紅花對ＡＤＰ給藥家兔血小板聚集率的影響

摘 要：目的：探討紅花活血化瘀的作用機理，研究紅花各部位對ADP誘導的血小板聚集率的影響及各部位濃度與血小板聚集抑制作用的量效關系。方法：以不同濃度的紅花水提、醇提及多糖部位對家兔體外給藥，分別測定ADP誘導的血小板聚集率。結果：紅花在體外對ADP誘導的血小板聚集有一定的抑制作用，醇提部位和多糖具有濃度依賴性的抑制作用，其作用強度隨著紅花劑量的增加而增強。結論：紅花各部位對抑制血小板聚集均有效，但抑制率并不呈線性關系。

關鍵詞：紅花；ADP；血小板聚集率

紅花（Carthamus tinctorius L）是傳統的活血化淤中藥，臨床上用于活血通經、去淤止痛、跌打損傷等。動脈血栓形成是缺血性心、腦血管疾病和其它血栓栓塞性疾病發病的重要環節，血小板聚集是動脈血栓形成的重要誘因，因此，抑制血小板聚集是臨床上防治心腦血管疾病的重要手段之一。許多具有活血化淤作用的中藥都含有抑制血小板聚集的有效組分，對血小板聚集率的影響多集中在水部位。本研究在相同的實驗條件下，對紅花水提液、紅花醇提液和紅花多糖成分的抗ADP誘導的血小板聚集率進行了量效關系的分析。

1 材料與方法

1.1 實驗儀器

JA1203上皿電子天平，上海天平儀器廠生產；PAPERI型血小板聚集及血凝測定儀，北京世帝科學儀器公司生產；LDZ52離心機，北京醫用離心機廠生產；XSP13型光學顯微鏡，南京江南光學儀器廠生產。

1.2 藥物

紅花水提液、紅花醇提液、紅花多糖（實驗室制備，配成1g/ml，給藥前稀釋），曲克蘆丁注射液（天津藥業焦作有限公司生產），枸櫞酸鈉（上海化學試劑研究所生產），4 5′腺苷二磷酸二鈉鹽（ADP）（上海楷洋生物技術有限公司生產），氯化鈉注射液（南京小營制藥有限公司生產），磷酸鹽緩沖液（PBS）（中杉金橋生物技術有限公司生產），鹽酸普魯卡因注射液（上海旭東海普藥業有限公司生產）。

1.3 藥物和試劑配制方法

曲克蘆丁：取50mg/ml的曲克蘆丁注射液，用氯化鈉注射液稀釋至48mg/ml，4℃保存。

3.8％檸檬酸鈉溶液：取枸椽酸鈉3.8g，置于80ml雙蒸餾水中，不斷攪拌，待完全溶解后再加入雙蒸餾水至100ml，4℃保存。

ADP：取ADP 4.7mg，置5ml PBS緩沖液中，震蕩至完全溶解再加PBS緩沖液至6.525ml，先配成0.72mg/ml的保存液，分裝于具塞密封管，0.2ml/支，-20℃保存，臨用前以0.1mol/L PBS緩沖液做5倍稀釋即可。

1.4 實驗動物

新西蘭家兔，由江寧縣湯山青龍山動物繁殖場提供。

2 實驗方法與結果

2.1 實驗方法

2.1.1 血小板制備

家兔頸動脈取血，以3.8%枸櫞酸納抗凝（血∶抗凝劑=9∶1），收集于離心管中，以1000r/min離心10min后取上清液，得富血小板血漿（PRP），余下部分以3000r/min離心10min后取上清液，得貧血小板血漿（PPP）。用PPP稀釋PRP使血小板數目為360×109/ L。

2.1.2 體外血小板聚集實驗

啟動血小板聚集儀預熱30min，分別取250μl PRP加入測試杯中，分別加入藥液10μl，在37℃預溫槽中預熱1min，然后放入測試孔，按“開始”鍵，立即加入10μl誘導劑。測最大聚集率。空白對照組以等量生理鹽水代替，同法操作。

抑制率（%）=

空白對照組最大聚集率－給藥組最大聚集率空白對照組最大聚集率×100%

2.2 實驗結果

紅花水提、醇提和多糖部位均有一定的抗血小板聚集作用，醇提部位和多糖具有濃度依賴性的抑制作用，但并不呈線性分布，水提部位在給藥濃度為24mg/ml時抑制率達到最大，再提高濃度抑制率略有下降。

3 討論

實驗結果表明，紅花各部位對體外ADP誘導的血小板聚集均有抑制作用，水提部位主要活性成分為紅花黃色素類的多種查爾酮苷混合物^［1，2］，尤以羥基紅花黃色素A為主，抑制率達到38.18%，后呈下降狀態，作用相比醇提和多糖部位并不突出，只在12mg/ml濃度時占優勢。可能是由于水提部位的制備采取的是熱提的方式，并不是一般紅花黃色素類的冷浸提取法^［3］，對其中黃酮類成分造成了一定程度的破壞所致。中藥的服用多采取煎煮的方法，因此對熱提條件下化學部位藥效作用的研究具有一定的意義。

紅花醇提部位和多糖部位的抑制率隨著濃度的增加而增強，呈良好的藥效作用，但不以線性關系分布，有研究表明，紅花醇提物抗PAF誘導的血小板聚集作用比水提液強^［4］，尚待進一步研究考察。動植物藥醇提及多糖成分對血小板聚集率的影響多有報道，但仍相對較少，研究前景廣闊。

參考文獻：

［1］ 李中原，涂秀華.紅花黃色素的藥理研究進展［J］.中藥新藥與臨床藥理，2005，（16）：153156.

［2］ 高其銘.紅花的藥理研究進展與其歸經功效關系的探討［J］.中成藥研究，1983，（12）：3133.

［3］ 黃正良，高其銘，崔祝梅.紅花黃色素的毒理學研究［J］.甘肅醫藥，1983，（4）：22.

［4］ 臧寶霞. 山柰酚拮抗血小板活化因子與其受體結合的作用［J］.中國中藥，2004；29（8）：789791.

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（責任編輯：杜 靖）