ＨＰＬＣ法測定復方丹參滲透泵型控釋片中丹參酮ＩＩＡ的含量

摘 要：目的：建立以HPLC法測定復方丹參滲透泵型控釋片中丹參酮IIA的含量的方法。方法：色譜柱為Hypersil ODS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動相為甲醇∶水(85∶15)；流速為1.0 mL#8226;min-1；檢測波長為270nm。結果：丹參酮IIA在1.6～14.4μg#8226;mL-1濃度范圍之間線性良好，r=0.9998；平均回收率為98.41%，RSD =164%。結論:本法準確、靈敏、重現性好、操作簡便，主峰與雜質峰分離完全，可用于復方丹參滲透泵型控釋片的質量控制。

關鍵詞：高效液相色譜法；復方丹參；滲透泵片；丹參酮IIA

中圖分類號：R284.1文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2008）02-042-03

復方丹參片收載于《中國藥典》2005版一部［1］，由丹參、三七、冰片三味藥組成，用于心絞痛、心肌梗塞等疾病的治療。方中丹參最主要的脂溶性成分為丹參酮Ⅱ（TanshinoneⅡA），其量約為藥材的0.1% ～0.9%，具有廣泛的生理作用，如天然抗氧化、抗心腦血管疾病、抗菌消炎、抗腫瘤及抗肝纖維化和抗肝損傷作用等［2］。筆者將其改劑型制成滲透泵型控釋片，并采用高效液相色譜(HPLC)法，對復方丹參滲透泵片中脂溶性成分丹參酮IIA的含量進行了測定。本方法準確、靈敏、重現性好、操作簡便，可用于復方丹參滲透泵片的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(日本島津)；SPD—10AVP型紫外檢測器；HL-1恒流泵（上海青浦滬西儀器廠）；6010型可見紫外分光光度計(安捷倫科技上海有限公司)；AS10200A型超聲波清洗機(天津奧特賽恩斯儀器公司)；METTLER AG285電子天平。

1.2 試藥

丹參酮ⅡA對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：0766-200610)；復方丹參滲透泵型控釋片(實驗室自制，批號：070928，071012，071020)；甲醇(色譜純)；雙蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODSCl8柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：甲醇∶水(85∶15)；流速：1.0mL#8226;min-1；檢測波長：270nm；柱溫：室溫；進樣量：20μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取丹參酮IIA對照品10 mg，置50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。(每1mL溶液中含丹參酮ⅡA 40μg)。

2.2.2 供試品溶液的制備

取樣品5片，仔細剝去薄膜衣，在研缽中研碎，精密稱取粉末（相當于丹參酮IIA 200μg），精密稱定，置磨口錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，塞緊，稱定重量。超聲處理15分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備

用缺丹參的其余藥材，按處方比例和工藝制成陰性制劑，按“2.2.2”項方法制成陰性對照溶液。

2.3 系統適應性試驗

分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項色譜條件記錄色譜圖。結果，丹參酮ⅡA對照品的保留時間約為11.6min；供試品色譜中丹參酮ⅡA與雜質峰分離良好，分離度不低于1.5，保留時間約為11.6min，理論塔板數按丹參酮IIA峰計算應不低于2000；陰性對照色譜在丹參酮ⅡA相應位置上無干擾峰。色譜詳見圖1。

2.4 線性關系考察

精密吸取對照品溶液0.4，1.2，2.0，2.8，36mL，分別置于10mL的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別吸取上述各液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積值A對進樣濃度X(μg#8226;mL-1)作線性回歸，得回歸方程：A=44755X+1167.5，r=09998，結果表明，丹參酮ⅡA進樣濃度在線性范圍為1.6～14.4μg#8226;mL-1范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

取同一供試品溶液，按“2.1”項色譜條件重復進樣5次。結果，丹參酮ⅡA峰面積的RSD=153％(n=5)。

2.6 穩定性試驗

取供試品溶液，分別放置0、4、8、16、24、48h后，按“2.1”項色譜條件進樣，測定峰面積。結果，峰面積的RSD=0.92％，表明供試品溶液在48h內基本穩定。

2.7 重現性試驗

取同一批號的滲透泵片5份，按“2.2.2”項方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進樣。結果，丹參酮ⅡA含量的RSD=1.06％(n=5)，表明本方法重現性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取9份已知含量的復方丹參滲透泵型控釋片粉末適量（約含丹參酮ⅡA 200μg），每3份為一組，每組分別精密加入40μg#8226;mL-1 的丹參酮ⅡA對照品溶液4.0、5.0、6.0mL，按“2.2.2”項方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進樣，計算加樣回收率，結果加樣回收率(n=9)為98.41%，RSD為164%。

2.9 樣品含量測定

取3批復方丹參滲透泵型控釋片樣品(批號：070928、071012、071020)，按“2.2.2”項方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進樣測定，按外標峰面積法計算樣品中丹參酮IIA的含量，結果詳見表1。

3 討論

本實驗通過紫外分光光度計對丹參酮Ⅱ 在200nm～400nm范圍內進行掃描，發現丹參酮Ⅱ在270nm 處吸收度最大，故檢測波長選擇270nm。本實驗的檢測條件與《中華人民共和國藥典》(2005年版)中對復方丹參片中丹參酮Ⅱ 的含量測定的HPLC條件相符。

因丹參酮ⅡA對光熱敏感、易分解變質，不穩定，在制備過程中應加以注意，標準品應置于棕色容量瓶中，配制溶液時應注意低溫避光操作。

本實驗試用了不同比例的流動相及不同的流速進行篩選優化后，結果當流動相為甲醇∶水為85∶15，流速為1.0 mL#8226;min-1時，樣品中丹參酮IIA峰與雜質峰完全分離，出峰時間短，峰形好。選擇0.6，0.8，1.0，1.2 mL#8226;min-1的流速進行試驗，發現流速為10 mL#8226;min-1時峰形好，結果最為滿意。進樣濃度在1.6～14.4μg#8226;mL-1范圍內線性良好，r=09998，回收率高。選定上述色譜條件的流動相，可作為該制劑丹參酮IIA含量的測定。

參考文獻：

［1］ 中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典（2005年版一部）［S］.北京：化學工業出版社，2005.

［2］ 石 遠，姜同英，王思玲.丹參酮ⅡA及其制劑開發［J］.世界臨床藥物，2007，28（7）：439-441，443.

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(責任編輯：王尚勇)

Determination of Tanshinone ⅡA in Compound Danshen

Osmotic Pump Controlled Release Tablets by HPLC

Su Dan，Hu Rongfeng，Yang Min，Zhao Hong，Zhu Jinyan

(1.Anhui College of Traditional Chinese Medicine，College of Pharmacy；Hefei， Anhui230038，China； 

2.Anhui Province Key Laboratory of R D of Chinese Medicine，Hefei， Anhui， 230038，China)

Abstract:Objective:To develop a HPLC method for the determination of Tanshinone ⅡA in Compound Danshen osmotic pump controlled release tablets.Methods： Chromatography was carried out on a Hypersil ODS C18(4.6mm×250mm，5μm)，using a mobile phase of alcohol-water(85：15) with a flow rate at 1.0 mL#8226;min-1. The UV detective wavelength was 270 nm.Results：Within1.6～14.4μg#8226;mL-1Tanshinone ⅡA had a good 1inearity (r=0.9998)，the average recovery was 98.41% with RSD of 1.64%. Conclusion： The method is accurate，sensible， reproducible，simple and can be used in the quality control of Compound Danshen osmotic pump controlled release tablets. 

Key words: HPLC；Compound Danshen；Osmotic pump controlled release tablets；Tanshinone