玄丹巴布劑的毒理學研究

摘 要：目的：考察玄丹巴布劑經皮用藥的安全性。方法：參照《中藥新藥研究指導原則》，采用最大給藥量試驗觀察皮膚給藥后，動物短期內出現的急性、毒性反應及其程度；結合一般情況觀察與組織病理學檢查，綜合判斷動物貼敷部位的局部組織和乳腺刺激性反應；對豚鼠皮膚多次局部貼敷致敏，觀察其過敏反應。結果：藥物貼敷給藥后對大鼠的最大給藥量為6g/kg，短期內均未見毒性反應及死亡情況；局部刺激性實驗中，動物一般狀況良好，未發生全身反應甚至死亡情況；對豚鼠皮膚多次刺激，致敏試驗顯示藥物對豚鼠皮膚無明顯致變態反應作用。結論：玄丹巴布劑對家兔皮膚無明顯刺激性及毒性作用，其臨床使用安全、可靠。

關鍵詞：玄丹巴布劑；刺激性；急性、毒性；變態反應

中圖分類號：R965 文獻標識碼：A 文章編號：1673-2197(2008)06-030-02

玄丹巴布劑是在膏劑的基礎上改進而來，由丹參、淫羊藿、延胡索、三七、海藻等藥組成，具有活血化瘀、消腫止痛等功效。該藥局部外敷治療乳腺增生，臨床療效顯著^[1]。為了保證玄丹巴布劑臨床使用的安全、有效，我們參照《中藥新藥研究指導原則》^[2]，對其急性、毒性、皮膚刺激性以及過敏反應進行系統性實驗研究。采用最大給藥量試驗，觀察動物在短期內出現的急性、毒性反應及其程度；結合一般情況觀察與組織病理學檢查，綜合判斷是否發生相關局部刺激性反應；對豚鼠皮膚多次局部貼敷給藥致敏以觀察其過敏反應，從而客觀評價其可能存在的毒性，為其臨床應用提供安全性參考依據。

1 材料與方法

1.1 動物

大耳白家兔70只，體重2.0~2.5kg；健康白色豚鼠30只，體重250~300g，均由中國醫科大學實驗動物中心提供。

1.2 試藥

玄丹巴布劑，給藥劑量分別為6g/kg，4g/kg，2g/kg，批號：20051123；巴布劑賦形劑，批號：20051121。均由本院制劑室提供。

1.3 家兔皮膚急性、毒性試驗

將42只家兔隨機分為7組，即賦形劑組、完整皮膚的玄丹巴布劑高、中、低劑量組及破損皮膚的玄丹巴布劑高、中、低劑量組。每組6只，雌雄各半。用10%硫化鈉給家兔背部脫毛，去毛面積約150cm²，破損皮膚的制作采用消毒鐵銼劃破(以滲血為度)。去毛后將受試藥玄丹巴布劑貼于脫毛區，低劑量組以臨床用制劑2g/kg、中劑量組4g/kg、高劑量組為6g/kg，并用無刺激性膠布加以固定，每只動物分籠飼養，給藥24h后去除玄丹巴布劑，去除玄丹巴布劑后1、24、48、72h至第七日，每日觀察并記錄動物的體重、皮毛光澤、飲食、眼和粘膜的變化，呼吸中樞、神經系統、四肢活動和死亡情況，并于7日后處死家兔，解剖觀察其心、肝、脾、肺、腎等臟器的變化。

1.4 家兔皮膚刺激性試驗

取28只成年健康大耳白家兔，雌雄各半，將家兔腹部用10%硫化鈉脫毛，脫毛面積大約150cm²。將大耳白家兔隨機分為7組，即完整皮膚高、中、低劑量組和破損皮膚高、中、低劑量組以及賦形劑組，每組4只。破損皮膚的制作采用砂紙磨損，并作“#”字形切口(以滲血為度)。去毛后動物腹部分別貼敷玄丹巴布劑高劑量組6g/kg、中劑量組4g/kg、低劑量組2g/kg，對照組貼敷賦形劑對照，并用無刺激膠布加以固定，貼藥后24h摘下巴布劑，清洗干凈，觀察動物的一般狀態、行為、體征及局部皮膚有無紅斑和水腫、脫屑、結痂等反應，并觀察是否有色素沉著、皮膚粗糙或菲薄等情況。然后，連續貼藥4周，每天貼敷時間為8h，每天重復上述觀察皮膚反應，停藥后再觀察一周。觀察結束后，取貼敷部位的局部組織和乳腺做組織病理學檢查。

