臺(tái)灣杉ＤＮＡ提取及ＲＡＰＤ反應(yīng)體系的建立

摘要：臺(tái)灣杉富含多糖和多酚等物質(zhì)，這對(duì)獲取高質(zhì)量的DNA造成了困難，采用常規(guī)CTAB法和改良的CTAB法分別對(duì)臺(tái)灣杉DNA的提取進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，常規(guī)CTAB法提取的DNA含雜質(zhì)多、難溶解、易降解；改良的CTAB法提取的DNA質(zhì)量高，A₂₆₀/A₂₈₀比值在1.8左右，每1.0 mg干樣可獲取DNA200—600 ng左右；電泳檢測(cè)表明，所獲得的DNA完整、無降解。通過對(duì)臺(tái)灣彩RAPD—PCR反應(yīng)體系中的各個(gè)影響因素進(jìn)行優(yōu)化，建立了臺(tái)灣杉RAPD擴(kuò)增分析的穩(wěn)定反應(yīng)體系。即20 μL反應(yīng)體系中含IUTaq DNA聚合酶，0.2mmol·L^-1dNTPs，1.8mm01·L^-1。Mg²⁺，0.4μmol·L^-1引物，40 ng模板DNA。應(yīng)用優(yōu)化后的反應(yīng)體系PCR擴(kuò)增獲得的RAPD指紋圖譜，帶型清晰。重復(fù)性好，為進(jìn)一步開展臺(tái)灣杉的保育遺傳學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：臺(tái)灣杉；DNA提取；RAPD；反應(yīng)體系

中圖分類號(hào)：s791.28；Q523⁺.8；Q503 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439—8114(2008)10—1108—03