半枝蓮多糖體內(nèi)抗腫瘤及其免疫調(diào)節(jié)作用的實驗研究

摘 要：目的：研究半枝蓮多糖的體內(nèi)抗腫瘤作用和免疫增強作用。方法：通過動物移植性腫瘤實驗觀察半枝蓮多糖對小鼠體內(nèi)腫瘤細胞生長和免疫器官胸腺、脾的影響；通過ANAE法觀察半支蓮多糖對T細胞陽性率的影響。結果：半枝蓮多糖對S180肉瘤生長的抑制率以中劑量為佳；各劑量組對脾臟指數(shù)的影響均有顯著性差異，但大劑量注射(200mg/kg)對胸腺有抑制作用；能夠提高S180荷瘤小鼠T淋巴細胞的百分數(shù)。結論：半枝蓮多糖有抗腫瘤作用和免疫增強作用。

關鍵詞：半枝蓮多糖；抗腫瘤；T細胞

中圖分類號：R730.53文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2008）02-054-03

半枝蓮（Scutellaria barbata D.Don）又名狹葉韓信草，其主要功能為清熱解毒、利尿消腫、止血化淤等［1］。半支蓮多糖是從半支蓮中提取得到的主要成分之一，近年來的藥理實驗表明，半支蓮多糖在體外可以促進conA誘導的小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化［2］，并且對S180肉瘤細胞及腹水肝癌細胞在體外均有抑制作用［3］，但半枝蓮多糖的體內(nèi)藥理實驗未見報道。本文對半枝蓮多糖的體內(nèi)抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用進行了初步研究，報道如下。

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1 實驗材料

1.1 實驗藥品和試劑

半枝蓮多糖（SPS）（徐州弘康科技有限公司，用生理鹽水配成相應濃度備用）；黃芪多糖（APS）（哈爾濱商業(yè)大學博士后工作站提供）；環(huán)磷酰胺（CTX）（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，批號：06061921）；生理鹽水（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：070921A14）；付品紅（上海化學試劑分裝廠生產(chǎn)，批號：900222）；α-醋酸萘酯（國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)，批號：T20070720）；甲基綠（國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)，批號：WF20070529）。

1.2 實驗動物及瘤株

昆明種小鼠，體重(20±2.0)g，雄性，肉瘤S180均購于哈爾濱醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所。

1.3 儀器

Sartorius BS110S型萬分之一電子天平（德國BSS）；電熱恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司生產(chǎn))；XSP-5型顯微鏡(上海光學儀器廠生產(chǎn))；光學顯微鏡（Leica公司生產(chǎn)）

2 方法

2.1 半枝蓮多糖對S180荷瘤小鼠瘤重的影響

①建立小鼠模型:將昆明種小鼠隨機分為6組，每組8只。無菌條件下抽取接種7d的生長良好的S180荷瘤小鼠腹水（活癌細胞數(shù)＞95%），用無菌生理鹽水(體積比1∶4)稀釋，按0.2mL/只，小鼠右腋部皮下接種。②給藥：接種24h后，分別對6組小鼠進行腹腔注射給藥。分別為半枝蓮多糖高200mg/(kg#8226;d)、中100mg/(kg#8226;d)、低50mg/(kg#8226;d)劑量組，陽性組給環(huán)磷酰胺30mg/(kg#8226;d)和黃芪多糖100mg/(kg#8226;d)，模型對照組給相同體積的生理鹽水。連續(xù)給藥10d。③測抑瘤率：停藥次日處死，稱取小鼠瘤重［4］。

抑制率=對照組平均瘤重-治療組平均瘤重對照組平均瘤重×100%

2.2 半支蓮多糖對S180荷瘤小鼠胸腺、脾的影響

實驗動物模型制造方法同2.1，給藥劑量及途徑也相同。末次給藥后24h處死，分別稱取體重、胸腺及脾臟的重量，按公式計算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)［5］。

胸腺指數(shù)（mg/g）=胸腺重/體重

脾指數(shù)(mg/g)=脾重/體重

2.3 半枝蓮多糖對小鼠外周血T淋巴細胞陽性率

的影響（ANAE法）

①實驗動物模型制造方法及給藥劑量與途徑按2.1進行。②小鼠給藥10d，末次給藥24h后，尾部靜脈取血，推片。血涂片自然干燥后，置4℃甲醛一丙酮固定液中30s，流水沖洗半分鐘。待自然干燥，將固定干燥后的血涂片浸入孵育染色液中，置37℃條件下2h，取出后流水沖洗。干澡后，置1%的甲基綠溶液中復染30min。沖洗干燥。干燥后，油鏡下計數(shù)400個淋巴細胞，算出T淋巴細胞的百分數(shù)［6］。

