慢支咳喘寧膠囊對實驗性慢性支氣管炎大鼠肺組織中ＥＧＦ和ＩＬ－１β含量的影響

摘 要:目的：探討慢支咳喘寧膠囊治療慢性支氣管炎(Chronic Bronchitis，CB)的作用機制。方法:大鼠氣管內注入脂多糖制造動物模型，放射免疫法測定各組大鼠肺組織中EGF和IL-1β的含量。結果：模型組大鼠肺組織中EGF和IL-1β的含量均較空白組明顯升高(P<0.05)；與模型對照組比較，治療各組肺組織中EGF和IL-1β含量明顯降低(P<0.05)。結論：慢支咳喘寧膠囊可降低EGF和IL-1β的含量，減輕炎癥反應。

關鍵詞：慢支咳喘寧膠囊；慢性支氣管炎；EGF；IL-1β

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2007）24-038-03

1 材料

1.1 動物

SPF級大鼠44只，體重(200±20g)，雌雄各半，實驗動物質量合格證編號：SCXK(甘)2004-0006，由甘肅中醫學院科研實驗中心提供。

1.2 試劑盒

EGF放免試劑盒(批號:060102)、IL-1β放免試劑盒(批號:060302)均購自博士得生物工程有限公司。

1.3 藥品

慢支咳喘寧膠囊由甘肅中醫學院科研實驗中心中藥制劑實驗室提供，每克膠囊含生藥5g。臨用時，用蒸餾水將咳喘寧膠囊配制成所需濃度的混懸液。蛤蚧定喘膠囊(批號：060728)，北京同仁堂科技發展股份有限公司制藥廠生產。

2 方法

2.1 分組

SPF級大鼠44只，隨機分為空白對照組、模型對照組、慢支咳喘寧膠囊低劑量組、慢支咳喘寧膠囊中劑量組、慢支咳喘寧膠囊高劑量組、蛤蚧定喘膠囊6組，模型對照組9只，其余各組每組7只。

2.2 造模與給藥

大鼠慢性支氣管炎(以下簡稱慢支)模型的制備，參照文獻^[1，5]改進。除空白對照組外，其余各組用2%戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定于操作臺，常規消毒，縱向切開頸部，分離皮下，暴露氣管，4號針頭穿刺氣管，注入脂多糖(LPS Sigma公司，用生理鹽水稀釋成200mg/200mL)0.2mL。第8天時，隨機選取模型對照組大鼠雌雄各1只，斷頸處死，取右肺中部組織在4%甲醛溶液中固定，再經過脫水、浸蠟、包埋等處理后切片，常規HE染色，作成病理切片，光鏡下觀察。

從造模第8天起，空白對照組，灌服0.9%氯化鈉溶液10ml/kg，1次/天；模型對照組，灌服0.9%氯化鈉溶液10ml/kg，1次/天；慢支咳喘寧膠囊低劑量組，每日用藥劑量0.44g/kg(相當于臨床用量5倍)以0.44g/ml的慢支咳喘寧混懸液灌服；慢支咳喘寧膠囊中劑量組，每日用藥劑量為0.89g/kg（相當于臨床用量10倍）以0.89g/ml的慢支咳喘寧混懸液灌服；慢支咳喘寧膠囊高劑量組，每日用藥劑量1.78g/kg(相當于臨床用量20倍)以1.78g/ml的慢支咳喘寧混懸液，1次/天灌胃；陽性對照組用蛤蚧定喘膠囊，每日用藥劑量1.0g/kg(相當于臨床用量20倍)，以1.0g/ml的蛤蚧定喘膠囊混懸液，1次/天灌胃，給藥共20天。

2.3 標本制備與檢測方法

給藥結束后第2天，所有大鼠斷頭處死，取肺組織，將肺組織用冰生理鹽水沖洗，濾紙吸濕后，稱取濕重0.3g左右加入預冷的生理鹽水，用電動勻漿器制成10%的肺組織勻漿，4℃6000r/min離心5分鐘，提取上清液，-20℃凍存待檢測。

指標檢測采用放射免疫法檢測，嚴格按試劑盒說明書操作。

2.4 統計學處理

數據用均數±標準差(X±s)表示，采用SPSS10.0統計軟件進行方差分析。

3 結果

3.1 空白對照組與模型對照組大鼠支氣管和肺泡組

織形態學比較

空白對照組：可見細支氣管粘膜上皮完整，細胞排列整齊，細支氣管壁及肺泡無明顯病理形態學改變。

模型對照組：可見支氣管纖毛柱狀上皮細胞部分脫落，支氣管粘膜下肌層局部增生，粘膜層、粘膜下層出現大量以淋巴細胞為主的慢性炎細胞浸潤。肺泡上皮細胞部分壞死脫落，肺泡間隔明顯增寬，伴有大量慢性炎細胞浸潤。

3.2 慢支咳喘寧膠囊對慢性支氣管炎大鼠肺組織中

EGF和IL-1β含量的影響

結果顯示，模型對照組大鼠肺組織中EGF和IL-1β含量較正常組明顯升高(P<0.05)；經治療用藥，治療各組肺組織EGF和IL-1β含量均低于模型組(P<0.05)；慢支咳喘寧膠囊高劑量組中EGF和IL-1β含量低于慢支咳喘寧膠囊中劑量組(P<0.05)；慢支咳喘寧膠囊中劑量組低于慢支咳喘寧膠囊低劑量組，說明高、中、低劑量間有一定的量效關系；慢支咳喘寧膠囊高劑量組與蛤蚧定喘膠囊組之間無明顯統計學差異(P>0.05)。

