023年天津市售貝類中的PSP進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，結(jié)果表明，所有樣品均未超過800μg/kg 的食用安全標(biāo)準(zhǔn)，其中毛蚶、櫛孔扇貝、紫貽貝、長(zhǎng)牡蠣4種主要經(jīng)濟(jì)貝類的PSP檢出率和毒素含量相對(duì)較高，至8月，PSP檢出率均逐漸降低。貝類體內(nèi)PSP的感染和積累主要與暴露在有毒藻類環(huán)境的濃度、時(shí)間、溫度等因素有關(guān)，而在同一環(huán)境條件下，不同貝類自身累積和代謝毒素的效率也不盡相同。有些貝類對(duì)PSP吸收快、易累積，毒素含量可以迅速達(dá)到較高水平，排毒也較快。例如紫貽貝[18-19]在毒藻環(huán)境中暴露 ^1h ，其體內(nèi)的毒素水平就能達(dá)到并超過食用安全標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)限，但在8d后就排出了 50% 的體內(nèi)毒素;毛蚶 ^[20]12h 染毒含量即可達(dá)到峰值;櫛孔扇貝[2I]、長(zhǎng)牡蠣[22]體內(nèi)PSP的積累和排除速度相比貽貝較慢，含量更低；文蛤[23的染毒含量普遍較低，等等。本研究所采集的樣品中PSP含量普遍不高，可能是因?yàn)樵跓o(wú)毒藻環(huán)境的轉(zhuǎn)運(yùn)和暫養(yǎng)過程中，貝類自身代謝將PSP排出，降低了其體內(nèi)的毒素含量。盡管天津市售貝類PSP含量均未超標(biāo)，但部分貝類的PSP檢出率已超過50% ，為預(yù)防PSP中毒事件在天津消費(fèi)市場(chǎng)發(fā)生，保障消費(fèi)者的食用安全，對(duì)高發(fā)期貝類的PSP監(jiān)測(cè)是十分必要的，尤其應(yīng)加強(qiáng)對(duì)紫貽貝的預(yù)警監(jiān)測(cè)以及對(duì)毛蚶、櫛孔扇貝、長(zhǎng)牡蠣等貝類的長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)。

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Investigation of paralytic shellfish poison pollution in commercially sold shellfish in Tianjin

MA Dan1，GAO Lina1， ZHANG Peng2，BAI Ming1，ZHANG Hao ¹

（1. Tianjin Agricultural Ecological Environment Monitoring and Agricultural Product Quality Testing Center， Tianjin 300221， China; 2. Tianjin Beichen District Agricultural Development Service Center， Tianjin 3Oo061，China）

Abstract：To understand the contamination status of paralytic shelfish poison（PSP）incommercially sold shellfish in Tianjin，37O shelfish samples from 14 species were colected from large wholesale aquatic markets annually fromApril to August，from 2019 to 2023.The levels ofPSP were detected with the enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）method. Among 37O samples，141 samples were positive for PSP，yielding a detection rate of 38.11% . The contents of PSP ranged from 4.05 to 79.24μg/kg ，with an average value of 17.83μg/kg ，all of which were below the maximum permissible limit of 800μg/kg for safe consumption. The findings indicated that shelfish sold in Tianjin markets generally exhibited lowPSPconcentrations during the high-risk period from April to August each year.However，Scapharca subcrenata，Chlamys farri，Mytilus galloprovincialisand Crassostrea gigas showed highercontamination probabilitiesand toxin levels.To mitigate PSP poisoning risks，early-warning monitoring of M ：galloprovincialis and sustained monitoring of S subcrenata， C. farreri， C. gigas and other susceptible shellfish species are recommended.

Key Words： shellfish;paralytic shellfish poison（PSP）；Tianjin