2.4 數(shù)據(jù)處理

用spss14.0軟件處理，各組數(shù)據(jù)由x±s表示，樣本比較采用方差比較。

3 結果

3.1 半支蓮多糖對S180小鼠瘤重的影響

半枝蓮多糖對S180小鼠表現(xiàn)出不同的抑瘤作用，見表1。與生理鹽水組比較，中、高劑量組表現(xiàn)出良好的抑瘤效果，有顯著性差異（p＜0.01），低劑量組有差異（p＜0.05）；與陽性對照組比較，中劑量組與黃芪多糖組比較，抑瘤率有明顯升高，與環(huán)磷酰胺組比較，略有升高。

3.2 半支蓮多糖對S180荷瘤小鼠胸腺、脾臟指數(shù)的

影響

半枝蓮多糖對S180荷瘤小鼠胸腺、脾臟指數(shù)的影響如表2所示。與生理鹽水組比較，半支蓮低、中劑量組胸腺指數(shù)都有顯著提高，而高劑量組明顯受到抑制，且差異顯著（p＜0.05或p＜0.01）；給藥各組脾臟指數(shù)均較生理鹽水組有顯著提高（p＜0.05或p＜0.01），表現(xiàn)出劑量依賴關系，只是高劑量組對胸腺有抑制作用。

3.3 半枝蓮多糖對S180荷瘤小鼠外周血T細胞陽

性率的影響

半枝蓮多糖對S180荷瘤小鼠外周血T細胞陽性率的影響如表3所示。與空白對照組比較，半枝蓮各劑量組的T細胞百分率均有提高，且中、高劑量組有顯著性差異（p＜0.05或p＜0.01），環(huán)磷酰胺組較空白對照有明顯降低。

4 討論

多年來的動物實驗和臨床觀察都表明，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展都伴隨有機體免疫功能的降低，機體對抗腫瘤的免疫反應主要包括細胞免疫和體液免疫，兩者相互配合。胸腺是機體的中樞免疫器官，即免疫細胞產(chǎn)生、發(fā)育、分化、成熟的部位；脾是機體的外周淋巴器官，即成熟的淋巴細胞定居及對外來抗原發(fā)生免疫應答的場所。T細胞是介導細胞免疫應答的主要免疫細胞，它在胸腺中發(fā)育成熟，同時也有輔助和增強體液免疫應答的功能；除此之外，T細胞還有免疫調(diào)節(jié)功能，對維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有一定作用［7］。

本實驗表明半枝蓮多糖在體內(nèi)對S180肉瘤的生長有一定的抑制作用，能夠增加免疫器官的重量，腫瘤抑制率以中劑量為佳，這可能與高劑量對胸腺的抑制有關；且能明顯增加S180荷瘤小鼠T淋巴細胞百分數(shù)，說明半枝蓮多糖作為生物誘導劑，能夠增強荷瘤小鼠的免疫功能而達到抗腫瘤的效果。

參考文獻：

［1］ 蔡震峰，任鳳蓮，申定珠.中草藥半支蓮的研究進展［J］.廣州化學，2006，31(4):55.

［2］ 陸平成，許益民.半枝蓮多糖對細胞免疫的調(diào)節(jié)作用［J］.南京中醫(yī)學院學報，1989(2):32-33.

［3］ 孟延發(fā)，李志孝，張立.半枝蓮多糖SPS4組分的純化及性質(zhì)［J］.生物化學，1993，9(2):224-228.

［4］ 李建軍，雷林生，余傳林.靈芝多糖抗腫瘤作用的免疫學相關性研究［J］.中藥材，2007，30(1):71-73.

［5］ 嚴奉偉，王辰，嚴贊開.菜籽多糖對S180小鼠肉瘤及其免疫能力的影響［J］.食品科學，2007，28(4):309-312.

［6］ 朱辛為，李志馨，竇肇華.T淋巴細胞標記染色-ANAE法的改進［J］.解剖學，2003(3):300-301.

［7］ 郝素珍，王桂琴.實用醫(yī)學免疫學(第一版)［M］.北京：高等教育出版社，2005.

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(責任編輯：杜 靖)

Experiment Research of Effect of Scutellaria Barbata D.Don

Polysaccharides on Antitumor and Immune Regulation in Entrails

Zhang Xiujuan，Yang Shanshan

(Center of Reserch Development on Life Science and Environmental Sciences， 

Harbin University of Commerce， Harbin 150076，China)

Abstract:Objective:To study effect of Scutellaria barbata D.

Don polyaccharides(SPS) on antitumor and immune regulation in entrails. Method:The effect of SPS on antitumor and spleen index and thymus index were observed by tumor transplant experiment of animal；T cell percent was observed by ANAE. Result:SPS can inhibite the growth of S180 and the effect of middle dose group is best； spleen index was influent by every dose group and thymus index was inhibited by big dose(200mg/kg)；SPS could improve T cell percent. Conclusion:SPS has effects on antitumor and immune regulation in entrails.

Key words: Scutellaria barbata D.Don polysaccharides； Antitumor； T cell