中藥絞股藍提取液對抗小鼠皮膚衰老的實驗研究

[摘要]目的:研究中藥絞股藍提取液對老齡小鼠皮膚組織的影響，判斷絞股藍提取液在減輕小鼠皮膚自然老化方面的作用。方法：為健康昆明種老齡小鼠灌胃給藥絞股藍提取液，30天后觀察小鼠皮膚組織超微結構改變，并以生化分析方法測定H2O2含量及SOD活性。結果:給藥絞股藍后，小鼠皮膚組織中SOD活性明顯增強，H2O2含量降低，同時病理切片示其皮膚衰老狀態有所改善。結論:絞股藍提取液有改善老齡小鼠皮膚衰老的作用。

[關鍵詞]絞股藍；皮膚；延緩衰老；超氧化物歧化酶；過氧化氫

[中圖分類號]R758.42[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455（2008）06-0905-03

The Chinese native medicine G.Pentaphyllum extraction resistancemouse skin senile experimental study

YIN Ying，WU Jing-dong，GU Wei

(Department of Cosmetic，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang110032，Liaoning，china）

Abstract： ObjectiveChinese Gynostemma gavage study on aging mice extract skin tissue hydrogen peroxide (H2O2) content， superoxide dismutase (SOD) activity， and the ultrastructure of mouse skin，Judge Gynostemma extract of mouse skin in reducing the role of natural aging. Methods Kunming with healthy aging mice as subjects， administration Gynostemma extract， 30 days after the skin of mice ultrastructural changes， and biochemical analysis of H2O2 content and the activity of SOD. ResultsAdministration Gynostemma， mouse skin tissue SOD activity was significantly enhanced， H2O2 content decreased significantly， while pathological aging skin biopsy revealed that its state has improved. Conclusions Gynostemma extract to improve aging skin aging mice role.

Key words：G.Pentaphyllum；skin；delay growing old；superoxide dismutase；perhydrol

皮膚衰老是因增齡所出現的皮膚老化外貌，臨床上常表現為皮膚干燥、粗糙、脫屑增多，敏感性和脆性增加；皮膚松弛、皺紋增多，皮膚萎縮、血管突顯等[1]。隨著生活品質的提高，人們越來越注重外表美，預防和延緩皮膚衰老已成為生命科學研究的熱點之一[2]。現代藥理研究證明中藥絞股藍具有抗衰老、提高機體清除自由基能力、降低機體自由基含量等作用，而絞股藍作為一種抗衰老的中藥至今沒有其抗皮膚自然衰老方面的報道，因此，我們采用中藥絞股藍提取液對抗小鼠皮膚衰老做了實驗研究，現將結果報道如下。

1材料和方法

1.1實驗動物：健康3月齡小鼠10只，體重29～31g，作為青年對照組；12月齡小鼠30只，體重48～53g，隨機平均分為三組：老年空白對照組、老年陽性藥對照組、老年給藥組。所有實驗用鼠均為雌性昆明種小鼠，由遼寧中醫藥大學實驗動物中心提供。

1.2實驗藥物：8%硫化鈉溶液，醫用生理鹽水，維生素E，絞股藍提取液（自行配制）。

1.3實驗方法：青年對照組灌胃生理鹽水，老年空白對照組灌胃生理鹽水，老年陽性藥對照組灌胃維生素E，老年給藥組灌胃絞股藍提取液。以上操作每天2次，實驗共計30天。第31天將所有實驗用鼠用8%硫化鈉溶液進行背部脫毛（面積為3cm×3cm）并取下背部脫毛處的全層皮膚（不含皮下脂肪）待行指標測定。

1.4指標測定：皮膚組織SOD活性的測定采用黃嘌呤氧化酶法，皮膚組織H2O2含量的測定采用化學比色法。病理標本光鏡下觀察結構變化，高級系統生物顯微鏡下攝片。所用儀器為系統生物顯微鏡OLYMPUS BX50F4北航病理圖像分析系統。 1.5統計學處理：所有數據均通過SPSS11.5 軟件進行處理，各組實驗參數以x±s表示。組間差異按方差分析進行顯著性檢驗，并用最小顯著差法（LSD法）作兩兩比較。

2結果

2.1皮膚組織中SOD活性及H2O2含量測定：老年陽性對照組、老年給藥絞股藍組的SOD活性均明顯高于老年空白對照組，且均有統計學意義（分別是P<0.01，P<0.01）；老年陽性對照組及老年內服絞股藍組的H2O2含量明顯低于老年內服空白組，且均有統計學意義（分別是P<0.01，P<0.01）；說明內服維生素E及內服絞股藍均可使小鼠皮膚組織中SOD活性升高而H2O2含量減少。結果見表1～2。

2.2皮膚組織形態學檢查結果顯示：在光鏡（×100）下觀察小鼠皮膚的病理學改變，正常青年對照組（見圖1），小鼠表皮組織結構完整，細胞分層清晰，皮膚厚度正常，具有明顯的表皮突及真皮乳頭；真皮層可見波浪狀纖維組織，排列有序、分布均勻，疏密有致，細胞成分及數量適中。老年空白對照組（見圖2），小鼠的表皮組織變薄，結構不完整，分層不清，表皮與真皮交界呈直線狀，表皮突及真皮乳頭消失；纖維組織因發生變性、破壞可見真皮組織排列紊亂，分布不均，或稀疏，有較多的炎性細胞浸潤。老年陽性對照組（見圖3）、老年給藥組（見圖4）、小鼠皮膚組織形態比較相近，表皮組織結構比較完整，細胞分層比較清晰，皮膚厚薄不甚均一，有表皮突及真皮乳頭；真皮層可見波浪狀纖維組織，排列有序，分布較為均勻，細胞及數量適中，有少量炎性細胞浸潤。說明維生素E、絞股藍提取液均能改善自然衰老小鼠皮膚組織的受損程度。

