流式細(xì)胞儀檢測急性病毒性心肌炎Ｔ淋巴細(xì)胞亞群及ＮＫ細(xì)胞的意義

摘要：目的觀察急性病毒性心肌炎T淋巴細(xì)胞亞群及自然殺傷(NK)細(xì)胞的意義，探討其發(fā)病機(jī)制。方法 采用流式細(xì)胞術(shù)對急性病毒性心肌炎病人(觀察組)進(jìn)行CD₃、CD₄、CD₈和NK細(xì)胞淋巴細(xì)胞亞群檢測，并設(shè)正常人群作對照組。結(jié)果觀察組CD8和NK明顯高于對照組(P＜0.01)，CD₄和Th/Tc比值明顯低于對照組(P＜0.01)，觀察組CD₃的變化不明顯(P＞0.05)。結(jié)論急性病毒性心肌炎病人淋巴細(xì)胞亞群中CD₄、CD₈和NK細(xì)胞亞群異常增殖；而且Th/Tc比例失衡，揭示細(xì)胞免疫功能紊亂與急性病毒性心肌炎有關(guān)。

關(guān)鍵詞：病毒性心肌炎，急性；T淋巴細(xì)胞亞群；NK細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)

中圖分類號：R542.2 R256.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1672—1349(2007)04—0348—02

急性病毒性心肌炎(acute viral myocarditis，AVMC)的發(fā)病機(jī)制至今未完全清楚，最近，病毒性心肌炎(viral myocarditis，VMC)與細(xì)胞免疫功能的關(guān)系頗受關(guān)注。有資料認(rèn)為，病毒性心肌炎心肌病變的形成，除病毒直接作用外，還與自身免疫反應(yīng)有關(guān)^[1]。利用流式細(xì)胞儀對成人急性病毒性心肌炎病人淋巴細(xì)胞亞群的CD₃、CD₄、CD₈、自然殺傷(NK)細(xì)胞等進(jìn)行了檢測，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2005年1月—2006年9月診斷為急性病毒性心肌炎病人23例(觀察組)，均符合診斷急性病毒性心肌炎的標(biāo)準(zhǔn)^[2]。其中男9例，女14例，年齡(16～45)歲，平均27.5歲，監(jiān)測前未接受激素及免疫調(diào)節(jié)劑治療。對照組選取健康志愿獻(xiàn)血者20名，其中女10名，男10名，年齡(24～39)歲，平均31.1歲

1.2 試劑與儀器 流式細(xì)胞儀為BD公司生產(chǎn)的FACSCal-ibur，離心機(jī)為法國JUNAN生產(chǎn)的CR422，檢測淋巴細(xì)胞亞群的CD₃、CD₄、CD₈、NK細(xì)胞的熒光標(biāo)記抗體、紅細(xì)胞溶解素均為BD提供。

1.3 檢測方法利用流式細(xì)胞分析技術(shù)進(jìn)行檢測。對照組和觀察組分別于早晨抽取空腹外周血2 mL，EDTA－K₂抗凝，于采血2 h內(nèi)檢測。取6個試管分別加入FITC－CD₄₅/PE－CD₁₄、FITC－IgGl/PE－IgGl、FITC－CD/PE－CD₁₉、FITC－CD₃/PE－CD4、FITC－CD₃/PE－CDk、FITC－CD₃/PE－CD₁₆＋56各20 uL，加EDTA－K2抗凝全血100 uL，混勻置室溫暗處20 min，然后加入紅細(xì)胞溶解素2 mL溶解紅細(xì)胞8min，300 r/min離心5 min，用PBS洗滌2次后，加0.5 mL含1％多聚甲醛PBS固定，待測。儀器調(diào)整良好后測標(biāo)本，以FITC－IgGl/PE～I(xiàn)gGl作為同型對照，計數(shù)1×10⁴個細(xì)胞。

l.4 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 10.0統(tǒng)計學(xué)軟件，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差

表示，兩組比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

與對照組相比，觀察組CD3的變化不明顯(P＞0.05)。CD₄、Th/Tc比值明顯低于對照組(P＜0.01)，CD₈、NK細(xì)胞明顯高于對照組(P＜0.01)。詳見表1。

3 討 論

病毒性心肌炎是病毒侵犯心臟引起的心肌實(shí)質(zhì)或間質(zhì)、局限性或彌漫性病變，其病理變化主要是廣泛或散在的心肌細(xì)胞壞死及周圍間質(zhì)細(xì)胞浸潤^[3]。近年來此病發(fā)病率有增高趨勢，大多數(shù)病人可完全恢復(fù)正常心功能，少數(shù)病人臨床癥狀可改善，但會遺留心功能不全，極少數(shù)病人進(jìn)行性心臟擴(kuò)大，可能轉(zhuǎn)化為擴(kuò)張性心肌病、慢性心力衰竭、死亡或需心臟移植^[4]，而該疾病至今仍無特效療法，從病理生理學(xué)角度來看，早期以心肌細(xì)胞的直接損傷為主，后期以免疫介導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷為主，對其免疫機(jī)制及感染因素研究，對治療病毒性心肌炎有很大幫助。

