蒙藥那如３味丸中沒食子酸的含量測定

摘 要：目的：建立蒙藥那如3味丸中沒食子酸的含量測定方法 。方法：采用高效液相色譜法測定沒食子酸的含量。色譜柱為Diamonsil-C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為甲醇-0.2%磷酸(5∶95)，流速為0.8mL/min，檢測波長為268nm，柱溫為25℃ 。結(jié)果：經(jīng)過方法學考察，沒食子酸含量測定方法具有一定的專屬性、準確性、重現(xiàn)性和可行性，樣品在0.44~4.4μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為100.4%，RSD為0.54%。結(jié)論：本方法簡便、準確、分離效果好、線性范圍寬、靈敏度高，可用于本品的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；那如3味丸；沒食子酸

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1673-2197(2008)06-034-02

蒙藥那如3味丸由訶子、制草烏、蓽茇組成，具消“粘”，消腫，燥“協(xié)日烏素”，祛風、止痛、散寒的功效^[1]。蒙醫(yī)理論認為訶子可解草烏毒^[2]，并且訶子在本方中占有的比重最大，因此對訶子中化學成分的含量測定尤為必要。訶子中含有大量酸性成分，尤以沒食子酸含量居高，因此我們以沒食子酸為訶子的定量指標進行含量測定，保證臨床用藥安全有效。

1 儀器和試藥

Waters 2695高效液相色譜儀，包括二級管陣列檢測器、進樣器、柱溫箱；沒食子酸對照品(批號：110831-200302，供含量測定用，購于中國藥品生物制品檢定所)；那如3味丸(內(nèi)蒙古民族大學附屬醫(yī)院制劑室提供)；所用試劑甲醇為色譜純，水為超純水，其它為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

準確稱取沒食子酸對照品1.1mg，置于5mL量瓶中，加甲醇溶解，定容，即得。

2.2 供試品溶液的制備

稱取蒙藥那如3味丸1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇30mL，密塞，搖勻，超聲處理30min，取出，濾過，溶劑蒸干，用甲醇定容至10mL量瓶中，即為供試品溶液。

2.3 陰性對照溶液的制備

按處方比例及制備工藝，制備無訶子的陰性樣品，按供試品溶液方法制備。

2.4 色譜條件^[3]

色譜柱：Diamonsil-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-0.2%磷酸(5：95)；流速：0.8mL/min；檢測波長：268nm；柱溫：25℃，色譜詳見圖1。

圖1 沒食子酸、那如3味丸、制草烏陰性藥材的HPLC圖

2.5 方法學考察

2.5.1 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對照品溶液 2.0、6.0、10.0、16.0、20.0μL注入液相色譜儀，測定其峰面積，以峰面積值(Y)作縱坐標，進樣量(X)作橫坐標，繪制標準曲線，并進行線性回歸，得回歸方程為：Y=4*106x+203329，r=1.0000；結(jié)果表明：在0.44~4.4μg范圍內(nèi)，沒食子酸的峰面積與進樣量有良好的線性關(guān)系。

2.5.2 精密度試驗

精密吸取對照品溶液10mL，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，依法測定，記錄峰面積積分值分別為8020506，8027913，7836674，7864518，7859055，7882866，RSD=1.11%，精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液各10mL，每隔4h分別注入液相色譜儀，依法測定，記錄峰面積積分值分別為9825322，9834933，9934211，9335462，9918586，9802296，9882279，結(jié)果在24h內(nèi)峰面積無明顯變化，RSD=2.15%。

2.5.4 重現(xiàn)性試驗

取同一批號蒙藥那如3味丸6份，按供試品溶液項下制備，依法獨立測定，計算樣品含量，以考察本法的重現(xiàn)性，結(jié)果含量分別為4.736mg·g^-1，4.713mg·g^-1，4.742mg·g^-1，4.772mg·g^-1，4.67mg·g^-1，4.666mg·g^-1，平均值為4.717mg·g^-1， RSD為0.89%，表明重現(xiàn)性很好。

2.5.5 回收率試驗：精密稱取已知沒食子酸含量的供試品6份，每份分別加入沒食子酸對照品適量，按“2.2”項方法進行制備，依法測定，計算回收率，結(jié)果詳見表1。

2.6 樣品測定

取三批那如3味丸，按“2.2”項方法制備供試品溶液，按“2.4”項色譜條件進樣測定，根據(jù)沒食子酸的線性回歸方程，對蒙藥那如3味丸提取液中的成分含量進行計算，結(jié)果分別為4.700mg/g，4.655mg/g，4.712mg/g，平均值為4.689mg/g，RSD為0.64%。

3 小結(jié)

采用高效液相色譜法測定蒙藥那如3味丸中沒食子酸的含量，沒食子酸在0.44~4.4μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，加樣平均回收率為100.4%，RSD為0.56%。本法簡單，快速，結(jié)果準確，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

參考文獻：

[1] 中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準.蒙藥分冊[M].1998：98.

[2] 王夢德，張述禹，包存剛，等.訶子對草烏水煎液雙酯型二萜類生物堿溶出率的影響[J].中國民族醫(yī)藥，2001，7(3)：29~30.

[3] 潘國慶，盧永昌，德吉措姆.HPLC測定藏成藥七味訶子散中沒食子酸[J].中草藥，2006，37(9)：1350~1351.

(責任編輯：王尚勇)

Determination of Gallic Acid in Naru-Sanwei Pill

XIN Yang，WANG Shumin，LIU Zhiqiang

(1.Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China；

2.Changchun lnstitute of Applied Chemistry，Chinese Academy of Sciences，Changchun 130022，China)

Abstract：Objective：To establish a method for determining the content of the Gallic acid in Naru-sanwei Pil1.Method：HPLC was adopted to determine the content of Gallic acid on Diamonsil-C18(250mm×4.6mm，5μm) column with methanol-0.2%Phosphoric acid(5：95) as mobile phase，the velocity of flow was 0.8ml/min，the detection wavelength was 268nm，column temperature was 25℃.Results：The linear range of Gallic acid was 0.44~4.4μg and the average recycle rate of the added sample was 100.4%，RSD was 0.54%.Conclusion：The method is convenient and accurate with satisfactory separation effect，wide linear range，and high sensitivity，and available for quality control of this leechdom.

Key Words：HPLC；Naru-sanwei Pill；Gallic acid.