3討論

皮膚老化由內源性和外源性多種因素引起，是一個相當復雜的過程[3]。從現代研究來看，與皮膚衰老密切關聯的有衰老的自由基學說，測定皮膚衰老較常見的且可說明問題的指標也多從這個方面選取[4]。自由基性質活潑，極不穩定，容易與其他物質進行氧化反應，生物氧化過程的產物之一有H2O2。H2O2可以氧化某些具有重要生理作用含巰基的酶和蛋白質，使之喪失活性，還可將細胞膜磷脂分子中高度不飽和脂肪酸氧化成過氧化物，產生過氧化脂質，后者又通過自身催化作用連續生成大量過氧化物，結果使磷脂的功能障礙，對生物膜造成嚴重損傷。健康機體同時還存在著強大的防護機制對抗自由基的損傷：一方面是對已損傷大分子修復機制，如谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）可隨時使氧化變性的大分子還原恢復其功能；另一方面是清除機制，如體內維生素E、過氧化氫酶（CAT）是過氧化物的清除劑，尤其是超氧化物歧化酶（SOD），是最有效的抗氧化劑和自由基清除劑。根據自由基學說，本項研究通過測定絞股藍對自然衰老小鼠皮膚中SOD活性及H2O2含量的影響，來推斷及探討絞股藍抗皮膚衰老的作用及其具體的生物學機理。

自然老化皮膚組織學上也出現了一些改變：①表皮厚度變薄，表皮突變淺，表皮與真皮連接變平坦、松弛；②真皮中膠原纖維、彈性纖維數量減少、排列不規則，且常斷裂成碎片；③皮膚附屬器：汗腺數目減少且分泌功能減退，汗腺內脂褐質沉積增多。皮脂腺數量有所增加但分泌量減少。甲板變薄變脆，無光澤。顏面和頭發的毛囊分布密度下降，毛發脫落和脫色，一般來說毛干的直徑變細（終毛轉化為毳毛），但是在某些部位如男性的耳朵、鼻子和眉毛以及女性的上唇和下頜的毳毛轉變為影響美容的終毛；④皮膚血管變細，神經末梢異常；⑤皮下脂肪層變薄。同時，配合光鏡下觀察實驗小鼠皮膚組織超微結構更直觀的證實實驗結論[5]。

中藥絞股藍（Fiveleaf Gynostemma Herb）為葫蘆科植物絞股藍的全草，為葫蘆科絞股藍屬多年生草質藤本植物。其藥性屬于平性偏溫，歸肺、脾、腎經。功用主要包括：益氣健脾、補腎溫陽、延緩衰老、抗疲勞、養心安神、滋補強壯、解毒等[6]。現代大量藥理實驗及臨床研究表明，絞股藍具有延緩衰老、抗疲勞、抗潰瘍、抗腫瘤、抗突變、抗誘變、增強機體免疫力、保護并提高機體抗氧化及自由基清除能力、降低自由基含量、降血脂、改善血流動力學、抗血栓形成、并具有雄性和雌性激素樣作用。它富含人體所需的多種氨基酸、維生素和微量元素，有與人參相同和高于人參的高級營養成分，但目前尚沒有關于絞股藍延緩自然衰老的具體研究，本實驗就是檢測絞股藍在延緩皮膚自然老化方面的作用。

本實驗使皮膚衰老的自由基損傷學說進一步得到驗證：皮膚呈現老化以及皮膚的生物學功能的減退，與增齡引起的自由基產生過多，抗氧化酶活性降低密切相關。從而證實了通過減少自由基的產生和清除皮膚老化代謝產物，提高抗氧化酶活性確實是目前預防和治療皮膚老化的方法之一。其次，從本次實驗的結果來看，絞股藍對提高老齡小鼠皮膚中SOD的活性、降低皮膚中H2O2含量具有明顯的影響，這說明絞股藍可能通過兩種途徑（一是通過提高SOD活性來起作用，一是其自身具有一定的抗氧化能力）達到清除自由基并減少自由基產生的目的，從而減少自由基對皮膚中各種大分子的影響。

[參考文獻]

[1]丁克祥.老年人皮膚生物學年齡的標志及其評價[J].國外醫學老年醫學分冊，1999，20（3）：131-134.

[2]王紅麗，吳 鐵.皮膚衰老分子生物學機制的研究進展[J].國外醫學皮膚性病學分冊.2003，13（3）：114-117.

[3]馮燕艷，普雄明.皮膚自然衰老與光老化[J].國外醫學皮膚性病學分冊，2004，30(6):354-356.

[4]周鴻波.皮膚老化及其免疫學、自由基損傷學說的研究進展[J]. 遼寧中醫雜志，2004，3（3）：123.

[5]劉承煌.皮膚病理生理學[M].北京：中國醫藥科技出版社，1991:378-383.

[6]李儀儒，李立娜.絞股藍的綜合研究[J].天津藥學，1998，10(3):8-10.

[收稿日期]2008-03-26 [修回日期]2008-06-06

編輯/李陽利