臍血源神經干細胞治療肌萎縮側索硬化的免疫學改變及安全性評價

摘要：目的 評價臍血源神經干細胞治療肌萎縮側索硬化癥的療效及安全性。方法 對肌萎縮側索硬化病人治療前后進行血液肝腎功能、電解質、血清酶學、血糖、血脂、細胞及體液免疫測定，進行Norris評分，觀察癥狀體征改變。結果 病人自身前后比較的結果顯示，經治療后血白細胞、谷草轉氨酶、乳酸脫氫酶、T細胞、Th細胞、IgG以及Norris評分與治療前比較，差異具有統計學意義(P＜0.05)。病人近期的病情有顯著改善。結論 臍血源神經干細胞移植后在近期內各項實驗室化驗結果顯示，干細胞具有高安全性，有較明顯的臨床效果，但有待繼續觀察和隨訪。

關鍵詞：神經干細胞；肌萎縮側索硬化癥；細胞免疫；體液免疫

中圖分類號：R746 文獻標識碼：A 文章編號：1672－1349(2007)10－0911－03

肌萎縮側索硬化(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)是神經系統疑難病。它至今病因不明，發病似乎逐年上升，而且致死、致殘率高，從發病到死亡，帶病生存的長則(6～8)年，短則數月。由于該病病初確診困難，及至確診時已經形成多灶性損害。盡管關于病因的學說較多，但是迄今為止，還未發現特效的治療方法，亦沒有產生顯著療效的藥物。神經干細胞的問世，為該病的治療帶來一線光明，多家均有報道。我院對于22例已經確診的ALS病人使用臍血源神經干細胞治療，取得了一定的近期臨床效果，同時對于接受該療法的大部分病人進行了將近1年的隨訪，現將，臨床研究的近期評分及安全性評價結果報道如下，為進一步研究該病提供參考依據。

1 資料與方法

1．1 一般資料 2005年11月～2007年4月在我院治療的22例病人，男15例，女7例；病程6個月至8年(2.08年±1.65年)；年齡38歲～70歲(53.58歲±10.94歲)；其中外國籍19例，中國籍3例。職業有商人、海員、工程師、工人、公司職員、干部等。全部病人均在所在國確診為ALS。到達我院后，再依據中華醫學會神經科專業委員會2000年制定的ALS標準復核無誤。

1．2 方法 22例ALS病人均常規進行血液HIV－DNA抗體、梅毒抗體、肝炎標志物(甲乙丙丁戊IgM抗體)、Torch 5項以及頭頸磁共振成像(MRI)檢查。

采用病人自身前后對照的方式觀察干細胞治療期間各項指標的變化。干細胞治療前及結束后測定血液免疫球蛋白(IgA，IgG，IgM)、補體C3、C4、T細胞亞群、肝腎功能、血脂、血糖、電解質、血清酶學(方法均按試劑盒要求進行)、血尿常規，對病人肢體功能及生活能力采用Norris量表進行評定。

干細胞來自健康分娩孕婦的臍帶血(檢測HIV、梅毒抗體、肝炎標志物5項、Todch5項等)，經由深圳市北科細胞工程研究所進行分離、提取、培養、擴增及向神經干細胞誘導傳代(4—6)代。每份細胞數量約1.5×10⁷/mL～3.0×10⁷/mL，其中約80％間質干細胞，20％神經前體細胞。每次移植前由病人簽署干細胞治療知情同意書。通過腰椎穿刺脊髓蛛網膜下腔或靜脈途徑植入干細胞。每人接受(4～6)次治療，每次間隔1周。

干細胞移植治療后的次日起靜脈給予神經生長因子9000AU誘導干細胞向神經干細胞轉化，連用3d。

每位病人治療期間均根據責任肌肉及關節、腦神經損傷的程度，接受平衡、關節活動度訓練及針刺(根據取穴原則遠近結合，6穴～8穴，平補平瀉)治療。

1．3 統計學處理 計量資料以均數±標準差(x±s)表示，在SPSS 11.5軟件包進行分析。

2 結 果

22例ALS病人治療前的HIV－DNA抗體、梅毒抗體、肝炎標志物、Torch 5項檢查均正常。按類型分別統計相關指標。

2．1 治療前后部分血常規指標變化情況 白細胞總數及血小板治療后均較治療前高，差異有統計學意義(P＜0.05)，但均在正常范圍。其余指標治療前后比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。詳見表1。

2．2 治療前后肝功能及部分酶學指標改變情況 治療后血清酶學普遍下降。其中谷草轉氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)與治療前比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。其余指標治療前后比較，差異均無統計學意義(P＞0.05)。詳見表2。

2．3 治療前后腎功能與電解質改變情況(見表3)

2．4 治療前后T細胞亞群和體液免疫指標改變情況 治療后與治療前比較，總T細胞、Th細胞、IgG測值均較前下降，差異有統計學意義(P＜0.05)；Ts細胞上升，其他變化不大，差異無統計學意義(P＞0.05)。詳見表4。

