復(fù)方毛冬青注射液中核苷類(lèi)的測(cè)定

摘 要：目的：建立高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方毛冬青注射液中尿苷、腺苷的含量。方法：使用waters XTerra RP18柱(250mm×4.6mm，5.0μm)，0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈(98：2)為流動(dòng)相，流速lmL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為262nm。結(jié)果：此方法線性關(guān)系良好，腺苷平均回收率為95.32%，RSD為1.0%(n=6)，尿苷平均回收率為99.87%，RSD為0.18%(n=6)。結(jié)論：本方法可用于復(fù)方毛冬青注射液的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：復(fù)方毛冬青注射液；尿苷；腺苷；高效液相色譜法

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-2197(2008)06-032-02

復(fù)方毛冬青注射液是由毛冬青、南板藍(lán)根、魚(yú)腥草、大青葉四味藥材經(jīng)一定的工藝提取制成的注射液。該注射液由廣州市兒童醫(yī)院自行研制，具有消炎解毒的功效，可用于兒童扁桃體炎、淋巴結(jié)炎、腮腺炎、肺炎及病毒感染引起的各種疾病，臨床療效顯著^[1]，其中南板藍(lán)根、大青葉中所含有豐富的腺苷、尿苷，本文采用高效液相色譜法對(duì)復(fù)方毛冬青注射液中所含功效成分腺苷、尿苷進(jìn)行了定性和定量方法的研究。該法靈敏、準(zhǔn)確和重現(xiàn)性好，可作為本品的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Waters 1525系列高效液相色譜儀，waters 2487紫外檢測(cè)器，Breeze色譜工作站。

尿苷對(duì)照品，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)887-200001，含量測(cè)定用)，腺苷對(duì)照品，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)879-200001，含量測(cè)定用)。

乙腈為色譜純(美國(guó)BJ公司)，水為重蒸水，其余為分析純。樣品由廣州市兒童醫(yī)院提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取尿苷、腺苷適量，加水制成對(duì)照品溶液，用紫外分光光度計(jì)記錄其紫外吸收光譜，結(jié)果顯示，腺苷的最大吸收波長(zhǎng)為260 nm，尿苷最大吸收波長(zhǎng)254 nm，在260 nm也有較大吸收，且該波長(zhǎng)附近吸收值穩(wěn)定范圍較寬。因此，選擇260 nm作測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：waters XTerra RP18(250nm×4.6nm，5μm)；流動(dòng)相：0.02%磷酸二氫鉀-乙腈(98：2)；檢測(cè)波長(zhǎng)：262nm；流速：1.0mL/min，進(jìn)樣量為10μL 。理論塔板數(shù)按尿苷峰計(jì)算不低于2500。在此條件下尿苷、腺苷與其它組分峰能達(dá)到很好分離。

2.3 對(duì)照品、供試品溶液和空白溶液的制備

2.3.1 對(duì)照品溶液制備

取經(jīng)P₂O₅減壓干燥24h的尿苷、腺苷對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每lmL分別含58.6μg、40.2μg的溶液。

尿苷對(duì)照品

腺苷對(duì)照品

圖1 尿苷、腺苷對(duì)照品色譜

2.3.2 供試品溶液的制備

直接取復(fù)方毛冬青注射液測(cè)定。

圖2 復(fù)方毛東青注射液色譜

2.3.3 空白溶液的制備

按處方量取毛冬青、魚(yú)腥草的同法制成空白對(duì)照溶液。

圖3 空白溶液色譜

2.4 測(cè)定方法

精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀，測(cè)得色譜峰面積，計(jì)算樣品含量。

2.5 專屬性試驗(yàn)

取空白溶液同法測(cè)定，在尿苷、腺苷對(duì)照品峰相應(yīng)的位置未出現(xiàn)色譜峰，說(shuō)明空白溶液對(duì)尿苷、腺苷的測(cè)定無(wú)干擾。

2.6 線性關(guān)系考察

2.6.1 線性關(guān)系試驗(yàn)

精密稱取10mg的尿苷、腺苷對(duì)照品，精確至0.00001g，用水溶解并定容至100mL，濃度為100μg/mL，作為母液。將腺苷稀釋成0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μg/mL水溶液；將尿苷稀釋成0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0μg/mL水溶液。按確定好的分離條件分別進(jìn)樣，根據(jù)對(duì)照品的濃度和峰面積，經(jīng)化學(xué)工作站或用Excel軟件計(jì)算，得線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。

2.6.2 2種核苷類(lèi)物質(zhì)的線性關(guān)系

根據(jù)儀器分析結(jié)果，2種核苷類(lèi)物質(zhì)的峰面積(Y)對(duì)濃度(y)作圖，并得到相應(yīng)的回歸方程分別為：腺苷Y=63.5970X+1.3829，相關(guān)系數(shù)為0.9999；尿苷Y=742.8820X-0.3838；相關(guān)系數(shù)為1，說(shuō)明上述兩種物質(zhì)在所選的濃度范圍內(nèi)有極好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

取10.0μg/mL的腺苷品，3天內(nèi)不同時(shí)間多次進(jìn)樣，峰面積分別為：8334、8238、8355、8249、8268、8256、8262、8371、8314、8365，平均峰面積為8300.8，RSD為0.62%(n=10)取10.0μg/mL尿苷對(duì)照品，3天內(nèi)不同時(shí)間多次進(jìn)樣，尿苷峰面積為：10700、10460、10712、10647、10639、10730、10679、10465、10763、10659，平均峰面積為10645.4，RSD為0.97%(n=10)。以上結(jié)果說(shuō)明：腺苷、尿苷樣品穩(wěn)定，供試儀器穩(wěn)定且精密度高。

2.8 回收試驗(yàn)

精密量取已知含量的復(fù)方毛冬青注射液精密加入對(duì)照品，按照供試品溶液測(cè)定，計(jì)算腺苷回收率分別為：94.85、94.54、96.30、96.59、94.20和95.45%。其平均回收率為95.32%，RSD為1.0%(n=6)，尿苷回收率分別為：99.71、100.08、99.52、99.29、100.22、100.41%。其平均回收率為99.87%，RSD為0.18%(n=6)

2.9 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取供試品溶液，按以上色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定尿苷的峰面積，結(jié)果RSD為0.37%(n=6)，腺苷的峰面積，結(jié)果RSD為0.85%(n=6)。

2.10 樣品重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批復(fù)方毛冬青注射液按供試品溶液方法經(jīng)多次測(cè)定，其尿苷含量的RSD=0.59%(n=6)，腺苷含量的RSD=1.3%(n=6)。

2.11 樣品測(cè)定

按擬定方法測(cè)定3批樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

3.1 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱比較了waters symmetry Cl8、Zorbax SB C18、waters XTerra RPl8和waters XTerra MS C18 柱，均可得到較好的分離。

3.2 HPLC分析測(cè)定了復(fù)方毛冬青注射液中的尿苷、腺苷

二種核苷類(lèi)活性成分 結(jié)果表明：該方法操作簡(jiǎn)便，具有峰形好，靈敏度高，重復(fù)性好，回收率高等優(yōu)點(diǎn)，適用同時(shí)定量分析復(fù)方毛冬青注射液中核苷類(lèi)成分，可用于復(fù)方毛冬青注射液產(chǎn)品的質(zhì)量控制和綜合評(píng)價(jià)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 黃定群.復(fù)方毛冬青注射液治療上呼吸道感染160例觀察[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)，1997，13(6)：387.

(責(zé)任編輯：王尚勇)