韭菜外植體無害化消毒試驗

韭菜屬于百合科蔥屬多年生宿根植物，原產于中國，又稱起陽草、長生韭、懶人菜等，在我國已有3000多年栽培歷史[1。韭菜育種方式包括常規有性雜交育種（不同基因型親本雜交，使優良基因重新組合，產生具有雙親優良性狀的后代）和誘變育種（用物理或化學因素誘導韭菜遺傳物質發生突變，從而產生新的性狀，從中篩選出優良變異個體，培育成新品種[2-3）、組培育種（利用植物細胞的全能性，在無菌條件下將韭菜的細胞、組織或器官培養成完整植株，并對培養過程中出現的變異進行篩選和培育，獲得新品種[4-5]）。組織培養技術應用于韭菜育種、保種，不僅可以縮短常規育種年限，還可以對田間發現的特異性植株進行保種、留種，同時為以后分子雜交育種、遺傳轉化工作打下基礎。

在組織培養中，常用氯化汞（升汞）溶液對外植體消毒。汞是重金屬，對環境具有持久性污染，可以通過空氣、水和土壤傳播，破壞生態系統平衡，影響植物和動物的生長和繁殖。用次氯酸鈉溶液消毒的研究報道較少。本試驗采用次氯酸鈉溶液消毒，通過探究時間和濃度對材料的影響，篩選對韭菜種子、花器官最合適的消毒辦法。

1材料與方法

1.1試驗材料試驗材料為河北省廊坊市農林科學院蔬菜研究所提供的韭菜種子、韭菜抽后尚未開放的花器官。選用MS（全配）培養基， pH 值 5.8，120^°C 滅菌 20min 。接種后放到培養間進行組織培養。

1.2 材料預處理

1）種子。選取需要組培的種子，自來水沖洗2min 后放入三角瓶中備用。

2）花器官。于開花期采回需要組培的花器官，加少許洗潔精，在流動的自來水下沖洗 _1～2h ，用濾紙吸干水分放入三角瓶中備用。

1.3外植體消毒方法

1）種子。將預處理的種子置于超凈工作臺，先用 75% 酒精沖洗3遍，再用 15% 次氯酸鈉溶液浸泡搖洗 7min ，然后用無菌水沖洗4遍后，加無菌水浸泡過夜；第2d，用 10% 次氯酸鈉溶液搖洗4，6，8，10min ，然后用無菌水沖洗4遍后，放入MS培養基中。7d后調查、計算外植體無菌率，篩選最佳消毒時間。

2）花器官。將預處理的花器官置于超凈工作臺，先用 75% 酒精沖洗3遍，再用 10% 次氯酸鈉溶液浸泡搖洗 3，5，7，9min ，然后用無菌水沖洗4遍，放入MS培養基中。7d后調查、計算外植體無菌率，篩選最佳消毒時間。

2結果與分析

如表1所示，韭菜種子對次氯酸鈉溶液耐受性較好，無菌率隨消毒時間增加而升高，消毒時間為 8min 和 10min 的無菌率均可達到 90% 以上。因此，韭菜種子用 15% 次氯酸鈉溶液浸泡搖洗 7min ，無菌水浸泡過夜后，再用 10% 次氯酸鈉溶液搖洗8min ，即可達到最佳消毒效果。

韭菜花器官比較鮮嫩，次氯酸鈉溶液對其損傷較嚴重，容易造成腐爛。經試驗，韭菜花器官在10% 次氯酸鈉溶液中，根據外植體自身長勢不同，耐受度不同，在消毒 7min 時，花器官無菌率可達 73.3% ，花苞頂端略變軟，其余部位仍比較硬實，整體損傷不大；當消毒時間延長到 9min 時，花器官損傷較重，無菌率有所下降，后期植物體長勢較弱。

表1次氯酸鈉溶液對韭菜種子、花器官消毒效果

3小結與討論

外植體消毒入瓶是組織培養的關鍵一環。根據本試驗，在不使用氯化汞溶液消毒的前提下，得到了韭菜花器官、種子的無菌材料。但次氯酸鈉溶液對綠色鮮嫩材料氧化性較強，其能殺菌消毒，也能對植物體造成損傷。因此，在使用次氯酸鈉溶液對外植體消毒時，首先要保證材料自身生長狀態良好，其次要把握好次氯酸鈉溶液的使用濃度與消毒時間，在消毒過程中仔細觀察材料的狀態，以探究最佳的消毒方式。本試驗中，韭菜種子用 15% 次氯酸鈉溶液浸泡搖洗 7min ，無菌水浸泡過夜后，再用 10% 次氯酸鈉溶液搖洗 8min ，可達到最佳消毒效果；韭菜花器官在10% 次氯酸鈉溶液中，其大部分外植體在消毒 7min 時可達最佳消毒效果。

參考文獻

[1]張明，呂愛琴，陳中府，等.我國韭菜資源研究現狀和種質創新研究建議[J].植物遺傳資源學報，2016，17（3）：503-506+516.

[2]符家平，矯振彪，焦忠久，等.中國韭菜育種研究進展[J]中南農業科技，2024，45（11）：226-229.

[3]王貞，喬保建，王利亞，等.韭菜育種的研究進展[J].江蘇農業科學，2014，42（3）：116-117.

[4]肖婉露，馬培芳，李延龍，等.韭菜緩慢生長法離體保存技術研究[J].中國瓜菜，2021，34（7）：71-75.

[5]葉青雷，馬云橋，劉海軍，等.野韭菜組織培養及快速繁殖研究[J].安徽農學通報，2021，27（11）：36-37.

[6]趙文玉，甘潤杰，陳文文，等.水環境中汞污染現狀與形態分析方法研究進展[J].農業環境科學學報，2024，43（10）：2200-2219.