醒腦靜對兔心肌缺血再灌注損傷的抗炎性因子和改善凝血－纖溶功能障礙的作用

摘要：目的探討醒腦靜預處理對心肌缺血再灌注損傷(MIRI)的抗炎性因子的影響和改善凝血纖溶功能障礙的作用。方法20只新西蘭兔隨機分成安慰劑組與醒腦靜組，各10只。結扎冠狀動脈造成MIRI模型，分別在冠狀動脈結扎前、結扎后1 h、再灌注后1 h，取心房血分別檢測腫瘤壞死因子－α(TNF－α)、組織型纖溶酶原激活物(t－PA)、纖溶酶原激活物抑制物－1(PAI－1)、肌酸激酶(CK)水平。同時觀察各組梗死范圍。結果 冠狀動脈結扎后醒腦靜組TNF－α、PAl－1、CK水平較安慰劑組顯著降低(P＜0.01)．心肌梗死面積顯著小于安慰劑組(P＜0.01)。結論醒腦靜預處理對MIRI有良好的抗心肌缺血再灌注損傷作用。

關鍵詞：醒腦靜；心肌缺血再灌注損傷；腫瘤壞死因子－α；組織型纖溶酶原激活物；纖溶酶原激活物抑制物－1

中圖分類號：R542.2 R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1672—1349(2007)04—0316—03

隨著靜脈溶栓、經皮冠狀動脈腔內成形術(PTCA)等技術治療急性心肌梗死的廣泛開展，心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI．)日益成為人們關注的熱點。MIRI是心臟缺血性疾病和心臟手術體外循環致病的病理生理基礎。心肌缺血預處理(ischemic preconditioning，IP)是指亞致死性缺血應激對隨后較長時間心肌缺血再灌注損傷產生保護性耐受的現象。MIRI的藥物性預處理及其作用機制的研究是一個熱點，而中藥對心臟保護作用的研究也愈來愈受到重視。本實驗通過采用兔急性心肌缺血再灌注模型，觀察醒腦靜預處理對MIRI有抗炎性因子和改善纖溶，縮小梗死面積及良好的心肌保護作用。

1 材料與方法

1.l 1材料腫瘤壞死因子－α(TNF－α)、肌酸激酶(CK)試劑盒由美國杜邦公司提供；內皮素(ET)試劑盒由北京福瑞生物有限公司提供；一氧化氮(NO)試劑盒由南京建成生物工程公司提供；醒腦靜注射液，每支20 mL，由無錫健宏藥業有限公司提供。

1.2 動物分組新西蘭兔20只，體重為(2.0～2.5)kg，雌雄不拘，由廣東省醫學實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(粵)2003—0002。將動物隨機分成安慰劑組與醒腦靜組，每組10只。

1.3 給藥方法實驗前1 h給安慰劑組動物灌服生理鹽水每只10 mL，醒腦靜組每只靜脈輸注1 mL/kg。

1.4 動物模型^[1，2]將兔用2％戊巴比妥鈉25 mg/kg作全身麻醉，沿胸骨正中切口打開胸腔，取右房血。剪開心包膜，在冠狀動脈前降支根部穿0號絲線，結扎之。關閉胸腔l h后，再開胸腔取右房血，放松結扎線，讓心臟再灌注1 h，再取右房血。然后處死動物，取出心臟。

1.5 生化指標的測定所采血液離心后取血清，－20℃以下保存，測定結扎前(T₁)、結扎后1 h(T₂)、再灌注后1 h(T₃)心房血TNF－α、纖溶酶原激活物抑制物－1(PAI－1)、組織型纖溶酶原激活物(t－PA)、CK水平。TNF－α水平測定采用放射免疫法，PAl－1、t－PA活性測定采用發色底物法，CK水平測定采用比色法。

1.6 心肌梗死范圍測定 將心臟用生理鹽水沖洗，切除心房，留下左心室，稱重測定左心室質量(LV)。從心尖到心基部平行將兔心室切成(0.3～O.5)em厚的組織片，放在1％的TTC溶液中，在37℃中染色，(5～7)min后立即用水沖洗，梗死區不著色，非梗死區被染成紅色。剪去非梗死區心肌，稱重測定心肌梗死區質量(infarction area weight，I)及并計算I/LV(％)。

1.7 壞死心肌及周圍心肌組織病理把心肌組織用1％甲醛固定，石蠟包埋，蘇木精一伊紅染色，光鏡400倍下選擇5個視野，觀察心肌形態結構。

1.8 統計學處理數據以均數±標準差

表示，計量資料組間比較采用t檢驗，以P＜O.05為有統計學意義。

2 結 果

2.1 醒腦靜對TNF－α、PAl－1、t－PA、CK的影響兩組兔結扎前血漿TNF－α、PAI－1、t－PA、CK水平均無統計學意義。冠狀動脈結扎后兩組TNF－α、PAI－l、CK水平均升高，其中以安慰劑組最明顯，與醒腦靜組比較有統計學意義(P＜0.01)。而安慰劑組t-PA下降，與醒腦靜組比較有統計學意義(P＜O.01)。詳見表1。

2.3 醒腦靜對兔心肌缺血再灌注損傷心肌形態的影響 安慰劑組有心肌間質出血、細胞變性、組織灶性壞死和炎性細胞浸潤，有較大范圍細胞凝聚、崩解。醒腦靜組則僅有少量炎性細胞浸潤和心肌閘質出血。3討論

