高效液相色譜法同時測定食品中8種非留體抗炎藥

Simultaneous Determination of Eight Non-Steroidal AntiInflammatory Drugs in Food by High Performance Liquid Chromatography

LUO Haiyan， HE Xi^* ，YANG Fang， HAO Rui， YANG Fan， GU Jinhong （Bayinguoleng Mongolian Autonomous Prefecture Institute for Food and Drug Control， Korla 8410oo，China）

Abstract： A high-performance liquid chromatography method was established to determine the content of 8 kinds of non-steroidal anti-inflammatory drugs illegally added to food. 1g of the sample was weighed， 10mL of 1% glacial acetic acid methanol solution was added for ultrasonic extraction， separated by C₁₈ column （250mm× 4.6mm ， 5μm ），and thephosphoric acid aqueous solution with pH=2.5 wasused as mobile phaseAand methanol as mobile phase B for gradient elution，and the detection wavelength was 220nm ，and the external standard method was used for quantitative quantification.The results showed that the 8 NSAIDs had a good linear relationship with their corresponding chromatographic peak areas in the range of 0.5μg?mL^-1 to 20.0μg?mL^-1 ，and the correlation coefcients were all above 0.999.The method has good acuracy and precision，and is suitable forthe detection of non-steroidal anti-inflammatorydrugsinfood.

Keywords： high-performance liquid chromatography; non-steroidal anti-inflammatory drugs; food

非甾體抗炎藥（Non-Steroidal Anti-InflammatoryDrugs，NSAIDs）是一類非類固醇激素類藥物，臨床上被廣泛用于多種免疫功能紊亂炎性疾病及各種疼痛癥狀的緩解，副作用較為明顯，主要會累及胃腸及皮膚附件系統[1-4]。

目前在我國，患風濕性關節炎、骨刺骨痛、骨質增生等疼痛性疾病的人群較多。隨著人們健康意識的提高，為了避免用藥的不良反應，更多人群選擇功能食品和保健食品來緩解癥狀或者達到治愈目的。但部分不法商家為增強功效、獲取利益，在食品中非法添加化學藥品，嚴重危害消費者健康。購買人群在不知情的情況下長期服用該類功能食品或者與治療藥物同用，可能會產生藥物相互作用或作用疊加，大大增加產生毒副作用的風險，影響人體健康，甚至危及生命。《中華人民共和國食品安全法》規定，食品中不得添加藥物[5]，一經檢出則屬于非法添加。

常用的非法添加NSAIDs的檢測方法有液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜－串聯質譜法等，但檢出成分較單一。筆者建立了高效液相色譜法同時測定食品中8種非甾體抗炎藥含量的方法，旨在為食品中非法添加非甾體抗炎藥的篩查和行政監管提供技術支持，同時為后續相關研究提供參考。

1材料與方法

1.1材料、試劑與試劑

市售32批次樣品。

標準物質：安基比林（純度為 99.7% ）、對乙酰氨基酚（純度為 99.9% ）、阿司匹林（純度為99.8% ）、吡羅昔康（純度為 99.5% ）、酮洛芬（純度為 99.9% ）、塞來昔布（純度為 99.8% ）、雙氯芬酸鈉（純度為 100% ）、布洛芬（純度為 99.9% ），中國食品藥品檢定研究院。

LC-20AT型液相色譜儀（日本島津）；B5200S-DT超聲儀（上海必能信）XSE205DU型電子天平（梅特勒-托利多）；FE20型酸度計（梅特勒-托利多）。

1.2標準溶液的配制

標準貯備液I（ 1000μg?mL^-1 ）：精密稱取8種對照品各 10mg ，分別置于 10mL 容量瓶中，用 1% 冰乙酸甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻， 2～8°C 儲存備用。

混合標準貯備液Ⅱ（ 100μg?mL^-1 ）：精密量取上述對照品溶液各 2.5mL ，置于 25mL 量瓶中，用1% 冰乙酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻， 2～8°C 儲存備用。

混合標準曲線的制備：精密量取貯備液 ）0.50、1.00、2.50、 5.00mL 和 10.00mL 分別置于50mL 量瓶中，用 1% 冰乙酸甲醇溶液稀釋至刻度，配制成濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、 10.0μg?mL^-1 和 20.0μg?mL^-1 的混合標準系列溶液。

1.3 樣品處理

（1）固體樣品的處理。精密稱取 1.0g 樣品于20mL 具塞比色管中，精密加入 1% 冰乙酸甲醇溶液10mL ，渦旋 60s ，超聲處理 5min ，搖勻， 4000rmin^-1 離心 2min ，經微孔濾膜過濾，濾液作為待測溶液。

