高效液相色譜法測定新止咳合劑中橙皮苷的含量

摘要：目的：建立高效液相色譜法測定新止咳合劑中橙皮苷的含量。方法：采用Dikma鉆石C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為甲醇－0.2％磷酸溶液(38:62)；檢測波長為283nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。結(jié)果：橙皮苷進(jìn)樣量在0.01～2.0μg(r＝0.999 97)范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.12％，RSD=0.84％(n=9)。結(jié)論：本法簡便、快速、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好；可作為新止咳合荊的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：橙皮苷；高效液相色譜法；新止咳合劑；含量測定

中圖分類號：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1007－2349(2007)09－0033－02

新止咳合劑是由桔梗、陳皮、兒茶、甘草、法半夏等藥制成，具有止咳、祛痰的功效。為本院的醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有規(guī)定含量測定方法。本文參考《中國藥典~2005年版，采用HPLC法測定陳皮的主要成分——橙皮苷的含量，作為質(zhì)量控制指標(biāo)，獲得滿意的結(jié)果。

1 儀器與藥品

高效液相色譜儀(美國Agilent I100系列儀)，包括自動進(jìn)樣裝置、VWD可變紫外檢測器、柱溫箱等；METTLER AE240型電子分析天平。除高效液相色譜檢測所用試劑為色譜純外，其他試劑均為分析純。橙皮苷對照品(批號為0721—200010，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所)；新止咳合劑由本院制劑室配制(批號20070428、20070403、20070206)。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件色譜柱：Dikrna鉆石C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：甲醇－0.2％磷酸(38:62)；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：283nm；進(jìn)樣量：5μl。理論塔板數(shù)按橙皮苷峰計算為5000。

2．2 溶液的制備精密稱取橙皮苷對照品(置五氧化二磷為干燥劑的干燥器中，減壓干燥36h)20.01mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至亥4度，搖勻，即得每1ml中含橙皮苷0.4002mg的溶液(貯備液)，分別精密吸取溶液(貯備液)①0.1ml、②0.5ml、③2ml、④4ml、⑤5ml、⑥10ml、⑦20ml，分別置20ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別得每Iml含①2μg、②10μg、③40μg、④80μg、⑤100μg、⑥200μg、⑦400μg的對照品溶液。取新止咳合劑20ml，用乙酸乙酯提取5次，每次20ml，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，用0.45μg的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

2．3．1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍精密吸取橙皮苷對照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥、⑦各5μl，分別注入高效液相色譜儀測定。以橙皮苷對照品含量(瞎)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，直線幾乎通過原點，所以采用外標(biāo)一點法進(jìn)行含量測定。線性回歸方程為Y＝1827.6X－4.58r＝0.99997，線性范圍為0.01～2.μg。

2．3．2 精密度試驗取同一橙皮苷對照品溶液④5μl，注入液相色譜儀，連續(xù)測定6次，結(jié)果峰面積積分值分別為；727.1535，727.6970，730.9173，728.3321，729.3542，731.2501；積分值平均為：729.117，RSD＝0.23％。結(jié)果表明儀器精密度較好。

2．3．3 穩(wěn)定性試驗取同一對照品溶液④和同一供試品溶液(批號為20070428)各5ul，分別于0，2，5，10，15，20，24h注入液相色譜儀測定，結(jié)果表明在24h內(nèi)對照品和供試品的峰面積積分值穩(wěn)定，說明測定溶液配制好后，放置24h內(nèi)測定均可。

2．3．4 重現(xiàn)性試驗 取同一批號的新止咳合劑(批號：20070428)，按供試品溶液的制備方法重復(fù)操作測定6次，結(jié)果平均含量為20.4μg/ml，RSD＝1.18％。

2．3．5 回收率試驗采用加樣回收法，取已知含量的同一批號(20070428)新止咳合劑(含量為：20.4μg/m1)適量，分別精密加入橙皮苷對照品適量，按供試品溶液的制備及測定法操作。

2．3．6 陰性干擾試驗照上述條件測定新止咳合劑空白(不含陳皮藥材制成的陰性合劑)制劑，結(jié)果在橙皮苷色譜峰相對應(yīng)的保留時間處無吸收峰，說明處方中其它藥味對陳皮中的橙皮苷測定無干擾。

2．4 樣品含量測定按供試品溶液的制備及測定法操作，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀測定，外標(biāo)一點法計算。

3 討論

橙皮苷是陳皮中主要的活性成分之一，也是新止咳合劑治療疾病的重要成分，故選擇該物質(zhì)作為考察指標(biāo)。

曾進(jìn)行了乙酸乙酯提取次數(shù)的考察。操作同上，自“用乙酸乙酯提取5次(20、20、20、20、20m1)”，取第5次乙酸乙酯提取液單獨蒸干，殘渣用甲醇Iml使溶解，HPLC測定，結(jié)果沒有橙皮苷吸收峰，說明用乙酸乙酯提取5次，已經(jīng)全部將橙皮苷成分提盡。

本法簡便、快速、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可作為新止咳合劑的質(zhì)量控制方法。