ＨＰＬＣ測定復方益母草流浸膏中梓醇含量

摘 要：目的：建立復方益母草流浸膏中梓醇的含量測定方法，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法：采用高效液相色譜法對復方益母草流浸膏中梓醇的含量進行測定，Hypersil C₁₈柱(4.6 mm×200 mm，5μm)；流動相：乙腈-0.05 moL·L^-1KH2PO₄溶液(2∶98)；檢測波長：205 nm；流速0.8 mL/min；柱溫：25℃。結(jié)果：標準曲線為Y=-0.02688 X+30.179，r=0.9995，梓醇在0.1mg·mL^-1~1.0mg·mL^-1之間線性關(guān)系良好，平均回收率為98.60%，RSD%=1.16%(n=5)。結(jié)論：該法簡便、靈敏、準確，可用于復方益母草流浸膏的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：復方益母草流浸膏；HPLC；梓醇

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1673-2197(2008)06-044-02

復方益母草流浸膏出自中華人民共和國衛(wèi)生部中藥成方制劑(第十九冊WS3-B-1791-94)，由益母草、熟地黃、當歸組成，具有調(diào)經(jīng)活血、祛瘀生新的作用，為治療月經(jīng)不調(diào)的常用方。多年的臨床應(yīng)用表明復方益母草流浸膏是一個療效好，作用確切，副作用小的治療月經(jīng)不調(diào)的代表方劑，具有廣闊的應(yīng)用前景。為更有效地控制其內(nèi)在質(zhì)量，保證療效，本文采用高效液相色譜法測定方中梓醇的含量。

1 儀器與試藥

Agilent1100型液相色譜儀，DAD紫外檢測器；Agilent1100 色譜工作站(美國)；超聲波清洗器(CQ-250型)。

梓醇(批號：110808-200508，中國藥品生物制品檢定所)，復方益母草流浸膏(北京市東升藥業(yè)有限責任公司，自購)，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Hypersil C₁₈柱(4.6mm×200mm，5μm)；流動相：乙腈-0.05moL·L^-1KH2PO₄溶液(2∶98)；檢測波長：205nm；流速0.8mL·min^-1；柱溫：25℃。理論板數(shù)按梓醇峰計算應(yīng)不低于5000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的梓醇對照品10mg，精密稱定，置10ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

稱取復方益母草流浸膏樣品2g，精密稱定，置25ml量瓶中，加50%乙醇適量超聲提取20min，放冷，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過微孔濾膜(0.45μm)，即得。

2.4 陰性對照品溶液的制備

取缺熟地藥材的陰性樣品，照2.3項下方法制備陰性對照品溶液，即得。

2.5 標準曲線的繪制

精密吸取梓醇對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，置1mL棕色量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得。取20μL進樣，以梓醇的峰面積為縱坐標，以梓醇的濃度(mg·mL^-1)為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程Y=-0.02688X+30.179，r=0.9995，梓醇的濃度在 0.1mg·mL^-1~1.0mg·mL^-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 系統(tǒng)適用性試驗

精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各20μl，按2.1項下所述色譜條件注入液相色譜儀中測定，記錄色譜圖。結(jié)果表明：在梓醇對照品相應(yīng)色譜保留時間位置上，供試品溶液有相應(yīng)的色譜峰與之對應(yīng)，而陰性無干擾。

2.7 精密度試驗

精密吸取2.2項下對照品溶液20μl，按2.1項下色譜條件重復進樣6次，記錄峰色譜圖，結(jié)果峰面積分值的相對標準差(RSD)為1.72%，表明儀器精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取2.3項下溶液0，2，4，6，8，10h時，按2.1項下色譜條件分別進樣20μl，按梓醇的峰面積計算，結(jié)果峰面積積分值的RSD為2.34%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重現(xiàn)性試驗

取同一批樣品(批號：070503)5份，分別按2.3項下方法制備成供試品溶液，并按2.1項下色譜條件進樣20μl。結(jié)果樣品中梓醇含量的平均值為0.229mg·g^-1(RSD=0.94%，n=5)，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.10 回收率試驗

精密稱取經(jīng)同法測定，己知含量的同批(批號：070504)樣品5份，每份1g，再分別準確加入梓醇對照品適量，按2.3項下方法制備成供試品溶液，按2.1項下色譜條件分別進樣20μl，測定峰面積積分值，計算回收率，結(jié)果表明，該方法回收率良好，RSD=1.18%，結(jié)果詳見表1。

2.11 樣品測定

按照上述方法和色譜條件測定3批樣品中梓醇含量，結(jié)果為0.229mg·g^-1、0.235mg·g^-1、0.232mg·g^-1。見圖1、圖2。

圖1 梓醇對照品色譜圖

圖2 梓醇樣品色譜圖

3 討論

(1)實驗結(jié)果表明，本文建立的高效液相色譜法測定梓醇的含量測定方法，能夠快速、有效地分析復方益母草膏方藥中梓醇的含量。

(2)梓醇在紫外區(qū)為末端吸收，吸收值低，干擾大，根據(jù)文獻報道^[1，3]，通過多次試驗，波長為205nm時梓醇的吸收峰較大且干擾小，效果滿意。在流動相的選擇中，比較了水-甲醇系統(tǒng)、水-乙腈系統(tǒng)、乙腈-0.05moL·L^-1KH2PO₄溶液和直接用水為流動相等多種情況，發(fā)現(xiàn)水-甲醇系統(tǒng)梓醇對照品峰始終為雙峰，水-乙腈系統(tǒng)梓醇對照品峰形較好，但與其它峰分離欠佳，而選用乙腈-0.05 moL·L^-1KH2PO₄溶液，在樣品分析中梓醇與其它峰均能達到基線分離，保留時間適中，柱效最高，因而選用乙腈-0.05moL·L^-1KH2PO₄溶液為流動相。

參考文獻：

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(責任編輯：姜付平)