4 討論

本實驗采用氣管內注入脂多糖的方法建立大鼠慢性支氣管炎模型。造模后大鼠的全身狀態：模型組大鼠出現倦怠，活動減少，毛發逐漸失去光澤，造模后的最初幾天，模型組大鼠飲水增加，1周后進食飲水均減少，體重增加較正常組慢。大鼠造模后，可見明顯的氣道痰鳴音，各治療組治療10d后，痰鳴音逐漸減輕；而模型組大鼠氣道痰鳴音改變不明顯。

光鏡下可見模型組大鼠各組支氣管有不同程度的慢性炎細胞(淋巴細胞、漿細胞和單核細胞)，以及少量中性粒細胞浸潤。黏膜上皮細胞嚴重受損(呈現為纖毛倒伏、粘連)，杯狀細胞增多，肺泡隔增寬，有炎細胞浸潤及毛細血管擴張、充血，肺邊緣可見支氣管擴張，其組織病理學改變與文獻報道相近^[6]。

近年的研究結果顯示，慢支存在明顯的以中性粒細胞為主的慢性氣道炎癥反應。慢支的氣道病理改變正是慢性炎癥的表現或結果^[1~4]。慢性支氣管炎的病理改變主要表現為氣管、支氣管壁的、慢性炎性細胞浸潤，腺體的粘液泡增生、肥大，漿液型及混合型腺泡發生粘液變，腺泡及導管因粘液潴留而擴張，粘液上皮的杯細胞增生，分泌亢進。如果慢支反復急性發作，則會逐漸出現氣管壁增厚，支氣管軟骨破壞，病變繼續向細支氣管、肺泡蔓延^[5]。而慢支氣道的這些病理變化與慢性氣道炎癥關系密切，通過慢支咳喘寧膠囊治療后，病理改變明顯改善。

LPS是革蘭陰性菌細胞壁層結構，它可刺激單核細胞、內皮細胞及中性粒細胞等合成釋放一系列炎性介質如（TNFa、IL-1β），介導氣道及肺組織的炎癥反應。

IL-1β通過促進趨化因子、環化加氧酶-2（cox-2）及誘導型一氧化氮合酶（iNOS）和細胞黏附分子的表達而引起炎癥反應；可誘導血管內皮細胞合成黏附分子（ICAM-1）增加；還可激活白細胞表面的黏附分子，使其表達上調。并與內皮細胞上相應的黏附分子相互作用，導致白細胞快速黏附，并跨過內皮轉移到炎癥部位參與炎癥反應。

表皮生長因子(epidermal growth factor， EGF)是一種含53個氨基酸的單鏈多肽類生長因子，最初因其能刺激表皮的生長和角化而得名，EGF作為一種生長因子對上皮細胞以及許多其它細胞有促進分裂作用。對細胞代謝，EGF具有短期和長期作用。EGF與靶細胞上特異性的EGFR結合能激動并維持一系列與細胞生長、增殖、轉化等有關的生化過程。在炎癥反應及變態反應中具有重要的調節作用。研究表明，慢性支氣管炎患者肺組織中EGF的含量增高，且與病情輕重程度相關。

研究結果顯示，模型對照組大鼠肺組織中EGF和IL-1β含量較空白對照組均明顯升高，表明EGF和IL-1β的表達在慢性支氣管炎發病中起重要作用，EGF和IL-1β的過多釋放介導了慢性支氣管炎的呼吸道損傷過程。治療各組肺組織中EGF和IL-1β含量均低于模型對照組，說明慢支咳喘寧膠囊及蛤蚧定喘膠囊均能通過降低EGF和IL-1β的含量以減少炎性細胞的趨化和炎性因子的釋放，進而控制慢性支氣管炎的發展。

綜上所述，經動物實驗證實，EGF和IL-1β對慢性支氣管炎的形成和發展過程產生重要影響，慢支咳喘寧膠囊可有效抑制EGF和IL-1β的生成，控制慢性炎癥反應。本實驗的結果為研制治療慢支等氣道炎癥性疾病有效中藥復方制劑提供了一定的實驗依據。慢性支氣管炎屬于中醫咳嗽、痰飲、喘證的范疇。其病因病機與外邪入侵和內傷有關，病位主要在肺，但與脾、腎的關系也十分密切。病機以本虛標實為特點，本虛多為肺、脾、腎三臟虛損，標實多為氣滯、痰凝、血瘀互結，導致病情纏綿不愈，最終形成慢性虛性病理損害。慢支咳喘寧膠囊以烈香杜鵑為君藥，以止咳、祛痰、平喘；以黃芩、浙貝、百部為臣藥，黃芩苦寒，善清肺熱，浙貝苦寒，既可化痰止咳，又可清肺熱，百部甘苦，長于潤肺止咳，三藥相伍，既可清肺，又可潤肺，配合君藥，共奏止咳、祛痰、平喘之功。脾為生痰之源，肺為儲痰之器，肺病日久，內有郁結之痰，復感外邪，肺氣郁閉，血行無力，積而為瘀，以致痰瘀互結，故佐以莪術以行氣破血祛瘀，腎陽為一身陽氣之根本，肺之宣降有賴于腎陽的推動，且腎主納氣，故佐以淫羊藿以補腎壯陽，納氣平喘。諸藥配伍，共成清熱化痰，潤肺止咳平喘之劑。

參考文獻：

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