“葉綠體色素提取和分離”實(shí)驗(yàn)的有效改進(jìn)

“葉綠體色素的提取和分離”實(shí)驗(yàn)利用葉綠體色素能溶于有機(jī)溶劑的特性將菠菜等綠葉中的色素提取出來，然后用紙層析法將其一一分離。但在實(shí)際操作過程中往往存在以下問題影響實(shí)驗(yàn)效果：

(1)學(xué)生難以準(zhǔn)確把握實(shí)驗(yàn)中需加入的CaCO和Si的量，因而使得到的濾液中混有CaCO和SiO使收集得到的濾液渾濁，從而影響熒光現(xiàn)象的觀察。

(2)用毛細(xì)吸管劃出的濾液細(xì)線粗，且線條不均勻，影響層析效果。

(3)用毛細(xì)吸管劃出的濾液細(xì)線淡，色素含量少，影響層析效果。

(4)有些學(xué)校不一定具備自制毛細(xì)吸管的條件。

針對以上問題，我在實(shí)踐中不斷探索、不斷進(jìn)取，對“葉綠體色素的提取和分離”實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了有效的改進(jìn)，并收到了顯著的效果。現(xiàn)將具體做法介紹如下。

1．實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)

1.1過濾方法的改進(jìn)

采用重復(fù)過濾的方法可提高葉綠體色素提取液中色素的純度和濃度。具體做法如下：

(1)取2個(gè)干凈試管置于試管架上，將起過濾作用的漏斗置于其中1個(gè)試管上；

(2)將研磨好的葉泥全部倒入漏斗中，用少量無水乙醇清洗研缽，并將清洗液一起倒入漏斗內(nèi)；

(3)將漏斗移到另一干凈的試管上，將第一次過濾后得到的濾液倒入盛有葉泥的漏斗內(nèi)再次進(jìn)行過濾；

(4)這樣反復(fù)多次過濾后，漏斗內(nèi)的葉泥殘?jiān)删G逐漸轉(zhuǎn)白，這說明葉泥中的色素已被充分提取出來，最終將得到澄清的濃綠色的色素提取液。

1.2劃線方法的改進(jìn)

采用色素涂片的方法劃濾液細(xì)線，省時(shí)、省料且實(shí)驗(yàn)效果明顯，具體做法如下：

(1)取2塊干凈的載玻片，在其中一塊載玻片上滴2滴色素提取液；

(2)取另一塊載玻片像制作血涂片那樣將2滴色素提取液推平，制成一張葉綠體色素涂片；

(3)略等片刻(約30左右)，取一張濾紙條在距末端1.5cm處對折，得到一對折線；

(4)用對折后的濾紙小心將載玻片上的色素全部擦干凈(操作時(shí)始終使對折線與載玻片相垂直)；

(5)當(dāng)載玻片上的色素被濾紙擦干凈后，將對折線反折后拉平，即可看到在距濾紙條下端1.5cm處有一條深綠色的濾液細(xì)線

2．實(shí)驗(yàn)改進(jìn)后的優(yōu)點(diǎn)

(1)采用多次重復(fù)過濾的方法，有利于將葉泥中色素充分提取出來，可提高色素提取液中色素的濃度，和純度。

(2)利用涂片法劃濾液細(xì)線，無需拉制毛細(xì)吸管，無需重復(fù)劃線，只需將濾紙折線在涂片上來回一擦即可完成“劃線”，省料、省工、省時(shí)。

(3)利用涂片法得到的濾液細(xì)線均勻細(xì)直。

實(shí)踐證明利用涂片法得到的濾液細(xì)線中色素含量高，顏色深，紙層析效果十分明顯。

3．涂片法劃線的原理

由于葉綠體色素具有不溶于水而溶于有機(jī)溶劑的特性，因此將2滴色素提取液制成涂片后，由于涂片上的無水乙醇很容易揮發(fā)，而溶于其中的色素卻均勻地殘留在載玻片上，又因提取液中含有的極少量水分(來自細(xì)胞液)，保證了涂片上色素的濕度，所以載玻片上的色素不會因?yàn)闊o水乙醇的揮發(fā)而干燥，這樣在略等片刻之后，即可將載玻片上的色素全部擦在濾紙折線上，既保證了色素的含量又保證了濾液細(xì)線的均勻細(xì)直，再進(jìn)行層析實(shí)驗(yàn)，效果非常理想。