ＲＰ－ＨＰＬＣ測定內消瘰疬片中柚皮苷的含量

摘 要:目的：測定內消瘰疬片中柚皮苷的含量。方法：高效液相色譜法。Alltech C18色譜柱， 乙腈-水(0.2%磷酸)溶液(23:77)；檢測波長為283nm。結果：柚皮苷在0.052～0.52 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系(r=0.9997)。平均回收率99.79%(n=6，RSD=1.52%)。結論：操作簡便、結果準確，可用于該制劑的質量控制。

關鍵詞：內消瘰疬片；RP-HPLC；柚皮苷

中圖分類號：R284.1文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2007）24-032-02

內消瘰疬片是由夏枯草、玄參等17味中藥組成的片劑，具有軟堅散結的功效^[1]。現代研究表明，枳殼中主要含有黃酮、少量生物堿及揮發油三大類成分，其中最能體現枳殼特征的成分是黃酮類成分中的柚皮苷相對含量比較高，藥理活性較強，文獻報道有TLC-UV^[2]、HPLC^[3]測定枳殼中柚皮苷含量的方法。

1 儀器、試藥與樣品

1.1 儀器

waters 2695高效液相色譜儀。BP211D型電子天平(十萬分之一，德國Sartorius公司);KQ-500E型超聲波清洗(昆山市超聲儀器有限公司);Milli-Q超純水(Millipore，法國);watreman0.45μm濾膜。

1.2 試劑

乙腈（色譜純，fisher公司），磷酸（分析純，北京化工廠），超純水（Milli Q 超純水，過0.2μm微孔濾膜）。

1.3 樣品

市售內消瘰疬片。

1.4 對照品

柚皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所購置，批號：110722-200309，供含量測定用）。

2 含量測定

2.1 色譜條件

色譜柱: Allsphere ODS-25u (4.6×250mm)，柱溫:25°C。流動相為乙腈-水(0.2%磷酸)溶液(23∶77)；檢測波長為283nm；流速：1ml/min。

2.2 對照品溶液的制備

取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含26μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品適量，研細，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％乙醇25ml，密塞，稱重，超聲處理60分鐘，放至室溫，再稱定重量，必要時用50％乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5ml，置10ml量瓶中，加50％乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.4 陰性對照試驗

用除枳殼藥材外的其它藥材的處方量，照工藝要求制備陰性對照品，按質量標準正文中含量測定項下進行高效液相色譜試驗，所得陰性對照色譜圖中，在內消瘰疬片色譜圖中柚皮苷峰的出峰位置上未出現吸收峰，表明處方中其它藥材對柚皮苷含量測定無影響(見圖1~3)。

2.5 線性關系的考察

精密吸取濃度為26μg/ml的柚皮苷對照品溶液2，5，8，10，15，20μl，注入液相色譜儀，按“2.1”色譜條件分析，測定各自峰面積，以對照品進樣量（μg）為橫坐標，峰面積值為縱坐標，求得回歸方程：y=2044452.89x-2215.09，r=0.9997。結果表明柚皮苷在0.052～0.52μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗

取內消瘰疬片供試品溶液10μL，重復進樣6次，測定峰面積RSD為1.29%，表明精密度合格。

2.7 穩定性試驗

取內消瘰疬片供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24小時各進樣10μL，測定柚皮苷峰面積RSD為1.97%。結果表明:樣品在24h內性質穩定。

2.8 重復性試驗

取內消瘰疬片樣品（同一批號），共6份，研細，取約1g，按照供試品溶液制備操作，按“2.1”色譜條件分析，測定每份樣品中柚皮苷含量。結果樣品中柚皮苷平均含量為1.618mg/g，RSD為1.55％，符合要求。

2.9 柚皮苷回收率試驗

取同一批號樣品，研細，取約0.5g，共6份，精密稱定，分別精密加入對照品儲備液(濃度0.032mg/ml)各25ml，再按照“2.3”供試品溶液制備操作，制得供試品溶液，按“2.1”色譜條件分析，計算回收率，結果平均回收率為99.79％，RSD為1.52％。結果見表1。

測定結果提示:本方法回收率在98.29%~102.53%之間，RSD為1.52%。

2．10 耐用性試驗

2.10.1 不同色譜柱的耐用性

按“2.1”色譜條件，使用Agilent HC-C18柱 5μm (4.6mm×250mm)對內消瘰疬片供試品溶液進行分離，測試結果柚皮苷可以與相鄰的組分分離，說明柱子的耐用性好。

2.10.2 不同儀器的耐用性

按“2.1”色譜條件，用Allsphere ODS-2 5u柱 5μm (4.6mm×250mm)，采用waters 2695高效液相色譜儀對內消瘰疬片供試品溶液進行分離，測試結果柚皮苷可以與相鄰的組分分離，說明儀器的耐用性好。

2.11 樣品含量測定

分別取三個批號內消瘰疬片樣品，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液10μL，供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測定峰面積，計算內消瘰疬片中柚皮苷的含量。結果見表2。

3 討論

供試品提取方法的選擇：提取溶劑為70％乙醇，采用加熱回流方式，提取時間為1小時所測結果，和超聲處理方式提取1小時結果無顯著差別，超聲提取操作較為簡便，故采用超聲提取的方法。提取溶劑的選擇：本實驗使用了50%乙醇、70%乙醇、90％乙醇三種溶媒提取，結果顯示，提取溶劑為50%乙醇，測得的樣品含量高于其它兩種溶劑，故采用50%乙醇為提取溶劑。提取時間的選擇：本實驗考察了超聲處理30分鐘、60分鐘、90分鐘，結果提取60分鐘已將樣品中柚皮苷提取完全，故將提取時間定為60分鐘。流動相的選擇：參考《中國藥典》2005年版枳殼^[4]項的流動相及文獻^[2，3]報道流動相，進行試驗，反復摸索，考察了甲醇-水系統，乙腈-水系統，甲醇-磷酸鹽緩沖液系統，最終選定乙腈-水(0.2%磷酸)溶液(23:77)系統，樣品中柚皮苷峰形較好，與其它組分均可達到基線分離，空白對照亦無干擾。本實驗結果表明，用本文HPLC法測定內消瘰疬片中柚皮苷的含量，方法靈敏度高、專屬性強、重現性好，可有效控制內消瘰疬片質量。

參考文獻：

［1］ 中華人民共和國衛生部藥品標準.中藥成方制劑［S］.第十五冊，34.

［2］ 楊書斌，王琦，張典瑞.薄層層析—分光光度法測定枳殼中的橙皮苷和柚皮苷［J］.中國中藥雜志，1994，19(6):359.

［3］ 江波，石典花，袁振海.HPLC測定枳殼飲片中柚皮苷的含量［J］.中國現代中藥，2007，9（3）：12.

［4］ 國家藥典委員會編.中國藥典（Ⅰ部）［S］.北京：化學工業出版社，2005.171.

Determination of the Content of Naringin in Neixiao Luoli Pian by HPLC

Abstract: Objective:To determine the content of Naringin in Neixiao Luoli Pian. Method:It was assayed by HPLC. The column was Alltech C18， the mobile phase was acetonitril-water（0.2%orthophosphoric acid）(23:77). The UV detection wavelength was 283nm. Results:There was a good liner relationship within the concentration range of 0.052～0.52μg of Naringin (r=0.9997).The average recovery was 99.79%(n=6，RSD=1.52%). Conclusion:Results obtained showed that its a reliable and accurate method for the quality control of Neixiao Luoli Pian.

Key word:Neixiao Luoli Pian; HPLC ; Naringin