復宮寧治療大鼠子宮內膜異位癥的實驗研究

摘 要:目的：探討復方復宮寧對子宮內膜異位癥大鼠異位內膜的抑制作用。方法：采用放免法檢測血清E2水平，采用HE染色和透射電鏡技術觀察復宮寧對異位內膜細胞形態結構的影響。結果：復宮寧組中，異位內膜體積顯著縮小（P<0.01），E2水平明顯下降（P<0.05）；異位內膜腺上皮層明顯變薄，腺體減少；細胞呈矮柱狀甚至扁平狀排列松散，并見較多凋亡現象和間質纖維化，而在位內膜不受影響。結論：復宮寧對大鼠子宮內膜異位癥有明顯的抑制作用，其作用機制可能與其調節E2水平、誘導細胞凋亡有關。

關鍵詞：復宮寧；子宮內膜異位癥；實驗研究；生殖內分泌

中圖分類號：R711.71文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2007）12-036-03

子宮內膜異位癥(內異癥)是婦科常見疑難病，近年來其發病率逐年增加，目前尚無根治方法。內異癥的特征是內膜組織在宮腔外種植和生長，并刺激周圍組織產生炎癥、粘連、包塊、痛經、不孕、月經紊亂等典型臨床癥狀。復宮寧是老中醫治療內異癥的經驗方，以溫腎、活血、祛瘀等中藥配伍，可抑制異位子宮內膜的生長，維護正常子宮內膜的生理功能，且無激素類藥物的副作用。本研究旨在闡明其藥理作用，為臨床提供治療依據。

1 材料

1.1 試驗動物

健康雌性成熟大白鼠，體重130g～150g，由江西中醫學院實驗動物中心提供。

1.2 藥物和試劑

中藥方劑復宮寧主要含有巴戟天、淫羊藿、菟絲子、莪術、紅花、蒲黃、三棱、延胡索等成分，由江西中醫學院附屬中醫院中藥房提供，每1ml含生藥2g。丹那唑膠囊：上海華聯制藥有限公司生產，批號：000602，每粒100mg，丹那唑膠囊內容物與蒸餾水制備的混懸液，5mg/ mL。雌二醇(E2)放免藥盒：天津九鼎醫學生物工程有限公司提供。

1.3 主要儀器 

醫用超凈工作臺SZK型：蘇州空氣技術有限公司生產；HITACHI-600透射電子顯微鏡：日本日立公司生產。

2 方法

2.1 造模

除正常對照組外，其余各組大鼠腹腔注射4％水合氯醛1mL/l00g麻醉，并參考Jones方法^[1]造模，于下腹部正中靠左上方做一長約1.5cm的切口，挑出左側子宮角，結扎子宮系膜血管，切下左側子宮角長約1cm，并行端端吻合術。在洛氏營養液中，縱向切開摘取的子宮角，將子宮內膜與肌層分離，并切取5mm×5mm的內膜組織片段，令其表面上皮對著腹壁，縫于右側子宮系膜，分層縫合腹壁，其它注意事項按照常規手術進行，剩余內膜組織進行組織學檢查，以證實植入物為子宮內膜。二級環境常規飼養。造模30d后，每只大鼠在麻醉狀態下剖腹觀察移植內膜生長情況。移植成活標準：肉眼可見移植物增大，呈隆起的小泡狀，有些形成多房的囊腫，充滿黃色或清亮漿液，被結締組織覆蓋并有血管形成，部分移植物呈黃色或褐色小結。雙腳規測量移植物體積V1＝長×寬×高，單位mm3，預實驗已通過病理證實。

2.2 分組給藥

除正常對照組的5只外，將子宮內膜異位癥模型大鼠隨機分為模型對照組、復宮寧組和丹那唑組，每組10只，每組每日3ml等體積灌胃給藥一次。模型對照組：生理鹽水灌胃；丹那唑組：丹那唑100 mg/kg灌胃，相當于人每日每公斤用藥量的10倍；復宮寧組：2mg/ml復宮寧灌胃。

2.3 檢測項目

灌胃30d后由股動脈取血，離心(2000r/min)30 min，分離血清待檢。接著處死動物，暴露移植物，雙腳規測量移植物體積V2＝長×寬×高，單位mm3。剖取模型對照組正常子宮內膜及治療組的異位、在位內膜組織，進行4%甲醛固定和2.5%戊二醛固定備用。檢測步驟：①放射免疫法測定血清E2：按試劑盒測定步驟進行操作；②制作組織石蠟標準切片(厚3μm)待HE染色觀察；③透射電鏡觀察子宮內膜細胞的凋亡情況。

