關鍵詞:水提三七皂苷;緩解體力疲勞;實驗研究
中圖分類號:R285.5
文獻標識碼:A
文章編號:1007-2349(2007)09-0039-02
疲勞是機體在一定環境條件,由于長時間或過度緊張的體力或腦力勞動而引起的勞動效率趨向下降的狀態,它是機體的一種防御反應,是機體組織和器官興奮性下降而帶來工作效率的降低。隨著經濟發展和社會競爭的日趨激烈,人們的生活節奏日益加快,工作壓力日益提高,處于疲勞或過度疲勞等亞健康狀態的人群比例不斷上升。開發具有抗疲勞作用的保健藥品,具有重要的現實意義。
水提三七皂苷是以云南文山地道藥材三七(Pnanaxnotoginseng)的地下根、根莖為原料,在中醫藥理論指導下,用王興文教授“中藥水提專有技術”提取、分離、精制而得到的。水提三七皂苷含人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、雕、Rg1、Rg2、Rh,三七皂苷R1、R2、R3、R4、R6等二十多種皂苷成分。具有多種功效和治療作用。水提三七皂苷膠囊是以水提三七皂苷制成的純中藥口服制劑,與市場同類產品比較,具有微量、速效、高效等特點。本實驗旨在研究三七皂苷對緩解體力疲勞的影響。
1 材料和方法
1.1 樣品及供試液制備 由云南紅云生物工程技術有限公司提供三七皂苷膠囊,膠囊內容物為灰白色粉未,規格為330mg/粒,樣品批號:20021212。人體推薦量為每人(成人)每日2次,每次1粒,按60kg體重折算成11mg/kg.BW。室溫保存。試驗前用蒸餾水配成試驗所需濃度的溶液作為供試液。
1.2 動物選用廣西醫科大學醫學實驗動物中心[批準號為:桂動許字(2000)第001號]繁殖的清潔級(Ⅱ級)健康成年昆明種雄性小鼠184只,體重為18~26克,分為4批,每批44~48只。實驗動物房合格證號:桂醫動字第23003號。動物室溫度:22~25℃,相對濕度:55~70%。
1.3 選擇與受試物給予方式根據該樣品的人體推薦量,設55、110、220mg/kg.BW(分別相當于人體推薦量的5、10、20倍)3個劑量的實驗組,同時設1個陰性對照組(給蒸餾水)。每組11~12只動物。采用經口方式給予受試物,按每10g體重0.2ml的容量灌胃。
1.4主要儀器與試劑
1.4.1 儀器動物天平、電子分析天平、離心機、高速分散器、振蕩器、真空泵、恒溫水浴鍋、721分光光度計、半自動生化分析儀、游泳箱(大小為50cm×50cm×40cm)等。
1.4.2 試劑蒽酮、硫脲、濃硫酸、TCA、葡萄糖、NaF、CuS04、鎢酸鈉、對羥基聯苯、乳酸鋰(均為分析純)、BUN試劑盒(試劑盒為酶法,由上海長征醫學科學有限公司生產,批號:000359)。
1.5 實驗方法 依據衛生部《保健食品檢驗與評價技術規范-2003》中緩解體力疲勞功能檢驗方法。實驗設4個組,即3個實驗組和1個陰性對照組,每組11~12只小鼠。采用灌胃法,每天以0.4ml/20g,BW的容量給小鼠灌胃不同劑量的受試物,陰性對照組給予等量蒸餾水。每天1次,連續30天。第31天進行各項抗疲勞指標的測定。
1.5.1 負重游泳試驗末次給小鼠受試物30min后,置于游泳箱中游泳,水深約30cm,水溫25℃±0.5℃,鼠尾根部負荷5%體重的鉛皮。記錄小鼠自游泳開始至死亡的時間,作為小鼠負重游泳時間(s)。若實驗組游泳時間明顯長于陰性對照組游泳時間,且差異有顯著性(P<0.05),可判定該受試物有延長小鼠負重游泳時間的作用。
1.5.2 血清尿素測定 酶法試劑盒:末次給小鼠受試物30min后,在溫度為30℃的水中不負重游泳90min。運動后休息60min后產即撥眼球采血0.5ml,離心取血清加測定血清尿素值。若實驗組血清尿素含量明顯低于陰性對照組,且差異有顯著性(P<0.05),可判定該受試物有減少疲勞小鼠尿素產生的作用。