通過分子模擬的原理證實(shí)了T細(xì)胞在心肌炎中的重要作用^[5]。T細(xì)胞通過識別宿主和微生物的抗原表位而促進(jìn)自身免疫反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展。心肌損傷時，作為隱蔽抗原的肌凝蛋白就會釋放出來與免疫系統(tǒng)接觸，激活對它有交叉反應(yīng)的T細(xì)胞，從而引發(fā)自身免疫反應(yīng)。

本組研究顯示病毒性心肌炎發(fā)病過程中，病人細(xì)胞免疫檢測指標(biāo)下降。細(xì)胞免疫主要包括T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等，T淋巴細(xì)胞是重要的免疫細(xì)胞，在自身免疫性炎癥中起重要作用。在胸腺中發(fā)育成熟后進(jìn)人外周血中。CD為細(xì)胞分化抗原，是細(xì)胞表面的一種標(biāo)記。根據(jù)T細(xì)胞不同的表面標(biāo)記和功能可分為CD₃、CD₈和CD₈亞群。本研究中的CD₄、Th/TcCD₄/CD₈比值明顯低于照組(P<＜0.01)，這與歐陽建華等^[6]研究多病毒感染的報道一致，CD₄水平降低提示細(xì)胞免疫功能低下。CD₈是參與抗腫瘤作用的主要效應(yīng)細(xì)胞，CD₄/CD₈比值下降提示輔助性T淋巴細(xì)胞損害。

在本研究中，觀察到NK細(xì)胞明顯增殖活躍。Deguchi等^[7]發(fā)現(xiàn)，在急性病毒性心肌炎階段，炎性細(xì)胞浸潤可分為兩個時相：第一時相即病毒感染后(3～9)d，主要為NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤心肌并達(dá)到高峰；第二時相在病毒感染后(7～14)d，T細(xì)胞替代NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞成為主要浸潤細(xì)胞。NK細(xì)胞是VMC早期最主要的炎性浸潤細(xì)胞，因其不受主要組織相容復(fù)合物分子限制，可直接作用于病毒感染心肌細(xì)胞，主要通過釋放穿孔素途徑溶解細(xì)胞，達(dá)到清除病毒的作用，并通過分泌γ干擾素(INF－γ)等細(xì)胞因子，進(jìn)一步擴(kuò)大反應(yīng)。NK細(xì)胞的殺傷作用雖然參與了VMC的病理損害，但因其主要?dú)绮《靖腥拘募〖?xì)胞，是VMC早期主要的抗病毒屏障，所以對心肌的病理損害是有限的。

由于利用流式細(xì)胞儀檢測淋巴細(xì)胞亞群對病毒性心肌炎研究時間較短，且本研究的樣本量比較小，是本研究的不足之處，這有待在后續(xù)進(jìn)一步的研究中改進(jìn)提高。

參考文獻(xiàn)：

[1] 楊利格，安肅英，李會茹，等．哮喘兒童T細(xì)胞亞群的動態(tài)觀察[J]．臨床薈萃，2004，19(15)：881．

[2] 中華心血管病雜志編輯委員會心肌炎心肌病對策專題組．關(guān)于成人急性病毒性心肌炎診斷標(biāo)準(zhǔn)和采納世界衛(wèi)生組織及國際心臟病學(xué)會聯(lián)合工作組關(guān)于心肌病定義和分類的意見[J]．中華心血管病雜志，1999，27：405—407．

[3] 李家宜．心肌炎與心肌病[J]．中國循環(huán)雜志，1994，9(3)：129—131．

[4] Wheeler DS．A formidable challenge：The diagnosis and treatment ofviral myocarditis in children[J]．Crit Care Clin，2003，19(3)：365—391．

[5] Cunningham MW．T cell mimicry in inflammatory heart disease[J]．Mol lmmunol，2004，40(114～15)：1121—1127．

[6] 歐陽建華，方月，汪雋瑛，等．多病毒感染時T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞活性的變化及其意義[J]．第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2000，21(4)：340．

[7] Deguchi H，Kitaura Y，Hayshi T．Cell－mediated immune cardiocyteinjury in viral myocarditis of mice and patients[J]．Jpn Circ J，1989，53(1)：61—77．

作者簡介：何世東(1971—)，男，主管檢驗(yàn)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，現(xiàn)工作于河北省唐山市工人醫(yī)院(郵編：063000)；張春來、高潮，工作于河北省唐山市工人醫(yī)院。

(本文編輯 郭懷印)

注：“本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內(nèi)容請以PDF格式閱讀原文”