2.4 統計學處理

實驗數據統計分析采用SPSS 13.0 for windows 統計軟件包進行。數據以χ±s表示，各組用藥前后異位內膜的差異采用配對t檢驗。

3 結果

3.1 各組異位內膜治療前后體積的比較

用藥前各組病灶體積無差異；用藥后，復宮寧與丹那唑對大鼠異位內膜均具有明顯的抑制作用。復宮寧組病灶明顯縮小（P<0．05），有顯著差異，與模型對照組病灶體積相比（P<0.01），有顯著差異。模型對照組自身前后比較，體積不但無縮小，卻繼續生長（P<0.05），說明病變在發展中。

3.2 對子宮內膜異位癥大鼠血清E₂的影響（見表2）

3.3 復宮寧對異位內膜腺細胞形態結構的影響

光鏡下（圖1，2，3）可見，模型對照組異位內膜腺上皮細胞呈高柱狀或矮柱狀排列在囊泡的內腔面，細胞核大，呈橢圓形位于基底部，胞漿豐富，細胞間連接較緊密。內膜間質豐富，其中有個別部位上皮層內陷或疏松，有形成假腺體的特征，一些完整腺腔中還有分泌物存在，呈淡紅色。丹那唑組異位、正位內膜腺上皮層明顯變薄，細胞呈矮柱狀甚至扁平狀松散排列，細胞核不規則，位置不定。復宮寧組異位內膜腺上皮層明顯萎縮， 大部分腺上皮扁平狀，小部分呈低柱狀，固有腺體萎縮、減少或消失，由纖維組織所取代；而正位的子宮內膜則無明顯影響，宮內膜上皮細胞、腺體及間質細胞均無萎縮現象。透射電鏡顯示：復宮寧組與丹那唑組胞體收縮變圓，與鄰接細胞脫離；失去微絨毛，胞漿濃縮，核染色質密度增高并凝聚于核膜周邊，核仁裂解；細胞膜內陷和凋亡小體形成。

4 討論

內異癥是雌激素依賴性的具有惡性腫瘤種植、生長特性的良性病變。異位內膜的凋亡、減弱并伴隨顯著的血清E2升高，導致含有更多存活細胞的經血碎片逆流至腹腔種植后旺盛生長。復宮寧能誘導異位子宮內膜細胞凋亡，與丹那唑療效相似，其調控機制很可能與E2水平下降密切相關。但復宮寧降低E2的作用不及丹那唑，可能因此而具有保護正常子宮內膜的作用。Barbieri^[2]的“雌激素閾值”學說認為，E2在一定范圍內治療效果良好，當控制E2處于閾值時可消退異位病灶又能使E2水平過低產生的副作用降至最低。本實驗體現了中醫中藥調節生殖內分泌的優勢。

目前，激素性藥物和手術治療內異癥都難以根治，且易復發，由于毒副作用大或損傷大而不為患者接受。本實驗已經初步證實了復宮寧對異位內膜生長的抑制作用和對在位內膜的保護作用，因此，復宮寧可能成為當前治療內異癥的有效藥物。

參考文獻：

［1］ Jones R C．The effect of a luteinizing hormone releasing horone agonist levonorgestrel，danazol and ovoriectomy on experimentel endometrlosis in the rat［J］.Acta Endocrlnol，1984，106(2)：282.

［2］ Barbieri R L，Gordon A M C．Hormonal therapy of endometriosis： the estradiol target［J］.Fertil Steril，1994(56)：820-822.

Experimental Research of Fugongning in Treating Endometriosis Rats

Zhu Jinhua， Sun Haoxin

(Jiangxi university of traditional Chinese medicine，Nanchang 330004）

Abstract:Objective:To study the effect of Fugongning on ectopic endometrial tissue-inhibition in Endometriosis rat models.Methods:The content of E2 in serum were determined with radio-immunoassay， slices were subjected to HE staining and electroscope observation to reveal the lesions . Results:The ectopic endometrial tissue shrinked（P<0.01） and E2 in the serum were significantly lower than those of the model group（P<0.05）.Gland epithelium of ectopic endometrial tissue became thinner， the number of the glanduls decreased. ectopic endcmetrial cell was shot cylindrical even tabular with incompact arrangement ，more apoptosis phenomenon and stroma fibration.but eutopic endometria didn't surviv any infection. Conclusion:Fugongning can control the growth of ectopic endometrium distinctively by regularing E2 and promoting the apoptosis of ectopic endcmetrial cell.

Key words: Fugongning；Endometriosis；Experimental research；Endocrine