ＨＰＬＣ法測定心可寧滴丸中丹酚酸Ｂ的含量

摘 要：目的：對中藥復方制劑心可寧滴丸中的丹酚酸B進行含量測定。方法：采用高效液相色譜法，以乙腈-0.1％磷酸水液（21.5∶78.5）為流動相；檢測波長為286nm。結果：丹酚酸B在0.196～1.960 μg范圍內均與色譜峰面積呈良好的線性關系，r為0.99996，平均加樣回收率為97.83%（N＝5），RSD=3.33%。 結論：本方法快速簡便，靈敏度和穩定性高，為心可寧滴丸的質量標準奠定了良好的基礎。

關鍵詞：高效液相色譜；心可寧滴丸；丹酚酸B

心可寧滴丸為衛生部藥品標準中藥成方制劑第九冊（WS3B171494）收載的中成藥經過改劑而成，由丹參、三七、冰片、蟾酥等八味中藥組成，主要用于治療冠心病、心絞痛、胸悶、心悸、眩暈等癥^［1］。中國藥典2005年版一部中，丹參藥材增加了水溶性有效成分丹酚酸B的含量測定^［2］。由于心可寧滴丸制備工藝中丹參采用水提，故為了更好地控制產品質量，保證用藥安全、有效，采用了高效液相色譜法對丹酚酸B含量進行測定，為心可寧滴丸的質量提高奠定了良好的基礎，報道如下。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

儀器：Agilent1100高壓液相色譜儀系列（美國），Sartorius BP211D電子分析天平（德國），電熱恒溫水浴鍋（北京市醫療設備廠），超聲清洗器（北京醫療設備二廠），丹酚酸B對照品（中國藥品生物制品檢定所111562200403），心可寧滴丸（自制，批號分別為20070401、20070301、20070312）；試劑：乙睛為色譜純，甲醇、磷酸等其它試劑均為分析純，水為三蒸水。

12 方法與結果

1.2.1 色譜條件

Agilent Hypersil ODS（4.6mm*150mm，5μm）；乙腈－0.1％磷酸水液（21.5∶78.5）為流動相；檢測波長為286nm。流速1.0ml/min，柱溫25℃。理論塔板數按丹酚酸B峰計應不低于5000。

1.2.2 對照品溶液的制備

稱取丹酚酸B對照品，置量瓶中，加水溶解，制成0.098mg/mL的溶液，搖勻，即得。

1.2.3 供試品溶液的制備

取心可寧滴丸適量，碾碎，取約0.4g，精密稱量，置于100ml具塞錐形瓶中，加入水50ml稱重，超聲處理90min（250W，30kHz），取出，放冷，再稱重，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液10ml，取續濾液過0.22um微孔濾膜，即得供試品溶液。

1.2.4 陰性對照溶液的制備

取缺丹參藥材的配方混合物，按照供試品溶液的制備方法同法制備成溶液，作為陰性對照品。

1.3 方法學考察

1.3.1 標準曲線的繪制

分別吸取對照溶液2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、15μl、20μl注入色譜儀，以峰面積積分值（mAU*s）對進樣量（μg）進行回歸，得回歸方程：Y=496.321X-3.078，r=0.99996，結果表明，丹酚酸B在0.196～1.96 μg范圍內與色譜峰面積呈良好的線性關系。

1.3.2 穩定性試驗

取同一批號供試品溶液，分別在0、2、4、8、16、24h的不同時間點進行測定，考察保留時間和峰面積的一致性，丹酚酸B的平均保留時間為11.69min，RSD為0.047%，平均峰面積為487.2 mAU*s，RSD為0.12%。

1.3.3 精密度試驗

取上述對照品溶液，連續進樣5次，考察色譜峰保留時間和峰面積的一致性。丹酚酸B的平均保留時間為11.64min，RSD為0.11%，平均峰面積為486.4mAU*s，RSD為0.25%。

1.3.4重現性試驗

取同一批號供試品，稱取5份，同法提取，檢測，考察色譜峰保留時間和峰面積的一致性。丹酚酸B的平均保留時間為11.62min，RSD為0.34%，平均峰面積為486.5 mAU*s，RSD為131%。

1.3.5 回收率試驗

取同一批號已測知含量的樣品0.2g 5份，精密稱定，分別準確加入1.20mg/mL對照品溶液各1mL，按供試品溶液制備方法進行提取，分別取10μL進樣，測定，計算回收率，結果得到丹酚酸B平均加樣回收率為97.83%，RSD=3.33%。見表1。

1.3.6 供試品的測定

分別取20070401、20070301、20070312批樣品0.4g，精密稱定，按供試品制備方法制備成供試品溶液，精密吸取供試品溶液10L，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，結果得到丹酚酸B含量分別為6.27mg/g、6.26mg/g、6.24mg/g。

2 討論

在含有丹參的中藥制劑中，特別是水提取工藝中，對丹參中的丹酚酸B進行含量測定對保證藥品的安全、有效是必要的。曾以中國藥典2005版一部丹參項下的流動相進行分析，結果分析時間較長，峰塔板數相對較低一些，而采用本文所述條件得到很好的分析效果，分析速度快，陰性無干擾。

采用甲醇、乙醇回流提取、甲醇超聲和水超聲提取等方法，以水溶液進行直接超聲提取，避免了脂溶性成分對分離的干擾，丹酚酸B峰分離度好，峰塔板數高，且回收率良好；甲醇提取后蒸干再用水溶解進樣分離，效果和水液基本一致，但操作繁瑣一些，且回收率低于水提，故而確定丹酚酸B的含量測定采用水溶液直接超聲提取。提取時間的選擇采用水超聲30、60、90、120min后進行考察測定，結果顯示，在90min后提取基本完全，回收率考察達到了97.83％。

本文方法簡便準確，穩定性、重現性好，為心可寧滴丸的質量控制和標準建立奠定了良好基礎。

參考文獻：

［1］ 劉東輝，李軍，黃意甜.高效液相色譜法測定心可寧膠囊中華蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量［J］中國實驗方劑學，2005，11（6）：26.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S］北京：化學工業出版社，2005.

（責任編輯：杜 靖）

Determination of Salvianolic Acid B in XinKening Drop Pills by HPLC

Abstract：Objective：To establish a method to determine salvianolic acid B in xinkening drop pills. Methods： The RpHPLC method was applied with Acetonitrile and 0.1％ H₃PO₄ water as mobile phase（21.5：78.5）， with detection wavelength at 286nm. Results： In the range from 0.196 to 1.960 μg， salvianolic acid B was in a good line with chromatograph peaks area，r=0.9996， the average recovery ratio is 97.83%（N=5），RSD=3.33%. Conclusions： The method is quickly simple with a high intelligent degree and stabilities. The method could be used to control quality effectively as a good base.

Key words：HPLC； XinKening Drop Pills； Salvianolic acid B