MIRI是一個極其復雜的多因素、多途徑的病理生理過程。近幾年的基礎研究證實TNF－α參與了心肌缺血再灌注損傷的發生^[5]，TNF－α是一種多肽激素，具有廣泛的生物學效應，主要來源于停留在心肌內的單核一巨噬細胞及心肌細胞。TNF－α對凝血和纖溶系統的作用途徑或機制有幾方面：①TNF－α通過抑制內皮細胞合成凝血酶調節蛋白，破壞凝血抗凝平衡，抑制內皮細胞抗凝血機制。②TNF－α能刺激組織因子的表達與產生。③TNF－α損傷血管內皮細胞。④TNF－α可刺激內皮細胞分泌白細胞介素－1(IL－1)。⑤TNF－α作用于內皮細胞，可使其誘生血小板活化因子(PAF)。⑥TNF－α抑制纖溶反應。TNF－α可以使PAl－1活，陛增強，合成釋放增多。同時TNF－α還降低t－PA的分泌，從而導致機體纖溶活性低下促進血栓形成。TNF－α對內皮的作用總體上講是產生促炎癥及促凝血，抗纖溶反應。

纖溶系統由一系列酶組成，這些酶之間互相作用，互相抑制，在正常生理狀態下凝血與纖溶過程保持平衡。其中t－PA和PAl－1兩種酶的作用尤為重要。在許多病理情況下．PAI－1濃度增高是一種急性期反應。因此，觀察t－PA和PAI－1值的變化，可以評價纖溶系統的改變，亦間接地反映了血管內皮細胞的功能。有研究表明，凝血與纖溶系統的異常改變是導致冠狀動脈內血栓形成的重要原因之一^[4，5]。在冠狀動脈硬化性心臟病病人中，由于動脈粥樣硬化病變損傷血管內膜，粥樣斑塊內膜面的血管內皮細胞的完整性受到破壞，使其功能顯著減退。因而導致t－PA合成與釋放減少。同時，血管平滑肌細胞在內膜層大量增殖，也可加強抑制血管內皮細胞分泌t－PA，從而使局部的血管內膜纖溶功能減弱^[6]。當動脈粥樣硬化斑塊因各種原因而導致破裂時，促成凝血的物質生成增加，凝血系統從而被激活。同時，活化的血小板可通過釋放PAI－1而將機體的纖溶活性進一步削弱。由于以上的改變，影響了體內凝血與纖溶系統之間的平衡，從而導致冠狀動脈內血栓形成。

血清CK活性增加被認為是心肌細胞損傷最敏感的指標之一，與心肌壞死程度呈正相關，因此測定血清CK活性對于判斷心肌缺血損傷的程度和范圍很有價值^[7]。本實驗發現預先給予醒腦靜可保護心肌細胞，并減少心肌細胞死亡數量，明顯降低結扎冠狀動脈所致的血清CK活性。說明此方能很好地緩解心肌的缺血、缺氧現象，減輕再灌注對心肌的損傷，使酶的外漏減少在保護心肌細胞上起到很好的作用。本實驗采用的CCT染色法測定急性心肌梗死范圍的結果表明，與安慰劑組比較，醒腦靜組可明顯縮小心肌梗死面積。而在心肌形態的影響方面，醒腦靜組形態結構改變較輕，與CK水平和梗死面積相符。提示此方可防治缺咀再灌注損傷過程導致的心肌組織病理損傷，保持心肌細胞結構的完整性。

安宮牛黃丸是我國傳統藥物中最負盛名的急癥用藥，源自清代吳鞠通《溫病條辨》，由牛黃、犀角、麝香、珍珠、朱砂、雄黃、黃連、黃芩、梔子、郁金、冰片11味藥組成^[8]。麝香有辛溫香竄、辟穢通絡、活血散瘀的功效。冰片氣味芳香，助麝香之力，開竅通絡，行氣活血，止痙鎮痛。黃連、黃芩有清熱燥濕、瀉火解毒之功效^[9]。梔子可清瀉三焦之邪熱，起到涼血行氣、解毒作用。郁金化痰開竅，行氣活血，為化痰開郁通竅之要藥。醒腦靜是經科學提取，精制而成的新型中藥制劑(或稱類方)^[10]，亦具有通絡行氣、活血、化痰逐瘀之功效。

我國傳統醫學認為心肌梗死急性期特別是超急性期以痰濁血瘀熱結痹阻心脈，心陽痹阻不通，痰濁瘀毒為其主要病理。本研究大膽假設其治則應為通絡行氣、活血、化痰逐瘀。在此原則指導下率先將醒腑靜應剛于預處理心肌缺血再灌注動物模型，并探討其對心肌保護的作用機制。研究結果顯示，經醒腦靜預處理后能顯著降低TNF－α、PAI－1、CK上升水平，減緩t－PA下降水平，明顯縮小心肌梗死面積，保持心肌細胞結構的完整性。表明醒腦靜預處理能抗炎性因子，明顯減少內皮細胞損傷。改善內皮功能障礙，改善凝血一纖溶功能障礙，防止血栓形成，改善冠脈循環，發揮抗心肌缺血再灌注損傷作用。同時也證實了通絡行氣、活血、化痰逐瘀治則的可行性，為臨床應用研究提供了理論基礎，也提示醒腦靜在心血管疾病治療方面有著較為廣闊的應用前景。

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作者簡介：許耘紅(1973—)，女，主治醫師，現工作于廣州醫學院附屬第三醫院(郵編：510303)；吳沃棟、陳晞明、李文杰，工作于廣州醫學院附屬第三醫院。

(本文編輯 郭懷印)

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