腦心通膠囊對大鼠缺血再灌注腦保護作用的實驗研究

摘要：目的 觀察大鼠局灶性腦缺血／再灌注(I／R)后腦組織水、鈉、鉀、鈣及一氧化氮變化情況以及腦心通膠囊對其影響。方法 雄性成年SD大鼠24只，隨機分成3組，假手術組、模型組和腦心通組(每組8只)，分別于缺血前6 d每日用生理鹽水4 mL、生理鹽水4 mL和腦心通膠囊0.48 g／kg(腦心通膠囊用4 mL生理鹽水溶解)灌胃。采用線拴法致大腦中動脈栓塞(MCAO)模型，在腦缺血2 h再灌注24 h后處死大鼠，測定雙側紋狀體腦組織中水、鈉、鉀、鈣及一氧化氮含量。結果 腦缺血/再灌注導致腦組織中鈉、鈣及一氧化氮含量升高，鉀含量降低(P＜0.01)。腦心通組鈉、鈣及一氧化氮含量較模型組明顯降低(P＜0.01)鉀含量升高(P＜0.01)。結論 腦心通膠囊可通過恢復離子的平衡緩解一氧化氮含量的升高，減輕一氧化氮在缺血后期的損傷下用，從而起到對缺血再灌注腦保護作用。

關鍵詞：腦心通膠囊；腦缺血／再灌注；一氧化氮；大鼠

中圖分類號：R285.6 文獻標識碼：A 文章編號：1672－1349(2007)10－0969－02

腦心通膠囊是根據中醫理論研制而成的中藥復方制劑，由黃芪、丹參、桃仁、紅花、乳香、地龍、全蝎等十六味藥組成，具有益血活血、通絡止痛之功效，臨床用于治療缺血性腦血管疾病取得良好療效。為探討其作用機制，特進行了腦心通膠囊對腦缺血一再灌注大鼠保護作用的實驗研究。

1 材料與方法

1．1 實驗動物及分組 SD雄性大鼠24只，清潔級，體重280g～300 g，由山西醫科大學實驗動物中心提供，隨機分為3組，即假手術組、模型組、腦心通組，每組8只。

1．2 實驗動物模型 參照Longa等的線栓改良法復制大鼠左側大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery OCClusion，MCAO)局灶性腦缺血模型，假手術組除不插線外，全過程同模型組。按照Longa的5分法評分：0分無神經缺損癥狀；1分右前肢不能完全伸直；2分向右旋轉；3分向右側傾倒；4分不能向右行走或昏迷。1分～4分為有效模型。

1．3 給藥方法 腦心通膠囊，咸陽步長制藥有限公司提供，批號：Z20025001，每粒0.4 g。用藥劑量0.48 g//kg。于缺血前6d開始，每日灌胃給藥1次(腦心通用4 mL生理鹽水溶解)，假手術組和模型組給予等體積生理鹽水。

1．4 腦組織鈉、鉀、鈣、一氧化氮含量測定 大鼠MCAO后24h處死，取雙側紋狀體，用電子分析天平(0.1 mg)稱重，然后按每100 mg組織加1 mL生理鹽水，勻漿，勻漿液放人事先準備好的容器中，0℃，12 000 r/min離心10 min，取上清液于－80℃低溫冰箱保存、一氧化氮含量的測定，應用硝酸還原酶法測定一氧化氮的代謝產物，取上清液0.1 mL，一氧化氮(μmol/L)＝(樣品管OD/標準管OD)×100。腦組織鈉、鉀、鈣含量的測定，取勻漿液上清液，用火焰分光光度計測定雙側紋狀體鈉、鉀含量，用全自動生化分析儀測定鈣含量，所測定的數值用每克腦組織中含有離子的tanol數表示。

1．5 統計學處理 各組結果采用SAS 8.12軟件包統計，計量資料用均數±標準差(x±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，組內比較采用配對t檢驗，P＜0.05為差別有統計學意義。

2 結 果

假手術組左、右側紋狀體各項含量基本相同；模型組左側紋狀體鈉、鈣、水及一氧化氮含量顯著升高，而鉀含量顯著降低，與對側紋狀體及假手術組比較均有統計學意義(P＜0.01)；腦心通組左側紋狀體鈉含量升高、鉀含量降低，與對側紋狀體及假手術組比較均有顯著的統計學意義(P＜0.01)，但較模型組左側紋狀體鈉含量降低、鉀含量升高(P＜0.01)；腦心通組左側紋狀體鈣、水含量升高，與對側紋狀體及假手術組比較差別均有統計學意義(P＜0.05)，而與模型組比較，鈣含量降低(P＜0.05)，水含量有降低趨勢，但無統計學意義。腦心通組左側紋狀體一氧化氮含量升高，與對側紋狀體比較有統計學意義(P＜0.01)，而與假手術組比較差別無統計學意義(P＞0.05)，但與模型組比較一氧化氮含量明顯降低(P＜0.01)。詳見表1。

3 討 論

細胞內鈣負荷增加為腦缺血再灌注損傷的基本病理之一，腦缺血再灌注時細胞外液Ca²⁺濃度下降，細胞內鈣超載，使細胞膜受損，通透性增加，同時由于能量代謝障礙引起Na⁺－K⁺泵活性受抑從而導致水鈉潴留。它可使細胞結構和功能破壞，并可促進一系列酶促反應而加速細胞損傷。腦心通可以通過調節細胞內鈣穩態，恢復離子的平衡，減輕腦細胞結構和功能破壞，從而達到抗腦缺血再灌注損傷的作用。

一氧化氮在腦缺血再灌注損傷中的變化及作用引起了人們的廣泛關注。高濃度的NO對細胞有損傷作用，可與超氧陰離子反應生成超氧亞硝酸根離子，后者可降解為OH^-和NO^2-自由基，使細胞膜發生脂質過氧化反應，引起強烈的神經毒性，甚至導致神經元死亡；引起細胞內核酸亞硝?；茐腄NA結構；NO還可與某些亞鐵血紅素的鐵原子結合，形成亞硝酰鐵絡合物，影響到呼吸鏈的成分，進一步加重腦組織能量代謝障礙，可能由此引發及加劇腦缺血再灌注損傷。腦心通可減輕缺血再灌注腦組織中一氧化氮含量升高的程度，通過緩解一氧化氮含量的升高減輕其在缺血后期的損傷作用，從而起到對缺血再灌注腦保護作用。

本文編輯 王雅潔