正交試驗法優選七君顆粒提取工藝

摘要：目的：以三七皂苷R1、人參皂苷Rgl的含量為指標，研究七君顆粒中三七、人參等10味中藥的提取工藝。方法：采用正交試驗設計法，對七君顆粒水提取工藝進行考察，用高效液相色譜法測定三七皂苷R1、人參皂苷Rgl含量。結果：加水量12倍，煎煮1次，煎煮時間每次90min，所得提取液中三七皂苷Rl、人參皂苷Rgl的含量高。結論：此工藝對三七皂苷R1、人參皂苷Rgl的含量的提取率高，穩定性好，可作為七君顆粒的提取工藝。

關鍵詞：七君顆粒；三七皂苷R1；人參皂苷Rgl;提取；正交試驗

中圖分類號：R284.2

文獻標識碼：A

文章編號：1007－2349(2007)09－0037－02

七君顆粒由三七、人參、金錢草等10味中藥組成，具有通絡滲濕，健脾化痰之功，臨床適用于痰濕瘀阻經脈型高尿酸血癥。方中三七為君藥，有化瘀止血、活血定痛之功，現代研究表明。它具有止血與活血化瘀雙重作用。本文采用正交設計法，考察加水量、煎煮次數、煎煮時間及三者交互作用對提取效果的影響，以三七皂苷R1、人參皂苷Rgl的含量為指標，確定七君顆粒中水提取部分最佳提取工藝。

1 儀器與材料

1．1 儀器美國Agilentll00系列色譜儀(配自動進樣裝置，柱溫箱)，色譜柱Agilent C₁₈ SB 4.6×250mm，5μm；柱溫：25℃；流速：100ml／min；FA1004型電子天平(上海天平儀器廠)，SJN－500型三效節能濃縮器(浙江甌海制藥機械廠)．煎藥器，量杯、量筒，盛藥器等。

1．2 材料無水乙醇、甲醇、三七皂苷R1對照品(中國藥品生物制品檢定所117045－200312供含量測定用)、人參皂苷Rgl(中國藥品生物制品檢定所0703－200221供含量測定用)，由云南省藥檢所提供；藥材購自于云南省藥材公司。

2 實驗方法與結果

2．1 正交試驗設計試驗選擇影響水提效果的主要因素：加水量、煎煮次數、煎煮時間為考察對象，并結合生產實際，每個因素確定不同的水平，用L_g(3⁴)正交表進行實驗。實驗因素水平安排。

2．2 提取工藝過程按處方量取三七、人參等藥，合計156g，以水先浸泡12h，分別按L_g(3⁴)正交試驗進行水煎煮提取，合并提取液濾過，濃縮并定容至100ml量瓶中，作為樣品液。

2．3 指標測定方法

2．3．1 含量測定指標三七皂苷Rl和人參皂苷Rgl。

2．3．2 方法采用高效液相色譜法。

2．3．3 供試品溶液的制備取本品25ml，置25ml量瓶中，加無水乙醇至刻度，混勻，放置使沉淀，濾過，精密量取續濾液20ml，蒸至約6ml，通過D101型大孔吸附樹脂拄(直徑1.5cm，長14cm)，用水100ml洗脫，棄取水洗脫液，再用20％乙醇25ml洗脫，棄取20％乙醇洗脫液，繼用80％乙醇100ml洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴上蒸干，殘渣用甲醇定量轉移至5ml量瓶中，混勻，濾過，取續濾液，即得。

2．3．4 對照品溶液的制備精密稱取三七皂苷R1對照品(中國藥品生物制品檢定所117045-200312供含量測定用)3.2mg和精密稱取人參皂苷Rgl(中國藥品生物制品檢定所0703-200221供含量測定用)12.0mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并至刻度，混勻，得含三七皂苷R1 0.32mg/ml和含人參皂苷Rgl 1.2mg/ml的混合溶液。

2．3．5 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈一水(21:79)為流動相，檢測波長為203cm。理論板數按人參皂苷Rgl峰計算，應不低于6000。

2．3．6 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～10μl(對照品溶液5μl，供試品溶液10μl)，注入液相色譜儀，測定，即得。對照品溶液連續進樣3次，三七皂苷R1的RSD＝0.59％，人參皂苷Rgl的RSD＝0.51％；理論板數按人參皂苷Rgl峰計算，均在10000以上。

2．4 數據處理分別把三七皂苷R1、人參皂苷Rgl兩項含量最好的指標定為100分，每項按比例進行綜合評分，鑒于在本實驗中，三七皂苷R1比人參皂苷Rgl重要，故權重系數分別取為0.7、0.3進行加權求和，L_g(3⁴)計算結果。

2．5 結果分析從表2的R值可知，影響提取效果的因素順序為：煎煮時間(c)＞加水量(A)＞煎煮次數(B)，經表3的方差分析得出各因素對試驗結果均無顯著性影響。直觀分析結果表明較佳提取工藝條件為L_g(3⁴)。結合成本考慮，該結果符合生產實際需要，故確定其提取工藝條件為L_g(3⁴)即加水量為12倍，煎煮1次，煎煮時間為每次90min。

3 討論

方中君藥三七主要含皂甙類活性成分三七皂苷R1和人參皂苷Rgl等在水、乙醇中都具有較好的溶解性Ⅲ，考慮到成本及條件的限制，故本試驗選擇水煎提取，高效液相色譜法測定三七皂苷R1、人參皂苷Rgl含量作為實驗指標。實驗數據的極差分析表明，七君顆粒在水提過程中，煎煮時間是影響水提效果的主要因素。為了保證有效成分的溶出，顆粒水提部分的制備擬采用先浸泡12h，加12倍量水，煎煮1次，煎煮時間為每次1.5h。一般說來，水提過程中，加水量、煎煮時間、煎煮次數的增加及浸泡時間的延長有助于藥物中有效成分的溶出，但由于三七中含有大量淀粉，煎煮時間過長、煎煮次數多易于糊化，因此，在水提取過程中煎煮時間、次數不宜過長、過多。七君顆粒為復方制劑，所含成分復雜，由于時間和條件的限制，僅選擇了水提取、高效液相色譜法測定三七皂苷R1、人參皂苷Rgl含量作評價指標。處方中究竟以何種成分作為理想的評價指標以及其含量測定方法還有待進一步的研究。但總的說來本試驗的制備工藝是完全可行的。并具有簡便、實用和經濟科學的特點。