用正交設(shè)計(jì)法對(duì)祛痰經(jīng)方的優(yōu)選

摘 要：目的：探討經(jīng)方中哪些藥對(duì)小鼠起主要的祛痰作用。方法：采用正交設(shè)計(jì)組方，以小鼠氣管酚紅排泌量作為指標(biāo)，尋找處方中的優(yōu)化成分。結(jié)果：經(jīng)方的祛痰作用明顯，其中以太子參、干黃芪、杏仁對(duì)祛痰具有顯著的影響（P＜0.05）。結(jié)論：經(jīng)實(shí)驗(yàn)篩選得出太子參、干黃芪、杏仁有顯著的祛痰作用。

關(guān)鍵詞：正交設(shè)計(jì)；祛痰；處方優(yōu)選；中草藥

中圖分類號(hào)：R289文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2008）02-048-02

祛痰經(jīng)驗(yàn)方作為湖北中醫(yī)學(xué)院附屬門診制劑，其主藥選用了干黃芪、法夏、桔梗，配以魚腥草、陳皮、知母、太子參、炒二芽、神曲、杏仁、蜈蚣、甘草等，經(jīng)過(guò)10多年臨床應(yīng)用，證實(shí)具有化痰平喘、止咳消炎的作用，治療慢性支氣管炎、支氣管哮喘有較好療效。但本方組成藥物過(guò)多，故本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)正交組方，以小鼠氣管酚紅排泌量為依據(jù)，找出此經(jīng)方中起主要作用的藥物，以對(duì)本方進(jìn)行合理的化裁。

1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.1 因素水平的確定

選擇14味藥物為研究因素：干黃芪、法夏、桔梗、魚腥草、陳皮、炒二芽、神曲、杏仁、蜈蚣、知母、太子參、竹茹、五味子、甘草。每個(gè)因素選擇兩個(gè)水平，即給藥和不給藥，以水平1表示不給藥，以水平2表示給藥，列因素水平表（見表1）。

1.2 正交設(shè)計(jì)的選擇

本研究擬從14味藥中優(yōu)選最佳配伍，每個(gè)因素選擇兩個(gè)水平，不考慮各因素間的交互作用，選擇L16(215)正交表并列出實(shí)施方案，見表2。

2 實(shí)驗(yàn)材料

2.1 實(shí)驗(yàn)藥品制備

將按不同處方配好的藥物浸泡1h，加10倍量水，煎煮3次，過(guò)濾，濃縮至0.1g/ml的藥液。以生理鹽水為陰性對(duì)照，以京都川貝枇杷沖劑為陽(yáng)性對(duì)照，研究祛痰經(jīng)方中祛痰作用最強(qiáng)的因素。

2.2 試劑和儀器

試劑：干黃芪、法夏、桔梗、魚腥草、陳皮、炒二芽、神曲、杏仁、蜈蚣、知母、太子參、竹茹、五味子、甘草由湖北中醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)院校醫(yī)院提供，經(jīng)生藥教研室鑒定。酚紅，由上海新中化學(xué)廠生產(chǎn)，批號(hào)：l-60-01-20。京都川貝枇杷沖劑，由京都藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。儀器：721分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；小型通用離心機(jī)(TGL-l6GB型，上海安亭科學(xué)儀器廠)。

2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

采用健康SPF級(jí)昆明種小白鼠，體重(20±2)g，雌雄各半，購(gòu)自湖北省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，共160只，合格證號(hào)：scxk(鄂)2003—2005。

3 實(shí)驗(yàn)方法［1-3］

昆明種小鼠160只，隨機(jī)分為16組。按表2中的給藥因素設(shè)計(jì)ig，按0.2ml/10g給藥5d。第4日給藥后禁食不禁水，末次給藥后0.5h分別腹腔注射0.5％酚紅溶液0.25ml/10g，0.5h后頸椎脫臼法處死小鼠，分離氣管，以5％碳酸氫鈉溶液0.5ml沖洗小鼠氣管及支氣管，來(lái)回沖洗3次，沖洗液置于試管中，再重復(fù)2次，合并沖洗液［4］，高速離心(9500rpm)5min，小心取上清液于紫外可見分光光度計(jì)上，以波長(zhǎng)520nm測(cè)定其吸光度值。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 吸光度值結(jié)果見表2

