ＨＰＬＣ法測定穿龍骨刺顆粒中淫羊藿苷的含量

摘 要:目的：建立高效液相色譜法測定穿龍骨刺顆粒中淫羊藿苷含量的方法。方法：采用Hypersil-ODS2色譜柱，以乙腈-水（30：70）為流動相，檢測波長為270nm。結果：淫羊藿苷在0.0494～2.47μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系，相關系數為0.9999，平均回收率為98.47%(RSD=1.94%，n=6)。結論：快速簡便，精密度好，靈敏度高，可作為控制穿龍骨刺顆粒質量的方法。

關鍵詞：穿龍骨刺顆粒；淫羊藿苷；HPLC

中圖分類號：R284.1文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2007）24-036-02

穿龍骨刺顆粒是由穿山龍、淫羊藿、狗脊、川牛膝、熟地黃和枸杞子等六味藥組成，具有補腎，健骨，活血，止痛的作用，臨床上用于治療骨質增生，骨刺疼痛。淫羊藿為方中主藥，淫羊藿苷為其主要有效成分。因淫羊藿中淫羊藿苷的含量常用HPLC法測定^[1，2，3]，故本文采用高效液相色譜法測定穿龍骨刺顆粒中淫羊藿苷的含量，為評價產品質量提供理論依據。

1 儀器和試藥

日本島津LC-2010系列液相色譜儀；超純水器（Mililpore）；AS5150A超聲波發生器（奧特賽恩斯儀器有限公司）。淫羊藿苷對照品（供含量測定用，中檢所提供，批號:110737-200312）；穿龍骨刺顆粒（批號060201，060202，060203）以及陰性樣品由福州海王金象中藥制藥股份有限公司提供。乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。 

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS2（5μm，4.6×250mm），柱溫：室溫；流動相：乙腈-水（30∶70），流速：1ml#8226;min^-1；檢測波長為270nm；進樣量：10μl。理論板數按淫羊藿苷峰計算應不低于2000。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取淫羊藿苷對照品10mg，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備

取本品裝量差異項下的內容物約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，稱定重量，超聲處理30min，取出，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 空白試驗

按處方及生產工藝，制備不含淫羊藿的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備陰性溶液。

2.5 檢測

分別精密吸取淫羊藿苷對照品溶液、供試品溶液及陰性溶液各10μ，按上述色譜條件，注入高效液相色譜儀進行測定，實驗結果陰性溶液在與對照品相應的保留時間處，無峰出現，表明方中其余各味藥對淫羊藿苷色譜峰無干擾。結果見圖1。

A淫羊霍苷對照品色譜圖，B穿龍骨刺顆粒樣品色譜圖，C穿龍骨刺顆粒陰性樣品色譜圖。

2.6 線性關系考察

配制不同濃度的淫羊藿苷對照品溶液，分別精密吸取10μl注入高效液相色譜儀中，測定峰面積，以峰面積A（mAU）為縱坐標，相應的進樣量（ug）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：y=200000x+13529，r=0．9999。表明淫羊藿苷在0．0494～2.47μg范圍內呈良好的線性關系。

2.7 重復性試驗

精密稱取樣品（批號：060201）6份，分別按上述方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進行測定并計算淫羊藿苷含量，結果淫羊藿苷平均含量為1.5330mg/g，RSD=1.06%，表明重復性良好。

2.8 穩定性試驗

精密稱取樣品（批號：060201）1份，按樣品測定方法制備供試品溶液，在室溫下放置0，2，4，6，8，10，12，24小時，按上述色譜條件測定峰面積，計算相對偏差，得RSD=1.33%，說明樣品液中的淫羊藿苷在24小時內穩定。

2.9 加樣回收率試驗

稱取已知含量的穿龍骨刺顆粒（批號：060201）細粉（過4號篩），約0.5g，精密稱定，采用加樣回收試驗，分別精密加入淫羊藿苷對照品適量，同上法操作制備供試品溶液，并按上述的色譜條件進行測定，淫羊藿苷平均回收率為98.47％，RSD為1.94％，表明該方法可行(結果見表1)。

2.10 樣品測定

取樣品（批號：060201，060202，060203）按2.3方法制備成供試品溶液，按上述的色譜條件操作，測定淫羊藿苷的含量（結果見表2）。

3 討論

3.1 淫羊藿苷的含量測定方法

以高效液相色譜法的應用最為廣泛，參照中國藥典及文獻報道的色譜條件，比較乙腈-0.4%磷酸(23∶77)，甲醇-0.4%磷酸溶液(38∶62)及乙腈-水(30∶70)的分離效果，結果以乙腈-水(30∶70)的分離效果較為理想，在此條件下淫羊藿苷與其它組分能達到基線分離，陰性樣品無干擾。

3.2 供試品溶液制備過程中的比較

比較以稀乙醇和乙醇為提取溶劑，對樣品進行處理，結果以稀乙醇提取完全，重復性好，故選擇稀乙醇為提取溶劑。另外對提取時間15min、30min和60min進行了考察，結果超聲提取30min和60min淫羊霍苷含量相差不大，故選擇提取時間為30min。

3.3 實驗結果表明

本法快速、簡便、準確，可作為穿龍骨刺顆粒的含量測定方法，同時為該制劑的分析提供參考依據。

參考文獻：

［1］ 國家藥典委員會編.中國藥典(2005年版)(Ⅰ部)［S］.北京:化學工業出版社，2005.229.

［2］ 王旭東.淫羊藿提取物中淫羊藿苷含量的HPLC測定［J］.中草藥，2003，34(8):717-718.

［3］ 伍毅，鄭國桑.高效液相色譜法測定復聰香液中淫羊藿苷的含量［J］.中國藥房，2005，16(9):702.