復(fù)方當歸提取物對皮膚抗氧化作用實驗研究

[摘要]目的：觀察含復(fù)方當歸提取物的護膚品對皮膚的抗氧化作用。 方法：測定含復(fù)方當歸提取物護膚品對D-半乳糖衰老模型小鼠皮膚超氧化物歧化酶（SOD）、羥脯氨酸（Hyp）及皮膚含水量的影響。 結(jié)果：含復(fù)方當歸提取物護膚品具有使D-半乳糖衰老模型小鼠皮膚SOD、Hyp含量增高的作用(P<0.05)，對小鼠皮膚含水量有增高趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：含復(fù)方當歸提取物的護膚品對皮膚的抗氧化作用與提高皮膚SOD活性、增加Hyp含量有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]中藥化妝品；超氧化物歧化酶；羥脯氨酸；皮膚含水量；D-半乳糖

[中圖分類號]R284.2[文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455（2007）11-1574-02

An experimental research on the function of anti-oxidation of skin by cosmetics with the compound extract of Danggui

LU Qi，ZHAO Hui，MU Yang

(Captial of University Medicine， Beijing 100054， China)

Abstract:ObjectiveResearching the function of anti-oxidation of skin by cosmetics with the compound extract of Dang Gui.MethodsTo measure the effect by cosmetics with the compound extract of Dang Gui to the contents both of SOD， Hyp and the water content of skin of mouse skin with senilitied model of galactose-D.ResultsIt is evidently less than the normal ( P<0.05 ) for the index of vitality-SOD of mouse skin with senilitied model of galactose-D， content of Hyp and water content of skin. Both of the contents of SOD of mouse skin with senilitied model of galactose-D and HYP( P < 0.05 ) can be increased by cosmetics with the compound extract of Dang Gui. Although there is an increasing trend for the water content of mouse skin， it is without concept of statistics.ConclusionIt is related to the delaying of senility of skin， increasing the vitality of SOD and the content of Hyp by cosmetics with the compound extract of Dang Gui.

Key words:cosmetics with Chinese herb;SOD;Hyp;water content of skin;galactose-D

中草藥因其獨特機理和美容效果已被廣泛應(yīng)用于護膚類化妝品中，而對于發(fā)現(xiàn)和評價中草藥護膚品的有用性與安全性，一直是美容應(yīng)用技術(shù)理論與技術(shù)研發(fā)所面臨的熱點課題。在前期動物實驗研究已表明含復(fù)方當歸提取物水劑型護膚品具有增加小鼠表皮含水量和提高小鼠皮膚細胞SOD活性；人體試驗研究顯示它具有改善人體皮膚顏色，增加皮膚白晰、透明效果的基礎(chǔ)上[1]，本文觀察復(fù)方當歸提取物制備的乳液、成型面膜2個劑型，清潔、按摩、貼敷、滋潤4種護膚品共同使用對小鼠D-半乳糖衰老模型皮膚的影響，探討復(fù)方當歸提取物系列護膚品（簡稱DGCC）對人體皮膚外觀改善與抗氧化作用的關(guān)系。

1材料和方法

1.1實驗動物：選用ICR 3月齡小鼠30只（首都醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供）。

1.2實驗儀器：752N型紫外分光光度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司），DY89-1型電動玻璃勻漿機（寧波新芝生物科技股份有限公司），F(xiàn)A/JA型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.3主要試劑：D-半乳糖（上海試劑二廠），超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（南京建成生物科技公司），羥脯氨酸（Hyp）試劑盒（南京建成生物科技公司），考馬斯亮藍蛋白測試盒（南京建成生物科技公司）。

1.4 受試藥物：復(fù)方當歸提取物由北京中醫(yī)藥大學(xué)制劑中心制備。DGCC為清潔乳、按摩霜、成型面膜及滋潤霜，由廣州雅倩化妝品公司北京研究中心監(jiān)制。

1.5實驗方法

1.5.1動物分組、造模及給藥：隨機分為3組，每組10只。D-半乳糖組：每天給小鼠頸背部皮下注射12.5% D-半乳糖（1 000mg/kg）；正常對照組：每天小鼠頸背部皮下注射等容量生理鹽水；DGCC組：每天小鼠頸背部皮下注射12.5%的D-半乳糖（1 000mg/kg），并用剃毛器剃去背部被毛，暴露大小約2cm×3cm的皮膚，用DGCC清潔乳涂抹和清水清洗，再用DGCC面膜敷貼于暴露部位30min，然后用DGCC按摩膏按摩1min，最后外涂DGCC滋潤霜。

1.5.2衰老小鼠皮膚SOD活力和皮膚總羥脯氨酸含量測定：各組小鼠均于42天后處死，取背部脫毛部位皮膚組織塊，經(jīng)預(yù)冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪及結(jié)締組織，濾紙拭干，取0.5g置10ml燒杯，加預(yù)冷生理鹽水，眼科剪剪碎組織塊后，倒入勻漿管中，加預(yù)冷生理鹽水至5ml，用電動玻璃勻漿機制成10%組織勻漿（在冰水中進行），然后反復(fù)凍融3次，使其完全破碎，細胞內(nèi)容物完全游離液相中。制備組織勻漿采用SOD試劑盒和羥脯氨酸試劑盒按說明書方法測定。