（2）液體樣品的處理。精密量取樣品 10mL 置于蒸發Ⅲ中，水浴加熱蒸干，用 8mL1% 冰乙酸甲醇溶液分3次溶解轉移至 10mL 量瓶中，定容至刻度。

搖勻，經微孔濾膜過濾，濾液作為待測溶液。

1.4儀器工作條件

島津Inertsil ODS-SP C₁₈ 色譜柱（ 250mm×4.6mm 5μm ）；柱溫： 30^cC ；檢測器：二極管陣列檢測器；流速： 1.0mL?min^-1 ；進樣量： 10μL 。以 pH=2.5 磷酸水溶液為流動相A，以甲醇為流動相B，梯度洗脫（表1）；檢測波長： 220nm 。

2 結果與分析

2.1流動相選擇

參考相關文獻[6-9]，分別考察 0.12% 的磷酸水溶液-甲醇、 0.12% 的磷酸水溶液-甲醇 + 乙腈（ 1：1 ，體積比）、 pH=3.0 的磷酸水溶液－甲醇作為流動相時，對目標物質分離效果的影響。結果顯示， 0.12% 的磷酸水溶液-甲醇 + 乙腈（ 1：1 ，體積比）作為流動相時，8種色譜峰均能出峰，但安基比林與對乙酰氨基酚兩個色譜峰，雙氯芬酸鈉與布洛芬兩個色譜峰的分離度達不到要求（ （?1.5 ）。此外，實驗發現 0.12% 的磷酸水溶液的 pH 值約為2.1，而島津InertsilODS-SP色譜柱使用時的 pH 值在 2.0～7.5 ，為了實現色譜柱的高效利用，選用 pH=2.5 的磷酸水溶液－甲醇作為流動相，其可實現8種非甾體抗炎藥組分的有效分離。

2.2 色譜柱的選擇

分別考察了島津Inertsil系列的 C₁₈ 、 C₈ 兩種色譜柱，結果顯示 C₈ 柱的色譜圖中對乙酰氨基酚、阿司匹林、吡羅昔康、安基比林拖尾，峰形較差，在色譜峰面積積分時不利于定量分析； C₁₈ 柱分離效果理想、峰形好、靈敏度高，對應的色譜圖見圖1。

2.3 溶劑的選擇

本文考察了甲醇、 50% 甲醇、 80% 甲醇以及 1% 冰乙酸甲醇溶液[10]，發現阿司匹林對照品在甲醇、80% 甲醇溶液中會降解，主要原因是阿司匹林與甲醇發生水解反應生成水楊酸和乙酸；吡羅昔康在50% 甲醇溶液、 80% 甲醇溶液中也會發生降解，故選擇 1% 冰乙酸甲醇溶液作為溶劑。

2.4線性關系、檢出限、定量限考察

按1.2項方法配制標準系列溶液，按1.4項條件進行色譜分析。以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得到線性回歸方程和相關系數。分別以3倍信噪比和10倍信噪比計算檢出限和定量限，結果見表2。8種對照品在 0.5～20.0μg?mL^-1 線性關系良好， rgt;0.999 。檢出限在 2.0～5.4mg?kg^-1 ，定量限在 5.3～20.8mg^-kg^-1 。

2.5 加標回收率和精密度

選取32批樣品中1批陰性樣品加標，制備6份同一質量濃度水平的加標樣品溶液，測定后計算回收率，結果見表3。8種對照品平均回收率在95.08%～ 110.25% ，表明該方法具有良好的準確度。

選取2批陽性樣品（1批檢出對乙酰氨基酚，1批檢出塞來昔布）分別加入相應對照品，制備成相當于標準曲線 5.0μgmL^-1 濃度水平的加標樣品溶液，平行測定6次，計算回收率和相對標準偏差（RelativeStandardDeviation，RSD），結果見表4。對乙酰氨基酚、塞來昔布回收率分別為 99.13% 、 108.44% RSD分別為 1.77% 、 1.04% ，表明陽性樣品回收率及重復性良好。

2.6 樣品檢測

采用本方法進行32批食品樣品檢測，結果顯示，27批樣品未發現8種非甾體抗炎藥；5批樣品中分別檢出了對乙酰氨基酚（ 78.5mg^.kg^-1 ）、塞來昔布（ 76.2mg^.kg^-1 ）、酮洛芬（ 52.1mg^.kg^-1 ）、安基比林（ 5.7mg^?kg^-1 ），且其中1批次樣品同時含有安基比林和對乙酰氨基酚。

3結論

本文建立了高效液相色譜法同時測定食品中8種非甾體抗炎藥的檢測方法。方法專屬性強、靈敏度高、線性好，且樣品制備操作簡便，滿足食品中非法添加的氨基比林、對乙酰氨基酚、阿司匹林、吡羅昔康、酮洛芬、塞來昔布、雙氯芬酸鈉和布洛芬8種非甾體抗炎藥的一次性同時檢測。本研究可大大降低檢測成本，提高檢測效率。

參考文獻

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