4.2 結(jié)果分析

4.2.1 經(jīng)方差分析

主要影響因素的大小順序?yàn)椋禾訁ⅲ靖牲S芪＞杏仁＞知母＞魚腥草＞陳皮，結(jié)合水平看處方，為太子參54.6ml、干黃芪81.9ml、杏仁27.3ml、知母54.6ml、魚腥草163.8ml、陳皮54.6ml。

4.2.2 方差分析

方差分析結(jié)果見表3，可以看出，最重要的影響因素為太子參，其次為干黃芪、杏仁，其余各因素影響不大。因此，最佳處方應(yīng)該是太子參、干黃芪、杏仁、知母、魚腥草、陳皮。

5 討論

“痰”有狹義、廣義之分。狹義之痰，指咳吐痰涎；廣義之痰，泛指停在臟腑經(jīng)絡(luò)的病理產(chǎn)物，兩者皆由津液凝聚所成。痰病的成因很多，治法各不相同，如脾失健運(yùn)、濕聚成痰者，治宜燥濕健脾化痰；火熱內(nèi)盛、灼津?yàn)樘嫡撸我饲鍩峄担环卧镪幪潯⑻摶馉q液為痰者，治宜潤(rùn)肺化痰；脾腎陽(yáng)虛、寒飲內(nèi)停，或肺寒留飲者，治宜溫化寒痰；肝風(fēng)內(nèi)動(dòng)、夾痰上擾者，治宜熄風(fēng)化痰。祛痰法一般分為祛痰止咳、化痰除濁、消痰散結(jié)、滌痰調(diào)神4類。祛痰劑是治療各種痰病的方劑，以祛痰藥為主要成分，具有消除痰飲、制止咳嗽的作用。祛痰劑適用于各種痰病，如濕痰證、熱痰證、燥痰證、寒痰證、風(fēng)痰證等。痰之與飲，異名而同類，稠濁者為痰，清稀者為飲，皆為水液代謝的病理產(chǎn)物，乃濕聚而成。痰之為病，無(wú)處不到，胸、腸、胃、經(jīng)絡(luò)、四肢，皆可有之，其發(fā)病常見咳嗽喘促、頭痛眩暈、胸痹嘔吐、中風(fēng)痰厥。因此汪昂在《醫(yī)方集解》中說(shuō)：“在肺則咳，在胃則嘔，在頭則眩，癲狂驚癇以及痰核瘰疬等在心則悸，在背則冷，在脅則脹，其變不可勝窮也。”

本試驗(yàn)采用的16種組方，對(duì)基于臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)得出的祛痰經(jīng)方中14味中藥的祛痰效果進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明，這14味藥中以太子參的祛痰作用最為顯著（P＜0.05)，其次為干黃芪、杏仁，知母、魚腥草也有比較好的效果，其余各因素影響不大。由此得出，該經(jīng)方中以太子參、干黃芪、杏仁、知母、魚腥草、陳皮最為有效。

本研究采用嚴(yán)格、合理的正交設(shè)計(jì)方案篩選了該經(jīng)方，為進(jìn)一步提高臨床療效以及今后在此基礎(chǔ)上篩選祛痰的基本配方提供了依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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［2］ 李儀奎，王欽茂.中藥藥理學(xué)試驗(yàn)方法［M］.上海：上海科技出版社，1991.

［3］ Engler H，Szelenyi I. Tracheal Phenol Red Secretion，a New Method for Screening Mucosecretolytic Compounds［J］.J Pharmacol Methods，1984(11):151-157.

［4］ 彭代銀.強(qiáng)力枇杷沖劑藥效毒性研究和臨床觀察［J］.中成藥，1997，19（11）：41.

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(責(zé)任編輯：杜 靖)