1.5 豚鼠皮膚變態反應試驗

取健康白色豚鼠30只，雌雄各半，用10%硫化鈉將豚鼠背部兩側對稱脫毛，去毛面積3×3cm²。將豚鼠按體重、性別隨機分成三組，每組10只，第一組給玄丹巴布劑，第二組給賦形劑對照組，第三組陽性對照組，陽性致敏物用2、4-二硝基氯代苯配成1%的致敏濃度和0.1%激發濃度(用70%酒精配制)。

(1)致敏接觸：脫毛24h，取玄丹巴布劑0.2g貼敷在豚鼠左側脫毛區，并以無刺激膠布固定封閉，持續6h，第7天和第14天以同樣方法重復一次。賦形劑對照組(給予賦形劑)與陽性對照組(1%的致敏濃度)方法同上。

(2)激發接觸：于末次給玄丹巴布劑致敏后14d，將玄丹巴布劑0.2g貼敷于豚鼠背部左側脫毛區，陽性對照用0.1% 2、4-二硝基氯代苯，空白對照用賦形劑，6h后去掉受試藥物，即刻觀察，并于24、48、72h再觀察有無過敏反應，并按表記錄各時間過敏反應分值并判定結果 。

2 結果

2.1 家兔皮膚急性、毒性試驗

玄丹巴布劑在低劑量2g/kg、中劑量4g/kg和高劑量6g/kg外用時對完整皮膚家兔和破損皮膚家兔的行為、活動、飲食、皮毛光澤、呼吸中樞、神經系統和體重無任何不良影響，無一家兔死亡。7日后處死家兔，解剖觀察其心、肝、脾、肺、腎等主要臟器未見異常。詳細結果見表1。

2.2 家兔皮膚刺激性試驗結果

玄丹巴布劑高、中、低三個劑量組對家兔完整皮膚未發現紅斑和水腫反應，對家兔破損皮膚也未發現明顯的紅斑和水腫反應，平均分值均小于0.5。組織學檢查與空白對照組比較，其貼敷部位的局部組織的病理學檢查無異常變化。對照《新藥臨床前研究指導原則》中《皮膚刺激性強度評分標準》，判定玄丹巴布劑多次給藥對完整及破損皮膚均無刺激性(平均反應分值范圍<0.50)。具體結果見表2。

2.3 豚鼠皮膚變態反應試驗結果

玄丹巴布劑和賦形劑組均未見紅斑及水腫等過敏現象，說明玄丹巴布劑對豚鼠皮膚無變態反應，詳細結果見表3。

3 討論

中藥、天然藥物制劑急性毒性、刺激性及皮膚過敏性的實驗研究是新藥臨床前安全性評價的重要組成部分。安全、有效是臨床用藥的關鍵，隨著制藥工業科技的飛速發展，新技術、新材料改變了中藥制劑的物質基礎和給藥方式，帶來一些傳統中藥制劑所未曾發生的安全性問題，玄丹巴布劑采用新型的水溶性高分子材料，同時加入了促透劑及交聯調節劑等成分，作為基質與藥物提取液混合制成的外用貼劑，為了保障公眾用藥安全有效，防止意外用藥事故或嚴重不良反應的發生，本文進行了玄丹巴布劑的毒理學研究、經皮膚急性毒性、過敏試驗、皮膚刺激試驗，觀察動物破損皮膚短期內接觸受試藥物所產生的毒性反應；動物皮膚重復接觸受試藥物后，機體免疫系統在皮膚上的反應；動物完整皮膚及破損皮膚接觸受試藥物所產生的刺激反應等，證實其無毒、無皮膚過敏反應，對破損皮膚無不良刺激。經臨床應用證明，其療效確切，安全可靠，為該制劑開發成新藥打下實驗基礎。

參考文獻：

[1] 中華人民共和國衛生部藥政管理局.新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編[M].北京：人民衛生出版社，1994：204~208.

[2] 孫敬方.動物實驗方法學[M].北京：人民衛生出版社，2002：191.

(責任編輯：姜付平)