2．5 治療前后血脂、血糖改變情況(見表5)

3 討 論

ALS是神經系統疑難病，目前無特效治療方法，被認為是神經系統的“癌癥”。關于其病因研究及治療方法已有另文報道。既往關于神經干細胞治療的研究已見諸于專業期刊。但采取的是胚胎嗅鞘細胞及自體骨髓干細胞，未見神經干細胞應用后全面的肝腎功能、電解質、血常規、免疫指標的安全性評價，療效反映的是干細胞治療后的近期效果或者個案報道。本研究中涉及了多方面的指標，對于ALS常規檢查不能反映其疾病的病因，MRI僅僅表現大部分病人伴有頸椎間盤突出，不表現其有椎間盤突出癥。EMG也只反映其損害為神經源性，具體的病因不清楚，目前沒有針對病因的治療，現有的治療方法，遠期效果均不好，對該病的診斷治療，神經科醫生遭遇很大挑戰。

接受神經干細胞治療的病人，停用目前常用的藥物如力魯唑及其他藥物。上述檢驗結果中血常規的白細胞及血小板治療后均升高，差異有統計學意義(P＜0.05)，但是仍在正常值范圍。其升高的原因，可能是干細胞治療同時，成人均給予靜脈推注10 mg地塞米松防止變態反應，療程結束后，一般次日早晨抽血，反映白細胞升高，病人沒有感染，無發熱，最清楚的原因。可能是激素刺激引起，一般在3 d后下降。

谷草轉氨酶、肌酸磷酸激酶、乳酸脫氫酶治療后比治療前下降，且有統計學意義(P＜0.05)。這反映了在ALS的進展期，受已損傷脊髓前角運動神經元的影響，骨骼肌失神經，呈現節段性或部分萎縮，肌細胞發生炎性改變，出現部分病人的上述指標升高，有的人肌酸磷酸激酶測值高出正常(3～4)倍，統計學離散度很大，但治療后均降至正常。表明神經干細胞不僅可以促進運動神經元的修復，而且對受累肌肉病變后釋放的酶有降解作用。而肝腎功能、電解質這些主要指標均穩定，差異無統計學意義(P＞0.05)。血糖治療前后均值都在異常范圍，治療后升高，差異無統計學意義(P＞0.05)。但血糖升高可能的原因仍然是與單次使用皮質激素有關。

細胞和體液免疫的水平反映體內的免疫系統功能。干細胞治療后，有總T細胞、Th細胞、IgC測值下降，差異有統計學意義(P＜0.05)，盡管總體在正常范圍內，這種治療后測值的下降是否因應用糖皮質激素引起，需要今后設立部分組別，在最后一次干細胞治療后不用皮質激素，采血后化驗比較再行分析。

臨床上使用干細胞治療后，部分病人在個別治療時間后出現低或中等發熱，或腰痛，或頭痛，分析原因可能是治療后輕度的排斥反應，或穿刺后的脊膜刺激癥，或低顱壓綜合征，經對癥處理在(2～3)d內可完全恢復正常。

關于附加平衡及關節活動度，針刺治療是否喧賓奪主，或者本身反映了康復理療對評價病人療效的影響。因此，認為加入上述療法，僅僅是希望病人減少因制動或少動導致關節僵硬、肌肉廢用性萎縮。事實上很多病人接受干細胞治療前，已經在服藥或者接受康復理療，但近期的效果并無質的改變。干細胞治療加康復理療的模式，實際上為神經科疑難疾病的治療開辟了新途徑。今后有可能設立對照分組進一步評價其效果。

Norris量表反映ALS和運動神經元病的語言、認知、職業能力、運動能力，共有33個問題，每項滿分3分，最小0分。滿分為97分。治療后Norris評分上升，且差異有統計學意義(P＜0.05)。在無實驗室評價標準體系的前提下，量表反映的結果比較客觀，國外病人的病情變化也可依據該項國際公認的量表進行評價，對神經干細胞的遠期療效動態監測。

總之，該項研究客觀反映了臍血源神經干細胞治療ALS后各項重要指標的變化。初步表明，臍血源神經干細胞臨床應用是安全的，對ALS的近期運動能力、肌顫有改善作用。但是，畢竟ALS是神經系統疑難病，病因不清，致病因子繼續攻擊神經元，致使干細胞治療的遠期效果不如脊髓損傷等病。表明干細胞僅可針對損傷本身進行修復，并不能遏制病情惡化。干細胞近期的療效可能與其早期分泌的細胞因子或其他物質有關，遠期的療效才可能是干細胞建立的神經聯系。經隨訪，干細胞治療ALS后效果的維持約在(2～3)個月，此期過后，有病人重復使用仍然有效。因此，要想使用干細胞治療ALS，必須采用短程沖擊，隔段重復使用方能維持其效果，否則不能遏止其惡化。但最終還需闡明ALS的病因。研制新的藥物，基因治療或完善現時包括細胞療法在內的各種治療方法，才有望征服該病。

本文編輯 郭懷印