1.5.3 肝糖原測定蒽酮法:末次給小鼠受試物30min后,立即處死.取肝臟經生理鹽水漂洗后用濾紙吸干,精確稱取肝臟100mg,加入TCA,勻漿、離心,取上清液測定肝糖含量。若實驗組肝糖原含量明顯高于陰性對照組,且差異有顯著性(P<0.05),可判定該受試物有促進小鼠肝糖原儲備的作用。
1.5.4 血乳酸測定末次給小鼠受試物30min后,分別在游泳前、游泳(運動)后0min、游泳(運動)后休息20min采血20μl進行乳酸測定。血乳酸變化值用下式表示:血乳酸變化值=1/2X(安靜血乳酸值+運動后0min的血乳酸值)X10+1/2X(運動后Omin的血乳酸值+運動后20rain\"的血乳酸值)X20。若實驗組血乳酸變化明顯低于陰性對照組,且差異有顯著性(P<0.05),可判定該受試物有減少小鼠運動后血乳酸變化值勤的作用。
1.6 實驗數據的數據處理用Stata軟件對各實驗原始數據--進行方差齊性檢驗,滿足“方差齊”要求的數據資料用單因素方差分析方法和多個實驗組和一個對照組均數的兩兩比較方法進行統計處理;對非正態分布或方差不齊的數據資料進行適當的變量轉換,待滿足“正態方差齊”要求后,用轉換所得的數據進行統計處理。
1.7 結果判定若負重游泳實驗結果陽性,且血乳酸、血清BUN、肝糖原三項生化指標中任二項指標陽性,可判定該受試樣品具有緩解體力疲勞功能的作用。
2 結果
2.1 樣品對小鼠負重游泳時間的影響見表1。比陰性對照組延長,其中高劑量、中劑量組與陰性對照組的差異具有非常顯著性意義(P<0.01),低劑量組與陰性對照組的差異無顯著性意義(P>0.05),表明該樣品在110、220mg/kg.BW兩個劑量組能延長小鼠負重游泳時間。
2.2 樣品對小鼠運動后血清尿素水平的影響見表2。
由表2可見,樣品各劑量組小鼠血清尿素氮含量均低于對照組,其中高劑量、中劑量組與陰性對照組的差異具有顯著性意義(P<0.05),低劑量組與陰性對照組的差異無顯著性意義(P>0.05),表明該樣品在110、820mg/kg.BW兩個劑量組能減少或抑制疲勞小鼠血清尿素氮產生。
2.3 樣品對小鼠肝糖原儲備量的影響見表3。組,其中高劑量與陰性對照組的差異具有非常顯著性意義(P<0.01),中、低劑量組與陰性對照組的差異無顯著性意(P>0.05),表明該樣品在220mg/kg.BW劑量組具有促進糖原儲備的作用。
2.4 樣品對小鼠運動后血乳酸值的影響見表4。
由表4可見,樣品各劑量的血乳酸變化值均低于對照組,其中高劑量、中劑量組與陰性對照組的差異具有極顯著性意義(P<0.01),低劑量組與陰性對照組的差異無顯著性意義(p>0.05),表明該樣品在110、220mg/kg.BW兩個劑量組能降低小鼠運動后血乳酸變化值。
3 小結
運動耐力的提高是抗疲勞能力加強最直接的表現,游泳時間的長短可以反應動物運動疲勞的程度。本實驗顯示服用三七皂苷30天后,小鼠的游泳時間明顯長于未服用的對照組小鼠。機體血尿素氮含量隨勞動及運動負荷的增加而增加。機體對負荷的適應能力越差,血尿素氮增加越明顯,本研究表明三七皂苷能使機體內血尿素氮減少。糖原是運動中最重要的能源物質,體內糖原的水平與耐力密切相關,當糖原被大量消耗而又得不到及時的補充時,糖酵解產物乳酸過量堆積導致機體內環境失調和代謝過程紊亂,糖原儲備的提高有利于機體耐力的提高,肌糖原儲備越多,運動可持續的時間越長,本實驗表明三七皂苷能使體內肝糖原儲備增加,從而使耐力提高。劇烈運動時,機體對能量的需求增加,由于有氧代謝能力的不足,需通過無氧酵解提供能量,同時產生大量的乳酸,使肌組織中H+離子濃度升高,PH降低,引起一系列生化反應,導致疲勞的產生,血乳酸的清除需有氧的參加。有文獻報道,三七皂苷有活血、補血、溶血和抗溶血,并能改善血氣循環等作用,本實驗亦證明三七皂苷能幫助機體乳酸的清除。上述結果均說明了三七皂苷具有緩解機體疲勞的功能。