1.5.3衰老小鼠皮膚含水量測定：用打孔器取下脫毛后皮膚組織0.5g，精密稱皮膚濕重，放置80℃干燥箱中48h，稱皮膚干重。并按下列公式測量含水百分率：

1.6統(tǒng)計學(xué)方法：本研究中所有資料均采用Spss for window10.0統(tǒng)計軟件進行分析，行方差分析及 χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1 DGCC對衰老小鼠皮膚SOD活力和總羥脯氨酸含量的影響：見表1。

結(jié)果顯示：與正常組比較，D-半乳糖組小鼠皮膚SOD活力和總羥脯氨酸含量明顯降低；與D-半乳糖組相比，DGCC組小鼠皮膚SOD活力和總羥脯氨酸含量明顯增高，與正常組相比沒有明顯差別。

2.2 DGCC對衰老小鼠皮膚含水量的影響：見表2。

結(jié)果顯示：與正常組比較，D-半乳糖組小鼠皮膚含水量明顯降低。DGCC組小鼠皮膚含水量有升高趨勢，但與D-半乳糖組對比沒有統(tǒng)計學(xué)意義。

3討論

皮膚衰老的確切機制尚未完全闡明，目前認為皮膚衰老損傷重要原因是自由基累積[2]，自由基累積可使生物膜中不飽和脂類發(fā)生過氧化，形成過氧化脂質(zhì)，其終產(chǎn)物MDA是強交聯(lián)劑，與蛋白質(zhì)、核酸或脂類結(jié)成難溶性物質(zhì)，使生物膜硬化導(dǎo)致通透性降低，影響細胞物質(zhì)交換，繼而使之破裂、死亡。在正常生理條件下，機體抗氧化防護機制與SOD能有效清除自由基，對抗自由基損害。隨著年齡增長，體內(nèi)抗氧化酶類減少，機體抗氧化防護功能減退，故測定皮膚抗氧化劑活性可作為判定受試動物皮膚衰老程度的指標。膠原蛋白是動物皮膚組織的組成成分，羥脯氨酸為膠原蛋白特有的氨基酸，測定皮膚羥脯氨酸含量可反映皮膚中膠原蛋白含量。在人體老化的過程中，成纖維細胞氧氣供應(yīng)不足，直接影響脯氨酸羥化產(chǎn)生羥脯氨酸，使膠原蛋白合成減少，膠原纖維形成不良，因此出現(xiàn)皮膚彈性降低和皺紋增加。故測定皮膚羥脯氨酸含量可作為判定受試動物衰老程度的指標。由于老齡動物飼養(yǎng)周期長，個體差異大，不易獲得，本實驗采用Ｄ-半乳糖所致的小鼠衰老模型。Ｄ-半乳糖擬衰老模型原理為Ｄ-半乳糖在體內(nèi)引發(fā)非酶糖基化反應(yīng)，損傷生物大分子正常生理功能，同時由反應(yīng)產(chǎn)物晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)誘導(dǎo)自由基損傷，進而放大非酶糖基化效應(yīng)而致[3-4]。本實驗結(jié)果證實該模型亦可導(dǎo)致小鼠皮膚明顯衰老。

實驗結(jié)果顯示：Ｄ-半乳糖衰老模型小鼠皮膚SOD、Hyp明顯低于正常組，皮膚水含量降低表明，模型小鼠皮膚呈現(xiàn)漸進性老化，角質(zhì)層變薄，皮膚水合能力降低，水分喪失增加。DGCC共同使用42天后，與Ｄ-半乳糖組相比，DGCC組SOD活性和Hyp含量具有顯著性差異?？娠@著增強D-半乳糖衰老模型小鼠皮膚SOD活性(P<0 05)，表明其可有效防止自由基反應(yīng)的連續(xù)發(fā)生和有害代謝產(chǎn)物的積累，對提高皮膚細胞自身防御能力，改善皮膚細胞營養(yǎng)狀況，有效拮抗具有積極意義；同時可顯著增高D-半乳糖衰老模型小鼠皮膚Hyp含量(P<0 05)，表明其可通過刺激衰老皮膚成纖維細胞活性，增強膠原蛋白合成能力；而對D-半乳糖衰老模型小鼠皮膚含水量有增高趨勢，但沒有統(tǒng)計學(xué)意義，表明DGCC對皮膚抗氧化作用優(yōu)于提高皮膚含水量。

綜上，DGCC共同使用可通過提高抗氧化酶的活性，刺激成纖維細胞活力，增強膠原蛋白合成能力等，延緩皮膚衰老過程，發(fā)揮抗氧化作用。DGCC對衰老動物某些指標具有良好改善作用，與中醫(yī)美容所強調(diào)的容貌肌膚與氣血盛衰的密切關(guān)系相一致。DGCC的組方及基質(zhì)在皮膚抗氧化過程中哪些成分起主要作用，抑或是各成分間協(xié)同作用的結(jié)果，有待進一步深入研究。

（致謝：感謝首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院中藥系陳忻教授對本文實驗結(jié)果的分析指導(dǎo)和幫助?。?/p>

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[收稿日期]2007-06-06[修回日期]2007-09-30

編輯/李陽利

注：“本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內(nèi)容請以PDF格式閱讀原文?！?/p>