高效液相色譜法測定白癜風顆粒中補骨脂素和異補骨脂素的含量

摘 要 目的：建立測定白癜風顆粒有效成分含量的方法。方法：采用HPLC對白癜風顆粒中補骨脂素和異補骨脂素的含量進行測定。結果：補骨脂素在0．03126~0．15630μg具有良好的線性關系，異補骨脂素在0．03276~0．16380μg具有良好的線性關系，平均回收率為99．04%，RSD=1．50％(n=5)。結論：該方法靈敏、重現性好，適用于白癜風顆粒中補骨脂素和異補骨脂素的含量測定。

關鍵詞 白癜風顆粒 補骨脂素 異補骨脂素 高效液相色譜法

白癜風是一種皮膚色素脫失、呈現白色斑的皮膚病。據統計，我國約有3000萬的白癜風患者。中醫理論認為，白癜風雖長在外表，根卻在臟腑。系因于情志不舒、氣血不和、脈絡阻滯不通、毛孔閉塞、肌膚失養所致。

白癜風的病因:主要是臟腑失和，肝郁失疏，血熱、外受風溫、濕熱之邪停留在肌膚，導致氣血失調，血不營養肌膚和七情內傷，風邪搏于肌表，日久濕熱內蘊，阻遏氣血津液在人體正常分布流通，促使肝腎不足，肌膚失養，毛竅因子閉塞死亡，氣滯則形成白癜風。其病因與遺傳，免疫功能異常，內分泌代謝功能紊亂，黑色素細胞自身破壞，氨酸、銅離子缺乏，精神緊張，微循環障礙，神經調節功能異常，外傷，化學物質、烈日曝曬等有密切聯系。

中藥白癜風顆粒臨床上治療白癜風的效果比較好。白癜風顆粒由補骨脂、黃芪、紅花、當歸、川芎等15味中藥組成。具有益氣行滯、活血解毒、利濕消斑，驅風止癢之功效，在本院皮膚科應用多年，證實對白癜風等疾病有效。為了控制白癜風顆粒的質量，保證臨床用藥效果，本實驗建立了HPLC測定白癜風顆粒中補骨脂素和異補骨脂素的方法。經方法學考察證實該方法特異性高，回收率和精密度好，結果滿意。

儀器與試劑

Waters 600高效液相色譜儀；Waters[LL] 2487紫外、可見波長檢測器；Breeze色譜工作站；十萬分之一微量分析天平；補骨脂素對照品(110730-200309)和異補骨脂素對照品(0738-200108)購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純，白癜風顆粒由本院自制。

方法與結果

色譜條件1～2：色譜柱，ReliaSil．C18(4．6mm×250mm，5μm)；流動相：甲醇，水(47：53)；流速，1.0ml/min；檢測波長，245nm；柱溫室溫，進樣量μl。對照品溶液的制備：精密稱取補骨脂素對照品10．42mg，異補骨脂素10．92mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1．5ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：取本品粉末約0．5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

陰性對照品溶液的制備：按處方制備取不含補骨脂藥材的樣品顆粒劑，按供試品溶液的制備方法制成相應的陰性樣品溶液。線性關系考察：精密吸取補骨脂素與異補骨脂素混合對照品溶液2、4、6、8、10μl分別注入液相色譜儀，測定補骨脂素與異補骨脂素色譜峰面積。以補骨脂素與異補骨脂素的進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程：y=1．25×10³+7．55×10⁶x，r=0．9997。

結果表明，補骨脂素在0．031264~15630 μg具有良好的線性關系，異補骨脂素在0．03276~0．16380 μg具有良好的線性關系。

精密度實驗：精密吸取同一供試品溶液(批號：050502)5μL，重復進樣6次，分別計算補骨脂素和異補骨脂素的質量分數，結果其RSD分別為0．76％和1．29％。

穩定性試驗：精密吸取對照品溶液5μL，分別于0、2、4、24、36小時測定峰面積，計算得補骨脂素和異補骨脂素峰面積的RSD分別為1．99％和1．62％，表明對照品補骨脂素和異補骨脂素在36小時穩定。

重現性實驗：取樣品，精密稱定5份，制備供試品溶液，進樣測定計算補骨脂素和異補骨脂素的質量分數，其RSD為0．59％。

回收率實驗：采用加樣回收法。取批號為050501的樣品5份，每份0．25g，置具塞錐形瓶中，各精密加入補骨脂素和異補骨脂素混合對照品0．14mg，制備供試品溶液，進樣，測定。結果補骨脂素和異補骨脂素平均加樣回收率為99．04％，RSD為1．50％。

樣品測定：取3批白癜風顆粒制備供試品溶液。精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5μL，進樣，測定，結果見表1。根據結果，暫定本品以干燥品計，含補骨脂素和異補骨脂素總含量不得少于0．22mg／g。

討 論

流動相的確定：本實驗曾選擇乙醇-水溶液系統，結果不太理想，補骨脂素和異補骨脂素的出峰區間有干擾，峰形欠佳。而采用本實驗的色譜條件即甲醇-水系統，補骨脂素和異補骨脂素的峰形得到明顯的改善，且干擾減少 。

參考文獻

1 CHP（中國藥典）.Vol I.2005

2 Song B S，Li H B，Shi H X .Determination of psoralen in shuanghuangshengxue Granule Chin Tradit Herb Drugs(中草藥)，2000，31（2）：106-107